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鼠IGG对于羊来说是异物,所以当羊接触鼠IGG就会产生相应的抗体,称为羊抗鼠IgG抗体.
又由于自然存在的抗原大都存在多个抗原表位,会刺激机体产生多种针对同一抗原的不同抗原表位相应的不同抗体.
单克隆抗体是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇的特异性抗体。
单克隆抗体这项新技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性问题,可用于探讨: ①蛋白质的精细结构;②淋巴细胞亚群的表面新抗原;③组织相容性抗原;④激素和药物的放射免疫(或酶免疫)分析;⑤肿瘤的定位和分类;⑥纯化微生物和寄生虫抗原;⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法 (“导弹”疗法,利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合,将药物带至病灶部位.。
因此,单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究,为人类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景。
一、多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤:
1、制备抗原。
2、选择实验动物。
3、动物免疫。
4、试取血进行测试,看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫,杀死实验动物,采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。
二、抗体分类
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体(Monoclone antibody)。由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是多克隆抗体;除了抗原决定簇的多样性以外,同样一类抗原决定簇,也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。多克隆抗体是由异源抗原(大分子抗原、半抗原偶联物)刺激机体产生免疫反应,有机体浆细胞分泌的一组免疫球蛋白。多克隆抗体由于其可识别多个抗原表位、可引起沉淀反应,制备时间短,成本低的原因广泛应用于研究和诊断方面。
三、免疫方法
可以采用以下各种方法之一进行免疫。
(1)淋巴结注射法:①在兔的两后足跖部皮下(或皮内)注射活卡介苗 50mg(每侧约0.30ml) 。7~10 天后,兔跖及腘肌淋巴结肿大;②于肿大的两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG 乳化抗原 0.50ml(含 IgG 5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml);③必要时,14 天后,重复步骤②一次;④再过 7 天后,于两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的 IgG 乳化抗原0.50ml(含IgG5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml) ;⑤5~7天后,耳静脉采血。测定血清效价。
(2)皮下多点注射法:①家兔两侧掌(跖内各注射含有完全佐剂抗原 0.10ml(IgG 含量5mg/ml) ;②7~10 天后,脊柱两侧多点(颈、胸、腰椎各两点、共 6 点)皮下注射含不完全佐剂5的抗原,每点 0.50ml;③7~10 天后,脊柱两侧重复注射一次;④7~10 天后试血。不合格者重复步骤③。
(3)多途径联合注射法:①两侧掌(跖)内侧皮下注射含完全佐剂抗原 0.50ml(IgG 量为 5mg/ml) ;②14 天后,多点皮下注射含有不完全佐剂抗原;③7 天后,耳静脉注射不含佐剂的抗原 2ml;④测定血清抗体效价,不合格者重复步骤③,并适当递增 IgG 量。
根据不同应用领域的要求,正确的选择和应用.
1.单克隆抗体的优点:
(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代,只要不发生细胞株的基因突变,就可以不断的生产高特异性、高均一性的抗体.
(2)可以用相对不纯的抗原,获得大量高度特异的、均一的抗体.
(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体,所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法,如IRMA和ELISA等.
(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能,可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗.
2.单克隆抗体的局限性:
(1)单克隆抗体固定的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围.由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应,所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成.
(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体.
(3)制备技术复杂,而且费时费工,所以单克隆抗体的价格也较高.
从化学结构上来看多克隆抗体都是极其不均一,呈高度异质性.
单克隆抗体结构相似且均一,有高度特异性
我想做Westernblot,测大鼠NGF、
BDNF、NT-3、GDNF,我查文献有
抗大鼠NGF、BDNF、NT-3、GDNF
多克隆抗体,但是没有具体名称,想问一下园子里有知道抗大鼠NGF、BDNF、NT-3、GDNF多克隆抗体的信息的吗?先谢过!
这个没有硬性规定,要根据实验情况而定。如果有文献参考,也可以先用发表的方法。
一般来说多克隆的阳性率高一些,但出现假阳性的比例也高一些。
现在,国内做抗体的公司是比较多的,有些公司名为抗体制备公司,他们接到后在外包给有实力的做,一定要看清楚。其中美国的ABclonal的还不错,要是用重组蛋白作为免疫原,最重要的是抗原区域的设 计,他们中文名字叫什么爱博泰克,记不清了。
请问各位,做免疫组化用单克隆抗体好,还是多克隆抗体好。这两个有什么区别,顺便,大家帮我看看我的免疫荧光实验步骤有没有什么太大的问题。谢谢各位。
1取组织
(1) 灌注固定:暴露心脏,将注射针头插入左心室,剪开右心耳,快速灌注PBS,待右心耳处流出澄清液体,换4%多聚甲醛灌注到大鼠四肢强直为止,快速取脑和肾。
(2) 固定:将组织置于4%多聚甲醛中固定15小时
(3) 脱水:将组织放入30% 蔗糖溶液中直至下沉
(4) 切片:脑组织冰冻切片20微米,37度烘干2h以上;
(5)将切片放置-80度保存,随用随取。
2免疫单标记
(1)做抗原修复(0.4g柠檬酸、3g柠檬酸钠、1000ml水配制成溶液,放到水浴箱中90~94℃保存15min),冷却后, 用1*PBS反复洗标本10min,吸去PBS,同时向标本加渗透液(配0.4%trition液,然后将BSA加入到配好的trition液中,配成1%浓度)100ul,常温下湿盒反应1h。
(2) 吸去渗透液,同时向标本加block液(5%封闭用正常山羊血清)100ul,常温下湿盒反应5h。
(3) 吸去block液,同时向标本加入1:50稀释的羊抗鼠一抗100ul,37度湿盒反应过夜。
(4)吸去一抗,并回收,用1*PBS洗液反复洗15min。
(5)快速从冰箱中取出驴抗羊的二抗,并立即用锡纸包裹,注入到一个新的以锡纸包裹的tube管中并用PBS以1:200稀释。
(6)进入暗室,吸去PBS,同时加入二抗100ul,37度湿盒反应2h,封片。
(7)放置到荧光显微镜下观察。
多克隆抗体存在于免疫动物的血清中,可通过直接分离血清获得。金开瑞的多克隆抗体制备平台,以抗体平台为核心建立了一系列技术平台和动物养殖基地,可以提供包括兔、小鼠、大鼠、豚鼠等多个系统的多克隆抗体 制备,供您自由选择属于您的需求!