Applications
ApplicationNotes
ValidatedApplications:
MeDIP:0.1-0.5µlperIP
DB:1:10,000dilution
PublishedApplications:
MeDIP
MeDIP-Seq
ICC/IF
IHC(FFPE)
FC
DB
Seereferencesformoreinformation.Individualoptimizationmayberequired.
Immunogen
This5-Hydroxymethylcytosineantibodywasraisedagainst5-hydroxymethylcytidineconjugatedtoKLHandrecognizes5-hydroxymethylcytosine.
Buffer
Rabbitserumcontaining30%glyceroland0.035%sodiumazide.Sodiumazideishighlytoxic.
References
5-Hydroxymethylcytosine(5-hmC,5-hydroxymethylcytidine)antibodytestedbyMethylDNAimmunoprecipitation.
DNA(25pg)derivedfromthepromoteroftheAPCgenewasspikedinto500ngofhumangenomicDNAandsubjectedtotheMeDIPprocedureusing1μlof5-Hydroxymethylcytidineantibody(5hmC,maroonbars)or1μlofcontrolrabbitIgG(IgG,bluebars).RealtimequantitativePCRwasperformedontheimmunoprecipitatedDNAandresultsplottedas%ofinputDNA.ThespikedAPCDNAcontainedeithernomethylation(DNA),5-methylcytosinemethylation(5-mC)or5-hydroxymethylcytosinemethylation(5-hmC).
5-Hydroxymethylcytosine(5-hmC,5-hydroxymethylcytidine)antibodytestedbydotblotanalysis.
DNAsamples(10ngor50ngasindicated)werespottedontopositivelychargednylonmembraneandblottedwith5-Hydroxymethylcytidineantibodyatadilutionof1:10,000.
TopPanel:DoublestrandedDNA.
BottomPanel:SinglestrandedDNA.
Lane1:UnmethylatedDNA.
Lane2:DNAcontaining5-methylcytosine.
Lane3:DNAcontaining5-hydroxymethylcytosine.
5-Hydroxymethylcytosine(5-hmC,5-hydroxymethylcytidine)antibodytestedbydotblotanalysis.
DNAsampleswerespottedontopositivelychargednylonmembraneandblottedwithantibodiesasindicated.
PanelA:5-Hydroxymethylcytidineantibodyrecognizing5-hydroxymethylcytosine(1:10,000dilution).
PanelB:5-Methylcytidineantibody(1:1,000dilution).
Lane1:DNAderivedfrommouseembryonicstemcells(150ng).
Lane2:DNAderivedfrommousespleen(600ng).
Lane3:27baseoligonucleotidecontaining5-hydroxymethylcytosine(1.2ng).
Lane4:33baseoligonucleotidecontaining5-methylcytosine(2000ng).
Background
ActiveMotifofferstwopolyclonalantibodiesthatrecognize5-hydroxymethylcytosine,awholeserumversion(39769)andapurifiedIgGversion(39791).BotharevalidatedforuseinmethylDNAimmunoprecipitation(MeDIP).ForcustomerswhomustquantitatetheamountofIgGintheMeDIPreaction,thepurifiedIgGversion(39791)isrecommended.Thewholeserumversion(39769)isveryhightitre,soshouldbeusedcarefully(0.1-0.5µlperIP)topreventnon-specificbackground.Thewholeserumversion(39769)hasbeenusedsuccessfullyinimmunofluorescence(IF,Itoetal,2010);thepurifiedIgGversion(39791)islikelytoworkinIFaswell.
DNAmethylationisanepigeneticeventinwhichDNAmethyltransferases(DNMTs)catalyzethereactionofamethylgrouptothefifthcarbonofcytosineinaCpGdinucleotide.Thismodificationhelpstocontrolgeneexpressionandisalsoinvolvedingenomicimprinting,whileaberrantDNAmethylationisoftenassociatedwithdisease.5-methylcytosineisamodifiedbasethatisfoundintheDNAofplantsandvertebrates.
