Obtain a rapid burst of Cre expression in mammalian cells with footprint-free delivery of Cre mRNA in nonintegrating, virus-like particles. Cre RNA lentiviral particles (RLPs) contain no viral genome and are generated using a novel packaging technology that loads multiple biologically active mRNAs per particle. RLPs have been shown to mediate transient protein expression at high efficiency for in vitro and in vivo applications involving cell lines, primary cells, stem cells, tissues, and organisms.
Obtain a rapid burst of Cre expression in mammalian cells with footprint-free delivery of Cre mRNA in nonintegrating, virus-like particles. Cre RNA lentiviral particles (RLPs) contain no viral genome and are generated using a novel packaging technology that loads multiple biologically active mRNAs per particle. RLPs have been shown to mediate transient protein expression at high efficiency for in vitro and in vivo applications involving cell lines, primary cells, stem cells, tissues, and organisms.
Popular methods for Cre recombinase-based genome editing present tradeoffs. Transient transfection of a plasmid or mRNA limits the scope of Cre activity, minimizing the likelihood of unwanted effects associated with persistent Cre expression, but is associated with cellular toxicity, is unsuitable for in vivo applications, and is only feasible for cells that can be readily transfected. Transduction of the Cre gene sequence on a viral vector enables Cre expression in a broader range of cell types and can be applied to in vivo studies, but is associated with random genomic integration, may require activation and/or selection of target cells, and may result in undesirable persistence of Cre expression.
Cre recombinase RLPs enable researchers to overcome the above limitations and express Cre more rapidly and efficiently in mammalian cells by delivering nonviral Cre mRNA in lentivirus-derived packaging in the absence of a viral genome. In vitro studies involving RLP-mediated delivery of a luciferase reporter demonstrated that reporter expression was maximal at 4–24 hours post application and had declined rapidly at 30 hours. By contrast, expression of luciferase delivered via transfection was undetectable until 8 hours and peaked at 24 hours, while expression via lentiviral integration was undetectable until 24 hours. In an in vivo study involving a loxP mouse line (ROSA26-YFP), local injection of Cre RLPs into muscle yielded a zone of reporter gene expression that was comparable in size to a zone generated via injection of purified Cre lentivirus (Prel et al. 2015).
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羊多抗免疫步骤和兔多抗免疫步骤一样的，周期也是一样的，就是免疫的部位不同，羊的免疫部位是：羊的小腿内侧皮下。采血部位是：颈静脉；放血部位是：颈静脉；最后收集血的部位：颈动脉。希望对你有帮助。
说得简单点就是，细胞核是原封不动的，没有重组过，而细胞核外的东西是很多别的细胞中提取出来的并组合起来的。这样的混合体淋巴细胞产生的抗体具有很强的嵌合能力，针对性比一般的抗体强，但是它的来源没变，所以称之为混合单克隆抗体
1.单克隆抗体的优点：
（1）杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代,只要不发生细胞株的基因突变,就可以不断的生产高特异性、高均一性的抗体.
（2）可以用相对不纯的抗原,获得大量高度特异的、均一的抗体.
（3）由于可能得到“无限量”的均一性抗体,所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法,如IRMA和ELISA等.
（4）由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能,可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗.
2.单克隆抗体的局限性：
(1）单克隆抗体固定的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围.由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应,所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成.
(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体.
(3）制备技术复杂,而且费时费工,所以单克隆抗体的价格也较高.
1、制备抗原。
2、选择实验动物。
3、动物免疫。
4、试取血进行测试，看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫，杀死实验动物，采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。
二、抗体分类
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体（Monoclone antibody）。由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。多克隆抗体是由异源抗原（大分子抗原、半抗原偶联物）刺激机体产生免疫反应，有机体浆细胞分泌的一组免疫球蛋白。多克隆抗体由于其可识别多个抗原表位、可引起沉淀反应，制备时间短，成本低的原因广泛应用于研究和诊断方面。
三、免疫方法
可以采用以下各种方法之一进行免疫。
（1）淋巴结注射法：①在兔的两后足跖部皮下（或皮内）注射活卡介苗 50mg（每侧约0.30ml） 。7～10 天后，兔跖及腘肌淋巴结肿大；②于肿大的两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG 乳化抗原 0.50ml(含 IgG 5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml)；③必要时，14 天后，重复步骤②一次；④再过 7 天后，于两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的 IgG 乳化抗原0.50ml（含IgG5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml） ；⑤5～7天后，耳静脉采血。测定血清效价。
（2）皮下多点注射法：①家兔两侧掌（跖内各注射含有完全佐剂抗原 0.10ml（IgG 含量5mg/ml） ；②7～10 天后，脊柱两侧多点（颈、胸、腰椎各两点、共 6 点）皮下注射含不完全佐剂5的抗原，每点 0.50ml；③7～10 天后，脊柱两侧重复注射一次；④7～10 天后试血。不合格者重复步骤③。
（3）多途径联合注射法：①两侧掌（跖）内侧皮下注射含完全佐剂抗原 0.50ml（IgG 量为 5mg/ml） ；②14 天后，多点皮下注射含有不完全佐剂抗原；③7 天后，耳静脉注射不含佐剂的抗原 2ml；④测定血清抗体效价，不合格者重复步骤③，并适当递增 IgG 量。
