| ProductType | Single-ColorNegativeControl |
| Units | 100Tests |
| Host | Mouse |
| Speciesreactivity | Human |
| Application | FlowCytometryImmunofluorescence |
BackgroundNegativecontrolforImmunofluorescencestainingwithPure,FITC,BiotinandPEofmousemonoclonalantibodies.Assessmentofnon-specificbindingofmousemonoclonalantibodiestohumancellsurfaceantigens.
Synonyms:IgG2a&IgG2bNegativeControl
Product
ProductForm:RPE-Cy-5
Formulation:Providedassterilefilteredsolutioninphosphatebufferedsalinewith0.08%sodiumazideand0.2%carrierprotein
PurificationMethod:ProteinA/GChromatography
Concentration:Titeredforflowcytometry
ApplicationsConsulttheappropriatefactsheettodeterminetheamountofantibodiestobeusedasacontrolforPBMCorWholeBlood.PBMC:Add10µlofMAB/10^6PBMCin100µlPBS.Mixgentlyandincubatefor15minutesat2ºto8ºC.WashtwicewithPBSandanalyze.WHOLEBLOOD:Add10µlofMAB/100µlofwholeblood.Mixgentlyandincubatefor15minutesatroomtemperature20ºC.Lysethewholeblood.WashoncewithPBSandanalyze.Seeinstrumentmanufacturer’sinstructionsforLysedWholeBloodandImmunofluorescenceanalysiswithaflowcytometerormicroscope.ALLOPHYCOCYANIN:(APC)conjugatesareanalyzedinmulti-colorflowcytometrywithinstrumentsequippedwithasecondlaserandproperfilters.Laserexcitationisat633nmwithaHeliumNeon(HeNe)laserora600-640nm(633nm)rangeforaDyelaser.Peakfluorescenceemissionisat660nm.RPE-Cy-5+:Excitesat488nmandemitsat670nm.Storeprotectedfromlight.
FunctionalAnalysis:FlowCytometryStaining
StorageProductshouldbestoredat4-8ºC.DONOTFREEZE
ProductStABIlity:Reagentsarestablefortheperiodshownontheviallabelwhenstoredproperly
ShippingConditions:RoomTemperature
CautionThisproductisintendedFORRESEARCHUSEONLY,andFORTESTSINVITRO,notforuseindiagnosticortherapeuticproceduresinvolvinghumansoranimals.Itmaycontainhazardousingredients. PleaserefertotheSafetyDataSheets(SDS)foradditionalinformationandproperhandlingprocedures.Disposeproductremaindersaccordingtolocalregulations.Thisdatasheetisasaccurateasreasonablyachievable,butNordic-Mubioacceptsnoliabilityforanyinaccuraciesoromissionsinthisinformation.
ReferencesCy-5PortionsofthisproductismanufacturedunderlicensefromCarnegieMellonUniversity,U.S.PatentNumber5,268,486.
ProteinReference(s)
DatabaseName:UniProt
Accessionnumber:P01863
SpeciesAccession:Human
SafetyDatasheet(s)forthisproduct:NM_SodiumAzide/wp-content/uploads/SDS/AntibodySDSwithSodiumAzideNoridic-MUbio.pdf
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没有marker，怎么知道你做的蛋白大小？
没有参照物，怎么知道你跑的快不快？
没有尺子，怎么知道你的size大小？
凭嘴说吗？
抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高，它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线，计算各自的结合率，求出各自在 IC50时的浓度，并按下列公式计算交叉反应率。 如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管，而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时，表示 这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为 0，即该血清的特异性较好。
抗体的亲和力 是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示，K的单位是L/mol，通常K的范围在 108 ～1010 /mol，也有多达 1014 /mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选，确定抗体的用途，验证抗体的均一性等均有重要意义。向左转|向右转
不过多克隆抗体因为有多个结合位点，事实上的特异性并不如单克隆抗体，所以一般Western blot都尽量要求使用单克隆抗体。以保证实验结果准确可靠
一般来说多克隆的阳性率高一些，但出现假阳性的比例也高一些。
又由于自然存在的抗原大都存在多个抗原表位,会刺激机体产生多种针对同一抗原的不同抗原表位相应的不同抗体.
1取组织
（1） 灌注固定：暴露心脏,将注射针头插入左心室,剪开右心耳,快速灌注PBS,待右心耳处流出澄清液体,换4%多聚甲醛灌注到大鼠四肢强直为止,快速取脑和肾。
（2） 固定：将组织置于4%多聚甲醛中固定15小时
（3） 脱水：将组织放入30% 蔗糖溶液中直至下沉
（4） 切片：脑组织冰冻切片20微米，37度烘干2h以上；
（5）将切片放置－80度保存，随用随取。
2免疫单标记
（1）做抗原修复（0.4g柠檬酸、3g柠檬酸钠、1000ml水配制成溶液，放到水浴箱中90~94℃保存15min）,冷却后， 用1*PBS反复洗标本10min，吸去PBS，同时向标本加渗透液（配0.4%trition液，然后将BSA加入到配好的trition液中，配成1％浓度）100ul，常温下湿盒反应1h。
（2） 吸去渗透液，同时向标本加block液（5％封闭用正常山羊血清）100ul，常温下湿盒反应5h。
（3） 吸去block液，同时向标本加入1：50稀释的羊抗鼠一抗100ul，37度湿盒反应过夜。
（4）吸去一抗，并回收，用1*PBS洗液反复洗15min。
（5）快速从冰箱中取出驴抗羊的二抗，并立即用锡纸包裹，注入到一个新的以锡纸包裹的tube管中并用PBS以1：200稀释。
（6）进入暗室，吸去PBS，同时加入二抗100ul，37度湿盒反应2h,封片。
（7）放置到荧光显微镜下观察。