AsecondtypeofDNAmethylationexists,5-hydroxymethylcytosine(5-hydroxymethylcytosine,5-hmC).Thisresultsfromtheenzymaticconversionof5-methylcytosineinto5-hydroxymethylcytosinebytheTETfamilyofcytosineoxygenases.Thisantibodywasdevelopedspecificallytodistinguish5-hydroxymethylcytosinefrom5-methylcytosineasconventionalmethods(enrichmentbyantibodyormethylDNAbindingprotein,enzymaticdigestionandbisulfitesequencing)cannotdoso.ItispossIBLethat5-hydroxymethylcytosine(5-hmC)representsapathwaytodemethylateDNA,as5-hydroxymethylcytosineisrepairedasmismatchedDNAandreplacedwithunmethylatedcytosine.
CompatibleSecondaryAntibodies
ActiveMotifhasdevelopedavarietyofhigh-qualitysecondaryantibodiesformostapplications,withanti-rabbitandanti-mouseconjugatestoabroadlineofhigh-qualityfluorescentmolecules,aswellashorserADIshperoxidase(HRP).VisitourSecondaryAntibodyConjugatespagetofindtheperfectsecondariesforimmunofluorescenceexperimentswith5-Hydroxymethylcytosine(5-hmC)antibody(pAb).
Storage
Antibodiesinsolutioncanbestoredat-20°Cfor2years.Avoidrepeatedfreeze/thawcyclesandkeeponicewhennotinstorage.
Guarantee
Thisproductisguaranteedfor6monthsfromdateofreceipt.
Thisproductisforresearchuseonlyandisnotforuseindiagnosticprocedures.
ApplicationKey
- ChIP=ChromatinImmunoprecipitation;
- DB=DotBlot;
- ELISA=Enzyme-linkedImmunosorbentAssay;
- EMSA=ElectrophoreticMobilityShiftAssay
- FC=FlowCytometry;
- ICC=Immunocytochemistry;
- IF=Immunofluorescence;
- IHC=Immunohistochemistry;
- IP=Immunoprecipitation;
- MeDIP=Methyl-DNAImmunoprecipitation;
- TR-FRET=Time-ResolvedFluorescenceResonanceEnergyTransfer;
- WB=WesternBlotting
ActiveMotif公司是一家致力于细胞生物学和分子生物学研究用试剂的开发和生产的专业公司，是世界上最大的转录因子试剂生产商。其细胞生物学产品涉及：蛋白质转染试剂、氧化一氮定量试剂盒、转录因子ELISA试剂盒、细胞核提取试剂盒、染色试剂、细胞提取物及抗体等；分子生物学产品涉及：mRNA和总RNA的提取、CompetentE.coli(感受态细胞)、E.coli表达系统、蛋白纯化系统、基因快速富集系统、DNA分离纯化系统、CDNA合成、RT-PCR试剂盒以及其他辅助试剂。
随着人类以及其他各种动物、植物、微生物基因组DNA序列的破译，ActiveMotif公司开始致力于细胞功能和调控、基因相互作用及其编码蛋白质的研究，为全球人员提供高质量的产品和优质的服务。近年来，随着癌症发病率的上升，人们越来越多地关注癌症治疗和防治的问题。研究发现，在基因的DNA序列没有发生改变的情况下，通过基因修饰、蛋白质相互作用等改变了遗传基因的功能和特性，并通过细胞分裂和增殖来影响遗传。因此，相关研究主要集中在基因的表达和调控等表观遗传学研究领域。
