Description | alpha-tubulin (b-alpha-1) mRNA is expressed only in brain with a molecular weight of about 55,000. The 3-prime UTR of b-alpha-1 is more than 80% homologous to the UTR of the rat brain alpha-tubulin gene, IL-alpha-T1. B-alpha-1 encodes a predicted 451-amino acid protein that is 100% identical to the rat homolog and differs by only 2 and 3 amino acids from the pig and chicken homologs, respectively. |
Catalog Number | IW-MA1107 |
Quantity | 9 ml |
Host | Mouse |
Clone | Tub-1 |
Isotype | Mouse IgG1 |
Immunogen | Microtubules from chicken embryo brain. |
Purity | Purified by the goat anti-mouse IgG affinity chromatography. |
Conjugate | Unconjugated |
Species Reactivity | Human, rat. Not tested in other species. |
Positive Control | Brain |
Cellular Localization | Cytoplasmic |
Form | Ready to use solution in PBS with stabilizer and 0.01% sodium azide. No further dilution needed. Serum blocking step should be omitted. |
Storage | Store at 2-8 °C. Do not freeze. |
Applications | IHC-P: Heat induced epitope retrieval is required on formalin fixed paraffin sections. IHC-Fr: Not tested. ICC: Not tested. |
Limitations | This product is intended for Research Use Only. Interpretation of the test results is solely the responsibility of the user. |
Precautions | Users should follow general laboratory precautions when handling this product. Wear personal protective equipment to avoid contact with skin and eyes. |
References | 1. Cowan, N. J.; Dobner, P. R.; Fuchs, E. V.; Cleveland, D. W. : Expression of human alpha-tubulin genes: interspecies conservation of 3-prime untranslated regions. Molec. Cell. Biol. 3: 1738-1745, 1983. 2. Hall, J. L.; Cowan, N. J. : Structural features and restricted expression of a human alpha-tubulin gene. Nucleic Acids Res. 13: 207-223, 1985. |
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多抗，稀释度更大，特异性相对较差，容易出现多条带。
兔的单克隆抗体和鼠的单克隆抗体在使用上不会有什么区别。
用来很多抗体，许多时候觉得单抗多抗也未必是理论上那样的。单抗做不好的也有，多抗条带唯一且清晰的也有。
而且很多蛋白的抗体未必有那么多的选择。
一般来说多克隆的阳性率高一些，但出现假阳性的比例也高一些。
1取组织
（1） 灌注固定：暴露心脏,将注射针头插入左心室,剪开右心耳,快速灌注PBS,待右心耳处流出澄清液体,换4%多聚甲醛灌注到大鼠四肢强直为止,快速取脑和肾。
（2） 固定：将组织置于4%多聚甲醛中固定15小时
（3） 脱水：将组织放入30% 蔗糖溶液中直至下沉
（4） 切片：脑组织冰冻切片20微米，37度烘干2h以上；
（5）将切片放置－80度保存，随用随取。
2免疫单标记
（1）做抗原修复（0.4g柠檬酸、3g柠檬酸钠、1000ml水配制成溶液，放到水浴箱中90~94℃保存15min）,冷却后， 用1*PBS反复洗标本10min，吸去PBS，同时向标本加渗透液（配0.4%trition液，然后将BSA加入到配好的trition液中，配成1％浓度）100ul，常温下湿盒反应1h。
（2） 吸去渗透液，同时向标本加block液（5％封闭用正常山羊血清）100ul，常温下湿盒反应5h。
（3） 吸去block液，同时向标本加入1：50稀释的羊抗鼠一抗100ul，37度湿盒反应过夜。
（4）吸去一抗，并回收，用1*PBS洗液反复洗15min。
（5）快速从冰箱中取出驴抗羊的二抗，并立即用锡纸包裹，注入到一个新的以锡纸包裹的tube管中并用PBS以1：200稀释。
（6）进入暗室，吸去PBS，同时加入二抗100ul，37度湿盒反应2h,封片。
（7）放置到荧光显微镜下观察。
不过多克隆抗体因为有多个结合位点，事实上的特异性并不如单克隆抗体，所以一般Western blot都尽量要求使用单克隆抗体。以保证实验结果准确可靠
