ChIPresultsobtainedwiththeantibodydirectedagainstH3K9me3S10p
ChIPassayswereperformedusinghumanHeLacellstreatedwithcolcemid,theantibodyagainstH3K9me3S10p(Cat.#25273)andoptimizedPCRprimersetsforqPCR.ChIPwasperformedusingshearedchromatinfrom10,000cellsperIP.Atitrationoftheantibodyconsistingof1,5,and10µlperChIPexperimentwasanalyzed.Additionally,thesametitrationwasanalyzedafterincubationoftheantibodywith5nmolofthecorrespondingblockingpeptidefor1houratroomtemperature.IgG(5µg/IP)wasusedasnegativeIPcontrol.QPCRwasperformedwithprimersforthepromoteroftheactivegenesGAPDHandc-fosandfortheheterochromatinMarkerSat2.Figure1showstherecovery,expressedasa%ofinput(therelativeamountofimmunoprecipitatedDNAcomparedtoinputDNAafterqPCRanalysis).
Determinationofthetiter
Todeterminethetiter,anELISAwasperformedusingaserialdilutionoftheantibodydirectedagainsthumanH3K9me3S10p(Cat.#25273).Theantigenusedwasapeptidecontainingthehistonemodificationofinterest.Byplottingtheabsorbanceagainsttheantibodydilution(Figure2),thetiteroftheantibodywasestimatedtobe1:87,000.
CrossreactivitytestusingtheantibodydirectedagainstH3K9me3S10p
ADotBlotanalysiswasperformedtotestthecrossreactivityoftheantibodyagainstH3K9me3S10p(Cat.#25273)withpeptidescontainingothermodificationsandunmodifiedsequencesofhistoneH3.Onehundredto0.2pmolofthepeptidecontainingtherespectivehistonemodificationwerespottedonamembrane.Theantibodywasusedatadilutionof1:1,000.Figure3showsahighspecificityoftheantibodyforthemodificationofinterest.
WesternblotanalysisusingtheantibodydirectedagainstH3K9me3S10p
HeLacellsweretreatedwithcolcemidtoblockthecellcycleinmetaphaseand15µgofhistoneextractsofthesecellswereanalyzedbyWesternblotwiththeantibodyagainstH3K9me3S10p(Cat.#25273)diluted1:500inTBS-Tweencontaining5%skimmedmilk.Thepositionoftheproteinofinterestisindicatedontheright;themarker(inkDa)isshownontheleft.TheresultoftheWesternanalysiswiththeantibodyisshowninlane2;lane1showsthesameanalysisafterincubationoftheantibodywith5nmolofthecorrespondingblockingpeptidefor1houratroomtemperature.
ImmunofluorescenceusingtheantibodydirectedagainstH3K9me3S10p
HeLacellswerestainedwiththeantibodyagainstH3K9me3S10p(Cat.#25273)andwithDAPI.Cellswerefixedwith4%formaldehydefor10min.andblockedwithPBS/TX-100containing5%normalgoatserumand1%BSA.ThecellswereimmunofluorescentlylabelledwiththeH3K9me3S10pantibody(left)diluted1:500inblockingsolutionfollowedbyananti-rabbitantibodyconjugatedtoAlexa488.ThemiddlepanelshowsstainingofthenucleiwithDAPI.Amergeofthetwostainingsisshownontheright.
Storeat–80°Cforupto2years.Centrifugeafterfirstthawtomaximizeproductrecovery.Aliquottoavoidrepeatedfreeze/thawcycles.Aliquotsmaybestoredat–20°Cforatleastonemonth.
ELISA(1:1000–1:10,000)
DB(1:1000)
WB(1:500)
IF(1:500)
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其次，察看次目的蛋白的存在形式，有没有多聚体形式及变构形式；
最后，查看多家抗体公司的DATA，看看别人的WB做出来的条带的位置。
根据你说的，特异识别多个组织中的同样大小的条带，我觉得很可能就是你的目的蛋白。
一般来说多克隆的阳性率高一些，但出现假阳性的比例也高一些。
没有marker，怎么知道你做的蛋白大小？
没有参照物，怎么知道你跑的快不快？
没有尺子，怎么知道你的size大小？
凭嘴说吗？
羊多抗免疫步骤和兔多抗免疫步骤一样的，周期也是一样的，就是免疫的部位不同，羊的免疫部位是：羊的小腿内侧皮下。采血部位是：颈静脉；放血部位是：颈静脉；最后收集血的部位：颈动脉。希望对你有帮助。
单克隆抗体这项新技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性问题，可用于探讨: ①蛋白质的精细结构；②淋巴细胞亚群的表面新抗原；③组织相容性抗原；④激素和药物的放射免疫（或酶免疫）分析；⑤肿瘤的定位和分类；⑥纯化微生物和寄生虫抗原；⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法 (“导弹”疗法,利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合，将药物带至病灶部位.。
因此，单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究，为人类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景。
单克隆抗体结构相似且均一,有高度特异性
抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高，它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线，计算各自的结合率，求出各自在 IC50时的浓度，并按下列公式计算交叉反应率。 如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管，而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时，表示 这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为 0，即该血清的特异性较好。
抗体的亲和力 是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示，K的单位是L/mol，通常K的范围在 108 ～1010 /mol，也有多达 1014 /mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选，确定抗体的用途，验证抗体的均一性等均有重要意义。向左转|向右转
