IL-2Antibody(701080)inIHC(P)
ImmunohistochemistryanalysisofIL-2showingstaininginthecytoplasmofparaffin-embeddedhumanskintissue(right)comparedtoanegativecontrolwithoutprimaryantibody(left).Toexposetargetproteins,antigenretrievalwasperformedusing10mMsodiumcitrate(pH6.0),microwavedfor8-15min.Followingantigenretrieval,tissueswereblockedin3%H2O2-methanolfor15minatroomtemperature,washedwithddH2OandPBS,andthenprobedwithaIL-2ABfinity™RabbitMonoclonalAntibody(Product#701080)dilutedin3%BSA-PBSatadilutionof1:20overnightat4°Cinahumidifiedchamber.TissueswerewashedextensivelyinPBSTanddetectionwasperformedusinganHRP-conjugatedsecondaryantibodyfollowedbycolorimetricdetectionusingaDABkit.Tissueswerecounterstainedwithhematoxylinanddehydratedwithethanolandxylenetoprepformounting.
Product Details
TESTED APPLICATIONSDILUTION
ELISA (ELISA)1:50-1:3200
Flow Cytometry (Flow)1:100
Immunohistochemistry (Paraffin) (IHC (P))1:10-1:50
Western Blot (WB)0.5-2 ug/ml
Tested Species reactivityHuman
Host / IsotypeRabbit / IgG
ClassMonoclonal
TypeAntibody
Clone2H20L7
ImmunogenRecombinant protein corresponding to amino acids 21–153 of human Interleukin 2
ConjugateUnconjugated
FormLiquid
Concentration0.5 mg/ml
PurificationProtein A
Storage bufferPBS
Contains0.09% sodium azide
Storage conditionsMaintain refrigerated at 2-8°C for up to 1 month. For long term storage store at -20°C
RRIDAB_2532376
Product Specific Information
ABfinity
recombinant antibodies are rabbit monoclonal antibodies, unmatched for producing superior results. ABfinity antibodies are developed by immunizing animals, screening for functionality, cloning the immunogen-specific antibody genes into high-level mammalian expression vectors, produced on a large scale, and purified with Protein A.
ABfinity monoclonal antibodies resemble rabbit monoclonals isolated from serum or produced by hybridomas, but demonstrate greater specificity and sensitivity. Because ABfinity recombinant antibodies are derived from cloned DNA sequences of the heavy and light antibody chains, they are not susceptIBLe to cell-line drift or lot-to-lot variation, thus allowing for peak specificity and performance.
Intact IgG appears on a non-reducing gel as ~150 kDa band and upon reduction generating a ~25 kDa light chain band and a ~50 kDa heavy chain.
701080 was successfully to detect IL-2 in Flow and ELISA application.
Background/Target Information
IL-2 is a 15 kDa cytokine which is produced by immature CD4 Th precursor and Th0 cells as well as some Th1 cells of the immune system. IL-2 plays an important role as a growth factor, differentiation factor, and regulator of cell death. IL-2 stimulates the proliferation of B cells, augments natural killer cell activity, and inhibits granulocyte macrophage colony formation. The gene for IL-2 is located on chromosome number 14 at the 4q26-q27 locus.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures. Not for resale without express authorization.
