【求助】自己制备的多克隆抗体做WB有三条带
2021-08-11
*请输入10-500个字符
已帮助
0人
0人
skykiller
用户
genius_at 制备出的抗体通过了GST的柱子消除了与我的抗原有交叉反应的抗体这句可能有问题。是商品化纯化GST融合蛋白的柱子吗？那是不对的。应该用纯化的GST蛋白接柱去纯化多抗，消除可能的交叉。另外，多抗的特异性抗体含量一般不超过20%，最好过一次自己的抗原柱进行特异性的纯化。
已帮助
0人
0人
mwliu
用户如果你觉得纯化没问题，那就看看你的蛋白是否有二聚体或是降解，还有，如果你的抗体可以IP的话，可以试试做个IP后再来做WB，条带会比较单一。
已帮助
0人
0人
genius_at
用户skykiller这句可能有问题。是商品化纯化GST融合蛋白的柱子吗？那是不对的。应该用纯化的GST蛋白接柱去纯化多抗，消除可能的交叉。另外，多抗的特异性抗体含量一般不超过20%，最好过一次自己的抗原柱进行特异性的纯化。谢谢！可能是我没说明白，不是商品化纯化的GST融合蛋白的柱子。是与我所要蛋白有交叉反应的同一家族的另一个成员的GST融合蛋白，这样既把GST交叉反应抗体给去掉，又把这个家族成员的抗体给去掉了。现在我过了一下我所要的蛋白的GST融合蛋白的柱子来抓抗体，那些杂带没有结合，在过抗体的时候就给去掉了，但是我之后用GST洗脱液洗脱后的液体做WB也没有带了，是不是需要再过一下MillporeMontage的抗体纯化试剂盒还是洗脱液的PH值不对呢？
已帮助
0人
0人
genius_at
用户mwliu如果你觉得纯化没问题，那就看看你的蛋白是否有二聚体或是降解，还有，如果你的抗体可以IP的话，可以试试做个IP后再来做WB，条带会比较单一。谢谢！我觉得还是纯化的问题~~
已帮助
0人
0人
skykiller
用户genius_at谢谢！可能是我没说明白，不是商品化纯化的GST融合蛋白的柱子。是与我所要蛋白有交叉反应的同一家族的另一个成员的GST融合蛋白，这样既把GST交叉反应抗体给去掉，又把这个家族成员的抗体给去掉了。这一步应该收集的是柱穿透样，是吧？genius_atwrote:现在我过了一下我所要的蛋白的GST融合蛋白的柱子来抓抗体，那些杂带没有结合，在过抗体的时候就给去掉了，但是我之后用GST洗脱液洗脱后的液体做WB也没有带了有洗脱峰吗，纯化抗体浓度、纯化的规模有多大？用什么溶液洗脱的？genius_atwrote:是不是需要再过一下MillporeMontage的抗体纯化试剂盒还是洗脱液的PH值不对呢？个人没有用过这个试剂盒。但如果是通用性的纯化抗体试剂盒，应该也就是ProteinA/G之类的方法。前面已经用抗原亲和柱纯化过了，再过这个柱没有意义。
▍
相关分类
▍
相关文章
抗体工程的研究进展
谁知道GTG染色咋回事?喷血求知!!!! 形态学与生理生化讨论版...
大鼠热休克蛋白72(HSP72)酶联免疫分析(ELISA)_实验方法_
SUMITOMO CHEMICAL ASIA PTE LTD_工商信息_信用报告_财务报表...
CCK8检测细胞增殖毒性的原理、方法及注意事项
抗体分类抗体生物学功能
安息香缩合与应用研究进展
殖民地生存中文版殖民地生存下载(Colony Survival)汉化破解 ...
抗NMDAR脑炎
大天使之剑灵魂原石哪里多 哪个地图爆率高_欢乐园游戏
【资源】干细胞常用实验技术protocol大全 神经生物与再生医学 丁香 ...
LebiShop多语言网上商店系统
▍
相关问答
