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eylabs
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Colloidal Gold Conjugated Vicia villosa Lectin (Hairy Vetch) -VVA-, available in 5-40nm particle sizes (please select above). Additional sizes available upon request, surcharges will apply.

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最近准备做WB,但是对抗体选择还是很困惑,作为生手我担心用单克隆抗体做不出条带(看网上写的多克隆的效价高),但是发现要买的一抗abcam 只有单克隆,那我的内参GAPDH 也要买单克隆抗体么? 谢谢!如果买单克隆的内参抗体国内的杭州至贤的产品 有用过的么? 谢谢!
内个,个人觉得比较价格还是很有说服力的,一分价钱一分货。
虽然没有具体用过检测这个抗原的抗体,但是如果希望抗体特异性好点,能检测丰度低的蛋白,还是选Abcam吧,Santa有时候全凭人品了,内参抗体什么的还能凑活,其他的比较勉强。
测的是某种特定蛋白的量。或者是说测定某种蛋白是否存在于样品中,因为WB只能做半定量。
因为这个实验用到了抗体,抗体是特异识别某一种蛋白的,所以只要能检测到信号,说明样品中有该蛋白存在,如果有相应的对照,也能半定量说明该蛋白的量如何。
actin
GAPDH
万能内参
主要看你的目标蛋白的分子量多大,“目标蛋白要与内参蛋白的分子量差异大!”
方便检测
核蛋白,有很多种,分子量不同
膜蛋白,有很多很多种,分子量不同
浆蛋白,有成千上万种,分子量不同。
具体实验,具体目的蛋白,具体的内参。
内参抗体种类很多,比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Lamin B等,那么针对自己的实验,我们该如何选择呢?下面简单介绍下选择内参抗体应遵循的原则:

一.样本种属来源:
首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。
1、哺乳动物的组织或者细胞样本,通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,K atpase等。

2、植物来源实验样本,则可以选择plantactin、Rubisco等。

3、其他来源样本研究较少,所以就应该参照文献报导,选择合适的蛋白作为内参。

二.目的蛋白分子量:
选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。比如目的蛋白分子量为45KD,此时不适宜选择β-actin作为内参,可以考虑选择GAPDH或者β-tubulin作为内参。

三.目的蛋白表达部位:
就一般的蛋白检测来说,β-actin、β-Tubulin抗体等就可以了,而针对于核蛋白的定量,特别是样本蛋白就是核蛋白时,选择恰当的核蛋白内参则更能体现内部参照的价值。常用的核内参抗体有Lamin A、Lamin B、Histone H3,除此之外,其它常见的核蛋白内参还有PCNA、K70、K80等,在一些文献报道中,Erk2、TATA binding protein(TBP)以及c-Jun、c-Fos等都有使用。而对于膜蛋白检测,常用的内参抗体为Na,K ATPase。对于线粒体蛋白的检测,常用VDAC1和COX IV作为内参抗体。

以上几条原则只是针对通常情况,但是需要注意的问题是——内参的选择需要考虑实际的试验环境,比如某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,不适合做内参。比如在涉及细胞增殖相关试验中,c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参;而在凋亡实验时,TBP、Lamin等也不适合作为内参。因此设计实验方案的时候应该考虑这些因素并查询相应文献,在实验过程中也应该注意如果内参表达出现异常,应考虑这方面因素。
本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。嘿嘿。可以这么说吧。比如什么内参之类的,或者是表达丰度高的蛋白其实。具体到目的蛋白了就各见春秋了。
常用的actin,GAPDH内参抗体都是与人,动物有关。怎么没有微生物方面的内参抗体啊?
我要做酵母膜蛋白的westernblot,不知道选用何种内参抗体,有人作过吗?如能解惑,不甚感激。谢谢!
免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。
所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确,但是在定量上不够准确。
western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品,转移到固相载体上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。
western blot因为有内参标定,所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化
Western Blot内参抗体选择原则 实验方法123
他曾像风一样自由2021-07-30
请问westernblot什么时候加内参的抗体呀?有内参的一抗二抗吗?
跑电泳后就要把胶切开吗?(把目和蛋白条带和内参条带分开)还是等转膜完成后,再将目的蛋白条带和内参跳海分开呢?
很正常。内参有证明蛋白样品没问题。没有目的带原因很多。1.目的蛋白是否表达量很低,因为内参表达是很高的。2.抗体的选择是否有问题,有没有阳性对照?? 是一点都没有?还是能看到一点点?
高保真生物技术有限公司~实验整体外包服务商~
western内参GAPDH123
wqdwqdqdwqd2021-07-20
GAPDH可以作为胃癌临床样本组织westernblot的内参抗体吗?
如何选择内参抗体? 123
五味子1012021-08-11
我要做两个指标,检测这两个指标分别在大鼠和人肝癌细胞中的表达。
其中一个指标的一抗来源于兔,另一个一抗来源于鼠。前几天跟试剂公司联系购买内参抗体时,他们说内参抗体是根据目的蛋白的一抗来定的,要我买两个内参抗体和相应的二抗,这让我感到很纳闷。我想知道内参的选择是根据什么原则?
我觉得内参只是一个参照,内参抗体跟目的蛋白的一抗有直接联系吗?有没有可以通用于人肝癌细胞和大鼠肝癌细胞的内参抗体,能否帮忙推荐一个,谢谢.
在图书馆也没有找到这方面很详细和确切的论述,急切期盼您的指导!!!谢谢!!!
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