ActiveMotif公司拥有一系列表观遗传学研究的相关产品，主要包括：染色质免疫共沉淀检测试剂、DNA甲基化检测及收集试剂、组蛋白纯化试剂、检测组蛋白修饰的抗体、组蛋白乙酰转移酶活性检测试剂、核蛋白抽提试剂、有丝分裂指数分析试剂及转录因子ELISA试剂等。
ActiveMotif公司提供创新性的生物技术应用于多个研究领域，其产品对发现、破译和了解复杂的细胞功能提供了有力的帮助，并不断开发新产品，为生物工程领域的研究提供了可靠保证。
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
海正药业致力于研发多个单克隆抗体药物，其中第一个单克隆抗体药物安佰诺有望2014年获批上市,此次批准临床的重组人-鼠嵌合抗CD20单克隆抗体注射液,将为海正药业的单抗事业添砖加瓦。同时,海正药业已于2013年11月申报重磅药阿达木单抗(修美乐)的临床申请，单抗药物行业进入壁垒高，临床治疗效果显著，具有极其广阔的市场前景，容易诞生重磅炸弹级产品 。
希望可以帮到你，望采纳
详细原因细胞生物学产品专家齐氏生物整理如下：
目前，多种表达系统均可实现重组抗体的异源表达，但是抗体药物的产业化制备，始终以动物细胞大规模培养工艺为主。1986年首个治疗性抗体OKT3TM上市之初，动物细胞表达水平普遍不足100mg/L。经过近三十年间发展，业内用于重组抗体生产的动物细胞培养工艺，无论细胞培养密度，还是抗体表达水平均提高五十倍以上。流加培养工艺中细胞密度可达1~2×107 cell/mL，日均产量200mg/L/day以上（最高可达700mg/L/D），最终收液的容积产率可达3-5g/L（最高达13g/L），培养体积可至20，000L（Lonza, Portsmouth/NH—facility）；灌注培养工艺中细胞密度可达2×108cell/ml，抗体容积产率最高达25~40g/L（Percivia公司XD?灌注系统）。以上行业技术水平的飞速提升，既源于上游细胞系构建技术的突破，也得益于细胞大规模培养工艺的日臻成熟。尤其是后者综合培养基开发，工艺优化，结合新型生物反应器的使用，实现了动物细胞的高密度、高表达培养，满足了临床上对于抗体药物“公斤级”产能的需求。
动物细胞的体外培养，涉及生物反应器的物理参数（温度、pH、DO、DCO2等）、培养基的营养成分（葡萄糖、谷氨酰胺、氨基酸、维生素等）的消耗，以及自身代谢产物（乳酸、氨、重组蛋白等）的积累与生理生化参数（细胞密度、活性，能荷等）的变化。作为重组抗体生产的“细胞工厂”，上述过程参数的改变会直接影响生产细胞系的活性与重组抗体的收率。比如：当乳酸（58 mM）、渗透压（382 mOsm/kg）、氨（5.1 mM）参数超过其相应的阈值，细胞活性和抗体产量均会明显下降。目前，业内已经对于细胞培养过程参数进行了深入的研究，在动物细胞大规模培养中下述参数的控制也已成定式
随着组学技术的发展与应用，目前的细胞培养工艺开发，已经从简单的工艺参数优化，进入系统的组学研究深度，生产细胞的代谢网络与重组抗体合成机制日益清晰。对于生产细胞系在不同工艺条件下抗体产量的差异，已经能够从基因组、蛋白组、代谢组等不同层次进行分析、解释。这就为今后大规模细胞培养工艺开发提供了新的线索。同时，业内随着“QbD”理念的深入，越来越多的“过程分析技术”（Process analytical technologies）开始应用于细胞培养过程，旨在通过加强关键过程参数的监控来确保蛋白药物的最终质量。如：培养基检测、培养过程监控、多批次数据分析等。未来基于重组抗体表达的细胞大规模培养工艺开发，将朝着稳定产能，提高质量的方向发展。
分子式：C6428H9976N1720O2018S42 (仅多肽部分)
分子量：144 985 Da (仅多肽部分)
辅料包括：蔗糖、聚山梨酯80、十二水合磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠和注射用水。
【性状】：澄清至半透明的无色至淡黄色液体。
参考资料：http://baike.baidu.com/view/10489361.htm
2012-07-20
狂犬病，以100%的病死率令人谈之色变。如今，随着华北制药重组人源抗狂犬病毒抗体的研制成功，狂犬病的高发状况将得到有效缓解。