Invitrogen创立于1987年，公司总部设于加利福尼亚州卡尔斯巴德市。我们为制药和生物技术公司以及学术研究和政府科研机构提供生命科学相关产品与服务。2006年Invitrogen公司（纳斯达克股票代码IVGN），年营业额达12亿美元。作为一家全球性的跨国公司，Invitrogen现有员工4,800余名，在全球超过70个国家和地区设有分支机构。我们为全球的科研工作者提供25,000余种产品和服务，支持疾病研究、新药研发和商业性生物生产。Invitrogen中国总公司，凭借丰富经验，集中人力建立了提供合成，测序及其它多种项目服务的实验生产基地，是唯一一个在同行业中引进6西格码（SixSigma）和精益(Lean)管理方法的公司，公司由有着丰富管理经验的黑带大师（MasterBlackBelt）指导，根据数据来不断优化生产流程，降低成本，提高质量，以及提高发货速度.我们有一个强大的集研发和生产于一体的梯队，队员构成中有归国博士，硕士和本科生。另外我们Invitrogen的美国,欧洲,日本的梯队与我们紧密联系,资源共享,共同传递高质量的产品,提供更新更全更快的技术和服务.全面细致的标准操作程序，严格的入职前培训和在职培训。使我们的产品成为成为您的首选品牌.因此我们相信以Invitrogen在全球的合成与测序业务技术力量为后盾，在我们杰出的技术团队的带领下，将会为您提供高质量、全方位和多角度的服务。
Invitrogen旗下包括Invitrogen、Gibco、MolecularProbes、Dynal、Biosource、Caltag、Zymed、Panvera、InforMax、BioReliance等众多行业顶尖品牌。为分子生物、疾病研究，药物研发和生物制品生产等提供全面的技术和服务。
Invitrogen的壮大历程：
2005
Dynal细胞分离与纯化用磁珠、细胞刺激、蛋白质研究、核酸研究和微生物学
Zymed病理学、癌症和细胞生物产品，一般免疫化学试剂
BioAsia引物合成及测序，合并后的公司称为上海英骏生物技术有限公司
2004
DRIDNA纯化产品和其它核酸
Protometrix蛋白质微阵列技术
BioReliance合同服务机构（CSO）假设测试，为全球生物技术和制药公司提供生物药品开发和生产服务
2003
SequiturRNA干扰技术（RNAi）
MolecularProbes为生物研究和药品开发提供分子分类方面的荧光技术
GeniconSciences超敏感信号产生与探测工具和方法
2002
PanVera生物化学、细胞检验和蛋白质收集
InforMax生物信息软件
2000
LifeTechnologies分子生物和GIBCO细胞培养试剂
Ethrog电泳完全附着系统
ResearchGenetics为基因药品开发研究提供cDNA克隆
1999
NOVEX预制电泳胶
ebiomall.com
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免疫原分为可溶性抗原和颗粒性（细胞）抗原，用无菌盐水稀释并与佐剂混合，腹腔注射抗原与佐剂彻底混匀后形成的稳定乳状液，在免疫原提供持续的免疫应答基础上进行加强免疫
周期第1天 采血0.2ml（获得0.1ml免疫前血清）
第一次免疫（抗原加弗氏完全佐剂）
第14天 第二次免疫（抗原加弗氏不完全佐剂）
第21天 采血和ELISA检测
第35天 第三次免疫（抗原加弗氏不完全佐剂）
第42天 采血和ELISA检测
第56天 第四次免疫（抗原溶于PBS或盐水）
第61天 细胞融合向左转|向右转
在过去的20年，单克隆抗体逐渐成为癌症治疗中的支柱。从最初应用价值有限的鼠源单抗到最近新的CAR-T技术，研究者们不停地摸索改进创新。最近一期的《NatureReviewsCancer》杂志刊登了基于单抗的癌症疗法综述。文章从四个方面介绍了单抗在癌症治疗里的用途。
癌细胞靶向疗法：恶性肿瘤细胞表面表达着一些异于普通健康细胞的抗原，这些抗原可以作为单克隆抗体的良好靶点。体外与动物体内的实验显示，针对这些靶点的抗体可以引起细胞的凋亡，并通过补体介导的细胞毒性(complement-mediatedcytotoxicity,CMC)以及抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcellularcytotoxicity,ADCC)杀死靶细胞。但是在不同临床实验中，具体是哪一种机制更为重要还有待研究.
改变宿主体内应答：VEGF等血管内皮生长因子促进肿瘤内血管生长(angiogenesis)，为肿瘤提供优越的生长环境。因此通过抑制VEGF来抑制血管生成的抗体如Bevacizumab等成为有效的抗癌药物。但由于其不能直接作用于癌细胞，此类抗体药物通常与其他具有细胞毒性的药物结合使用。另一个方法是T细胞检验点阻断(Tcellcheckpointblockade)。在T细胞免疫中，配体和受体的共调控在肿瘤特异性T细胞的激活和抑制中起着重要作用。精确控制的T细胞检验点影响免疫系统的反应，避免免疫系统过度激活。抑制这些检验点的单抗被叫做检验点阻断抗体，它们可以诱导更强的肿瘤免疫反应，使反应维持更久的时间。目前常用的抗体包括阻断CTLA4的Ipilimumab和PD1的抗体pembrolizumab和nivolumab。PD1抗体在何杰金淋巴瘤的初期临床实验中显示出很好的效果.
