【求助】做免疫组化用单克隆抗体好还是多克隆的好

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2021-08-04

问题描述：

请问各位，做免疫组化用单克隆抗体好，还是多克隆抗体好。这两个有什么区别，顺便，大家帮我看看我的免疫荧光实验步骤有没有什么太大的问题。谢谢各位。

1取组织
（1）灌注固定：暴露心脏,将注射针头插入左心室,剪开右心耳,快速灌注PBS,待右心耳处流出澄清液体,换4%多聚甲醛灌注到大鼠四肢强直为止,快速取脑和肾。
（2）固定：将组织置于4%多聚甲醛中固定15小时
（3）脱水：将组织放入30% 蔗糖溶液中直至下沉
（4）切片：脑组织冰冻切片20微米，37度烘干2h以上；
（5）将切片放置－80度保存，随用随取。

2免疫单标记
（1）做抗原修复（0.4g柠檬酸、3g柠檬酸钠、1000ml水配制成溶液，放到水浴箱中90~94℃保存15min）,冷却后，用1*PBS反复洗标本10min，吸去PBS，同时向标本加渗透液（配0.4%trition液，然后将BSA加入到配好的trition液中，配成1％浓度）100ul，常温下湿盒反应1h。
（2）吸去渗透液，同时向标本加block液（5％封闭用正常山羊血清）100ul，常温下湿盒反应5h。
（3）吸去block液，同时向标本加入1：50稀释的羊抗鼠一抗100ul，37度湿盒反应过夜。
（4）吸去一抗，并回收，用1*PBS洗液反复洗15min。
（5）快速从冰箱中取出驴抗羊的二抗，并立即用锡纸包裹，注入到一个新的以锡纸包裹的tube管中并用PBS以1：200稀释。
（6）进入暗室，吸去PBS，同时加入二抗100ul，37度湿盒反应2h,封片。
（7）放置到荧光显微镜下观察。

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iinguaounie

用户

我也很困惑！请高手帮忙解答！理论上：具几个抗原决定簇的抗原免疫动物产生对各个决定簇的抗体，即多克隆抗体；由一个产生抗体的细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞经无性繁殖，而来的细胞群产生的抗体，即单克隆抗体，它属同一类免疫球蛋白，质地纯一，且针对单一决定簇，因此特异性强，亲和性也一致。

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iinguaounie

用户

还请教各位高手：商品化的单克隆抗体都是抗MOUSE的吗？

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mickeyzq

用户

当然是单抗好,特异性强,但是单抗都是小鼠来源的,所以不能用来做小鼠.仔细看了一下你的实验步骤，提几个小小的建议：1、冰冻切片可以不用抗原修复；2、渗透液可以与block液配在一起，且反应时间37度一小时就可以了，5小时似乎封闭时间太长了；3、一抗孵育一般4度过夜比较好，而不用37度过夜，37度孵育一小时就够了，否则时间长背景染色会过深；4、大的实验室很少回收一抗的，当然小实验室资金紧缺的话另当别论；5、二抗反应后，也需要PBS洗10分钟*三次，不知你洗了没有？

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yager2500

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商品化的抗体除了鼠单抗还有，兔子的单抗。但全世界只有1家做。是个专利。网站www.epitomics.com

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