SKU#:2100111001
LotNo.03A01
Igtype:rabbitIgG
Size:100μg/vial
Specificity:Human,mouse,rat.Nocrossreactivitywithotherproteins.
Immunogen:AsyntheticpeptidecorrespondingtoasequenceattheN-terminalofhumanALPL,differentfromtherelatedratandmousesequencebytwoaminoacids.
Purity:Immunogenaffinitypurified.
Applications:
Westernblot:At1-2μg/mlwiththeappropriatesystemtodetectALPLincellsandtissues.
Immunohistochemistry(P):At1-2μg/mltodetectALPLinformalinfixedandparaffinembeddedtissues.Boilingthesectionsisrequired.
Otherapplicationshavenotbeentested.
Optimaldilutionsshouldbedeterminedbyenduser.
Contents:Eachvialcontains5mgBSA,0.9mgNaCl,0.2mgNa2HPO4,0.05mg,Thimerosal,0.05mgNaN3.
Reconstitution:0.2mlofdistilledwaterwillyieldaconcentrationof500μg/ml.
EAt-20˚Cforoneyear.Afterreconstitution,at4˚Cforonemonth.Itcanalsobealiquottedandstoredfrozenat-20˚Cforlongertime.
1.Fedde,K.N.;Whyte,M.P.:Alkalinephosphatase(tissue-nonspecificisoenzyme)isa
phosphoethanolamineandpyridoxal-5-prime-phosphateectophosphatase:normaland
hypophosphatasiafibroblaststudy.Am.J.Hum.Genet.47:767-775,1990.
2.Weiss,M.J.;Cole,D.E.C.;Ray,K.;Whyte,M.P.;Lafferty,M.A.;Mulivor,R.A.;Harris,H.:A
missensemutationinthehumanliver/bone/kidneyalkalinephosphatasegenecausingalethalformof
hypophosphatasia.Proc.Nat.Acad.Sci.85:7666-7669,1988.
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1取组织
(1) 灌注固定:暴露心脏,将注射针头插入左心室,剪开右心耳,快速灌注PBS,待右心耳处流出澄清液体,换4%多聚甲醛灌注到大鼠四肢强直为止,快速取脑和肾。
(2) 固定:将组织置于4%多聚甲醛中固定15小时
(3) 脱水:将组织放入30% 蔗糖溶液中直至下沉
(4) 切片:脑组织冰冻切片20微米,37度烘干2h以上;
(5)将切片放置-80度保存,随用随取。
2免疫单标记
(1)做抗原修复(0.4g柠檬酸、3g柠檬酸钠、1000ml水配制成溶液,放到水浴箱中90~94℃保存15min),冷却后, 用1*PBS反复洗标本10min,吸去PBS,同时向标本加渗透液(配0.4%trition液,然后将BSA加入到配好的trition液中,配成1%浓度)100ul,常温下湿盒反应1h。
(2) 吸去渗透液,同时向标本加block液(5%封闭用正常山羊血清)100ul,常温下湿盒反应5h。
(3) 吸去block液,同时向标本加入1:50稀释的羊抗鼠一抗100ul,37度湿盒反应过夜。
(4)吸去一抗,并回收,用1*PBS洗液反复洗15min。
(5)快速从冰箱中取出驴抗羊的二抗,并立即用锡纸包裹,注入到一个新的以锡纸包裹的tube管中并用PBS以1:200稀释。
(6)进入暗室,吸去PBS,同时加入二抗100ul,37度湿盒反应2h,封片。
(7)放置到荧光显微镜下观察。
其次,察看次目的蛋白的存在形式,有没有多聚体形式及变构形式;
最后,查看多家抗体公司的DATA,看看别人的WB做出来的条带的位置。
根据你说的,特异识别多个组织中的同样大小的条带,我觉得很可能就是你的目的蛋白。
不过多克隆抗体因为有多个结合位点,事实上的特异性并不如单克隆抗体,所以一般Western blot都尽量要求使用单克隆抗体。以保证实验结果准确可靠
1.单克隆抗体的优点:
(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代,只要不发生细胞株的基因突变,就可以不断的生产高特异性、高均一性的抗体.
(2)可以用相对不纯的抗原,获得大量高度特异的、均一的抗体.
(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体,所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法,如IRMA和ELISA等.
(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能,可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗.
2.单克隆抗体的局限性:
(1)单克隆抗体固定的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围.由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应,所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成.
(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体.
(3)制备技术复杂,而且费时费工,所以单克隆抗体的价格也较高.
制备抗体都需要进行纯化处理
清冷冻干燥后保存。

