| Isotype | IgG |
| Product Type | Antigen Immunoaffinity Purified Polyclonal |
| Units | 100 µg |
| Host | Rabbit |
| Species reactivity | Human |
| Application | ELISAImmunohistochemistryWestern Blot Loading ControlWestern Blotting |
BackgroundGAPDH is constitutively expressed at high levels in almost all tissues and cell lines making it ideal for use as a loading control marker in immunoblots. Independent of its glycolytic activity it is also involved in membrane trafficking in the early secretory pathway.
Source
Immunogen: Synthetic peptide derived from the human GAPDH alpha protein.
Product
Product Form: Affinity Purified
Formulation: Provided as solution in phosphate buffered saline with 0.08% sodium azide
Purification Method: Antigen Immunoaffiinity Purification
Concentration: See vial for concentration
ApplicationsAntibody can be used for Western Blotting (1:400 dilution) and immunohistochemistry (2-10 µg/ml).Optimal concentration should be evaluated by serial dilutions.
Functional Analysis: Western Blotting
Positive Control: Human liver tissue, human testis
StorageProduct should be stored at -20ºC. Aliquot to avoid freeze/thaw cycles
Product Stability: Products are stable for one year from purchase when stored properly
Shipping Conditions: Ship at ambient temperature, freeze upon arrival
CautionThis product is intended FOR RESEARCH USE ONLY, and FOR TESTS IN VITRO, not for use in diagnostic or therapeutic procedures involving humans or animals. It may contain hazardous ingredients. Please refer to the Safety Data Sheets (SDS) for additional information and proper handling procedures. Dispose product remainders according to local regulations.This datasheet is as accurate as reasonably achievable, but Exalpha Biologicals accepts no liability for any inaccuracies or omissions in this information.
References1. Nakajima, H., et al. "GAPDH aggregate formation participates in oxidative stress-induced cell death." J. Biol. Chem. 2009:Epub2. Nahlik, K.W., et al. "Modulation of GAPDH expression and cellular localization after vaccinia virus infection of human adherent monocytes." Acta Biochim. Pol. 2003: 50(3); 667-676.
Protein Reference(s)
Database Name: UniProt
Accession number: P04406
Species Accession: Human
Safety Datasheet(s) for this product:EA_Sodium Azide/wp-content/uploads/SDS/Antibody SDS with Sodium AzideV2.pdf
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单克隆抗体结构相似且均一,有高度特异性
不过多克隆抗体因为有多个结合位点，事实上的特异性并不如单克隆抗体，所以一般Western blot都尽量要求使用单克隆抗体。以保证实验结果准确可靠
1取组织
（1） 灌注固定：暴露心脏,将注射针头插入左心室,剪开右心耳,快速灌注PBS,待右心耳处流出澄清液体,换4%多聚甲醛灌注到大鼠四肢强直为止,快速取脑和肾。
（2） 固定：将组织置于4%多聚甲醛中固定15小时
（3） 脱水：将组织放入30% 蔗糖溶液中直至下沉
（4） 切片：脑组织冰冻切片20微米，37度烘干2h以上；
（5）将切片放置－80度保存，随用随取。
2免疫单标记
（1）做抗原修复（0.4g柠檬酸、3g柠檬酸钠、1000ml水配制成溶液，放到水浴箱中90~94℃保存15min）,冷却后， 用1*PBS反复洗标本10min，吸去PBS，同时向标本加渗透液（配0.4%trition液，然后将BSA加入到配好的trition液中，配成1％浓度）100ul，常温下湿盒反应1h。
（2） 吸去渗透液，同时向标本加block液（5％封闭用正常山羊血清）100ul，常温下湿盒反应5h。
（3） 吸去block液，同时向标本加入1：50稀释的羊抗鼠一抗100ul，37度湿盒反应过夜。
（4）吸去一抗，并回收，用1*PBS洗液反复洗15min。
（5）快速从冰箱中取出驴抗羊的二抗，并立即用锡纸包裹，注入到一个新的以锡纸包裹的tube管中并用PBS以1：200稀释。
（6）进入暗室，吸去PBS，同时加入二抗100ul，37度湿盒反应2h,封片。
（7）放置到荧光显微镜下观察。
清冷冻干燥后保存。
抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高，它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线，计算各自的结合率，求出各自在 IC50时的浓度，并按下列公式计算交叉反应率。 如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管，而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时，表示 这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为 0，即该血清的特异性较好。
抗体的亲和力 是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示，K的单位是L/mol，通常K的范围在 108 ～1010 /mol，也有多达 1014 /mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选，确定抗体的用途，验证抗体的均一性等均有重要意义。向左转|向右转
1.单克隆抗体的优点：
（1）杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代,只要不发生细胞株的基因突变,就可以不断的生产高特异性、高均一性的抗体.
（2）可以用相对不纯的抗原,获得大量高度特异的、均一的抗体.
（3）由于可能得到“无限量”的均一性抗体,所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法,如IRMA和ELISA等.
（4）由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能,可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗.
2.单克隆抗体的局限性：
(1）单克隆抗体固定的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围.由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应,所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成.
(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体.
(3）制备技术复杂,而且费时费工,所以单克隆抗体的价格也较高.
