【求助】GAPDH做内参，请问有做出条带的条件（抗体浓度），多谢
2021-08-09
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gyzyxy
用户
我做这个，santa的抗体，中杉分装的，一抗1：1000，二抗1：5000（中杉进口分装）
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doctorliencheng
用户我用碧云天的一抗，1：500稀释，发出来很好，就是回收的抗体不好用，好像也是某种进口抗体被他们分装的
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zl811121
用户以GAPDH为内参的我做出来了，但目的蛋白的我没做出来。GAPDH为内参：一抗用的碧云天分装的抗体，浓度1：5000，二抗用的中杉的，浓度1：500.请问：我的组织放在-70度冰箱半年了，提的蛋白做WB，内参能做出来，是不是说明蛋白没问题？可是目的蛋白怎么一条带都没有了？希望高手给与指点。
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wuushark
用户常遇到的情况是GADPH做的出来,目的条带出不来的.个人也遇到过这样的情况,而且也是你说的那个公司,做了三次,次次如此,后来找别人要了一个其他公司的GADPH,一次成功.你找别人要点其他内参抗体来试试吧.Santa的抗体也算不上什么好抗体了,质量并不稳定.
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yjh263
用户我用GAPDH（康成的，1：1000做的，可回收用两三次），和ANTI-HA单抗（Roche，1：1000）混合一起做，效果还是很好的，没有互相干扰的现象发生。
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zl811121
用户以GAPDH为内参的我做出来了，但目的蛋白的我没做出来。GAPDH为内参：一抗用的碧云天分装的抗体，浓度1：5000，二抗用的中杉的，浓度1：500.请问：我的组织放在-70度冰箱半年了，提的蛋白做WB，内参能做出来，是不是说明蛋白没问题？可是目的蛋白怎么一条带都没有了？希望高手给与指点。
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zifanqie_00
用户santa的一抗，浓度为1：400，二抗我用的是1：2000
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