基因序列全部来源于人，依靠基因重组技术生产，抗体注入人体后有效降低排异反应，达到应急预防目的，弥补了被狗咬伤与注射狂犬疫苗后产生主动性抗体之间时段无抗体的空白。由世界500强企业冀中能源[15.08
-2.46%股吧
研报]集团旗下华北制药抗体药物研制国家重点实验室主导，我国第一个拥有自主知识产权的重组人源抗狂犬病毒抗体，已经获得国家药监局临床批文并顺利进入临床研究阶段。
“基因重组人源抗体这一**性的技术突破，将使成功防治病毒性和细菌性感染疾病成为可能。”冀中能源集团董事长、党委书记，华北制药集团董事长、党委书记王社平颇感自豪地讲到：“我们科技创新正由投入驱动向创新驱动转变，正以自主研发的技术平台体系，为华药产业升级、迈向高端提供重要科技支撑和强有力推动。”
从人血清到重组人源抗体消除人体免疫系统的排异反应，最大限度地提高药效，用药量仅为原来的千分之一重组人源抗体一直是我国抗体技术攻关的主要方向。目前，就狂犬病而言，常用的抗狂犬病毒抗体是来源于人血的抗狂犬病毒血清，从人血浆中提取制备，不但存在异源蛋白的免疫反应，而且市场供应量受血浆来源限制，并具有潜在血源污染等问题，严重影响了狂犬病的防治需求。而重组人源抗体的基因序列全部来源于人体，可以最大程度消除人体免疫系统对异源性蛋白的排异反应。根据狂犬病控制联盟和美国疾病控制与预防中心报告，全球每年因狂犬病死亡的人数高达5.5万人，即平均每10分钟有1人死于狂犬病。我国属于狂犬病的高发国家之一，近十年来每年病例数在2000-3000例，仅次于印度，居世界第二。按照标准的免疫程序(五针)注射狂犬疫苗后，80%的人群在14天左右才能产生足够量的抗体抵制狂犬病毒的侵袭，还有20%左右的人群即便打过疫苗也无法产生抗体。据悉，在主动免疫抗体产生的空当，病毒会以每小时5毫米的速度向中枢神经转移，一旦进入脑部就会最终致人发病死亡，这对于头面部、颈部或手部多处被狗咬伤的严重病人及儿童更具有杀伤力。因此，在人体没有建立起自身抗体防御系统之前，寻找到一种能马上起效且作用强大的被动性外源抗体，阻断狂犬病毒感染尤显得尤为重要。但是，由于血源来源量的限制，目前市场上抗狂犬病毒免疫球蛋白药物不能大量生产，不足50万人份的市场供应量，远远不能满足每年800万人份的需求。而且使用这种抗体，以一个60公斤的成年人计算，一次注射至少要1500元，价格比较昂贵。这些制约因素，使重组人源抗体的研发显得更为迫切。华北制药从2003年进入重组人源抗体研究领域到如今重组人源抗狂犬病毒抗体的成功研制，打破了少数国家的封锁和垄断，使我国在这一技术上达到国际领先水平。“重组人源抗体基因序列全部来源于人，就像给抗体装上了一把****，很容易获取人体的信任，与病毒主动结合，诱导我们的免疫系统把这些外来侵略者杀掉。”华北制药抗体药物研制国家重点实验室主任高健尽可能浅显地解释这项新技术：重组人源抗体的结构和人自身的抗体结构一模一样，从而能消除人体免疫系统的排异反应，最大限度地提高药效。“原来需要注射1g血源抗狂犬病免疫球蛋白，现在1mg重组人源抗狂犬病毒抗体就已足够，剂量是原来的千分之一。”
生产老百姓用得起的抗体售价可降低三分之二，带来上亿元效益“我们要生产中国老百姓都用得起的抗体”。高健称，狂犬抗体用重组方式生产将不再需要从人血中提取，从而解决了血源来源稀少的问题，价格也大幅度降低，使大批量生产成为可能。“可别小看这小小一支药，投产后初期产量预计100万人份，每人份售价即使按血源免疫球蛋白制品售价三分之一计算，每年就将给华药带来上亿元实实在在的效益。”华北制药新药研发公司总经理段宝玲说，我们希望通过重组人源抗狂犬病毒抗体的研制带动华药产业升级。技术虽然得到突破，但生产工艺一直受制于人。“如今我们在新型生物反应器技术研发上已有很大进展，正在代替过去的细胞转瓶生产工艺。”高健解释，以前疫苗生产过程中需要集中许多小转瓶培养细胞，而现在，一个50升的反应器就可以替代上千个转瓶的工作量，不仅提高了产品质量的均一性，而且能大幅提高生产能力，降低综合成本。“该技术已在多个疫苗产品的生产中进行了应用试验，成熟后可以实现国产化替代，为新抗体的大批量生产提供保障。”“重组人源抗狂犬病毒抗体的研发成功，将打开一个更广阔的产业空间，可以促进其他蛋白药物的研制及后续新抗体药物的研发。”高健透露，重组全人源抗体技术的突破将为病毒感染类疾病提供**性的治疗手段。“这有利于引领国内生物制药的技术升级与改造，实现我国在抗体药物开发技术领域的跨越式发展，改变我国生物技术药物低水平重复的局面。”创新没有终点，目前在华药抗体药物研制国家重点实验室，识别病毒能力更强的狂犬病毒抗体第二代产品正在紧张地研发中。
(凤凰网2012年7月20日）