运输具有细胞毒性的分子：近年来，“智能炸弹”(smartbomb)被用来描述这一系列向癌细胞运输细胞毒性分子的单抗。这些分子包括放射免疫偶联物，具有细胞毒性的小分子以及免疫系统里的细胞因子。放射性元素被用于标记抗体，进行肿瘤的诊断和治疗。淋巴瘤是较为适合放射性疗法的癌症，目前被FDA批准的药物有ibritumomabtiuxetan和tositumomab。抗体-药物偶联物(antibody-drugconjugates)是最近研发的极具前景的抗癌药物。它将带有细胞毒性的药物和具有特异性的抗体偶联，提高了特异性同时更好地杀死肿瘤细胞。此外免疫细胞因子如IL-2和GM-CSF也被结合用在抗体上，用于靶向肿瘤细胞，改变肿瘤微环境.
重塑T细胞：T细胞免疫在肿瘤免疫里起着关键的作用。目前有两大类方法让T细胞不再受T细胞受体识别抗原的MHC分子的限制。第一类方法是双特异性抗体(bispecificantibody)，顾名思义，它既可以靶向细胞又可以结合免疫效应细胞，例如T细胞和NK细胞。目前针对CD19抗原的双特异性抗体blinatumomab已经被FDA批准，更多抗体还在研发中。第二类方法是嵌合抗原受体T细胞(chimericantigenreceptorTcells)，即大名鼎鼎的CAR-T细胞。这类被修饰过的T细胞包含具有特异性的抗体可变区和T细胞激活的基序，能够进攻表达特异抗原的细胞。CAR-T细胞可以分裂生长，并保持肿瘤细胞特异性。目前CAR-T细胞疗法在临床实验中取得了非常显著的疗效。尽管随之而来的细胞因子风暴会带来一定危险，不过使用细胞因子的抗体可以减轻它的负面影响。CAR-T实验的经验还在不断积累，未来这一技术将渐渐成熟。
（1）鼠源单克隆抗体的生产应用的动物细胞工程技术有动物细胞培养、动物细胞融合等．
（2）据图可知，免疫原性的产生主要与抗体的 C区有关．
（3）基因嵌合表达载兼具有淋巴细胞和体细胞的特点，体转染成功的细胞应该具有的特点是：分泌抗体和无限增殖能力．
（4）嵌合抗体的生产属于蛋白质工程范畴．图示中的嵌合抗体具有特异性，能比较有效的治疗肿瘤．
最近我想筛选一个针对膜蛋白的单克隆抗体，这个抗体的参考文献中提到的一种筛选方法是用DNA质粒直接免疫小鼠，然后再脾融合筛选出来的。这里有几个问题想向大家请教一下：
1.DNA效果比蛋白差很远，但是膜蛋白的抗体有可能是针对空间构象的，能起效的抗体位点很少，所以要在免疫阶段保证抗体多样性和特异性。看参考文献的剂量都是25ug或者50ug这种比较低的剂量，免疫次数2-3次，最后在融合前用细胞加免一次。而我设计的实验组是100ug剂量，免疫了4-5次，我这样是不是筛不出来特异性的抗体了？
2.DNA筛到的阳性抗体，可能亲和力低，如果不想筛到IgM的抗体，DNA免疫从什么时候开始由IgM转换成IgG的？抗体多样性在免疫的什么阶段比较高？
一、前言
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤。
虽然单抗技术已经非常成熟，但是由于其经济价值，仍然有很多人在从事这项研究，而且其中也会遇到很多这样那样大问题。我本人就是其中一个，由于是第一次做单抗，所以过程中遇到了很多困难，终于在前几天得到了几株阳性克隆。
鉴于此，我将单克隆抗体制备的整个过程贴出来，同时搜索了园子里面一些战友的求助帖以及一些经典的应助帖，希望能对将要或是正在从事这项研究的战友们有些帮助。
求助：看了许多文献，对于免疫小鼠的抗原剂量以及方法各不相同，所以发帖问问大家制备单抗的详细过程，谢谢大家
单克隆抗体这项新技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性问题，可用于探讨: ①蛋白质的精细结构；②淋巴细胞亚群的表面新抗原；③组织相容性抗原；④激素和药物的放射免疫（或酶免疫）分析；⑤肿瘤的定位和分类；⑥纯化微生物和寄生虫抗原；⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法 (“导弹”疗法,利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合，将药物带至病灶部位.。
因此，单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究，为人类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景。