无论是保存还是运输，请避免反复冻融。反复冻融，冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构，导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变，从而降低抗体的结合能力，也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否，直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果，如果保存得当，Immunetech（苏州杰恩生物）的抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。
1.收到抗体和重组蛋白后的操作
收到抗体和重组蛋白后（大部分抗体和重组蛋白是溶液态），请务必在4℃，12000rpm，离心3分钟，再打开管盖进行分装、溶解和保存（如果抗体和重组蛋白体积小于50µl，请延长离心时间至5分钟，以保证全部抗体和重组蛋白均离心下来，干粉状态的同样适用）。Immunetech的抗体和重组蛋白使用特制的储存管，只有在12000rpm离心3分钟，才能将附着在管壁或盖内的抗体和重组蛋白全部离心下来（即使是在10000rpm离心也会离心不完全，导致出现抗体和重组蛋白的量不足的现象）。请详细阅读说明书，并按照推荐的保存条件正确保存和使用抗体和重组蛋白。
2.抗体和重组蛋白的长期保存
对于Immunetech（苏州杰恩生物）大部分抗体和重组蛋白，比较合适的保存方式是：抗体分装后保存在-20℃，重组蛋白分装后保存在-80℃。
（1）分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体和重组蛋白造成的污染可能性。
（2）分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10µl每份。因为分装体积越小，抗体和重组蛋白的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。
（3）复融后的分装抗体和重组蛋白如果一次用不完，将剩余母液保存在4℃，避免再冻起来。
（4）抗体和重组蛋白工作液应该当天配制当天用完，4℃保存尽量不要超过1天。
（5）绝对避免将抗体和重组蛋白保存在自动除霜冰箱中，将抗体和重组蛋白保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。
3.抗体和重组蛋白的短期保存
大部分Immunetech（苏州杰恩生物）的抗体和重组蛋白收到后4℃短暂保存1~2周，对抗体和重组蛋白活性没有影响。如果抗体和重组蛋白很快会使用（1~2周内），推荐在4℃保存，这是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害。最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体和重组蛋白。
4.抗体和重组蛋白的运输条件
一般的运输过程需要1~2周的时间，所以是在低温4℃的条件下来完成的。4℃运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体和重组蛋白是冻起来的，为了分装就需要解冻，这就多了一次冻融的过程），所以运输过程中一般避免干冰运输。
5.抗体和重组蛋白的稳定性
（1）抗体的稳定性是自然界长期进化的结果，抗体是免疫系统中最重要的分子之一，其稳定性是自然进化筛选的结果，在众多物种中，抗体分子形成了保守而稳定的结构。
（2）抗体的高Tm值，在室温下，甚至短时间温度达到50~60℃，抗体分子都能维持正确折叠，保持其应有的活性。
（3）抗体和重组蛋白的纯度。Immunetech采用先进的抗体和重组蛋白纯化技术，确保抗体和重组蛋白产品的高纯度，保障其抗体和重组蛋白产品的稳定性。
（4）抗体和重组蛋白的浓度。高浓度的抗体和重组蛋白产品可减少容器表面吸附造成的物质损失，高浓度的抗体和重组蛋白稳定性更好。Immunetech大部分抗体和重组蛋白浓度为1mg/ml，抗体和重组蛋白纯度高，特异性好，效价更高。
6.重组蛋白的特性
Immunetech（苏州杰恩生物）的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immunetech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100µg，用86µl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
