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能显色，说明你的HRP标记BSA成功了。用BSA封了的孔也显色（理论上不显色），最大的可能是你的稀释度不够，ELISA灵敏度很高的，你如果标得好的话，应该是要稀释一万到十万倍，这样阴性值才会不高。
你用BSA封闭没什么意思，可以换一种，比如明胶，酪蛋白等。
将HRP标记BSA稀释成一定的梯度。

一、血清样品采集和处理：
　　对于艾滋病和HIV感染的诊断，血清样品检测HIV抗体。可用真空采血管采血5—10ml（确定采样量）静脉血，室温下自然放置1—2h，待血液凝固后用3000rpm，离心15分钟，吸取血清HIV抗体检测。血清样品置2—8℃冰箱保存7天。
　　若用检测试剂检测HIV抗体，也可用末梢全血，成人、儿童或幼儿可选择中指、无名指采集、足跟部位采血。采血部位用75%酒精或碘伏认真消毒皮肤，用EDTA毛细管吸取血样。采血结束后，彻底止血，完成后的穿刺针头丢弃于耐穿透的容器内，妥善处理，严防职业暴露损伤。
　　采集血浆或全血应实验项目要求选用的抗凝剂，CD4/CD8+T淋巴细胞测定可选用EDTA或肝素。本实验室完成的实验尽早完成，完成检测项目，采集后在规定限时内及时送到，避开采集不当、暂存环境与时间的延误等因素而影响检测结果，如要检测CD4/CD8+T淋巴细胞测定的样品应选择合适的抗凝剂， 血样检测抗凝剂用EDTA（5 ml）若用EDTA钾盐血样品应在30h以内，尽早（8h以内）处理用ACD或肝素抗凝，血样在48h以内，尽早（8h）处理。静脉采集血样运用EDTA钾盐真空管，采集后立即颠倒混匀8--10次，使血液与抗凝剂混匀，对样品编号、日期、采集时间。
　　二、样品的保存：
　　用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放在-20℃，短期在一周内检测的样品可存放于2-8℃。HIV检测阳性血清样品可保存至少十年。艾滋病筛查实验室存放阳性血清，阳性血清有资质的实验室可存放（确认艾滋病实验室）用于CD4/CD8+T淋巴细胞测定样品采集时
间超过48小时则检测。HIV检测阳性反应血清样品均保有着艾滋病检测确认实验室，，在HIV阳性反应血清样品较多的地区，艾滋病检测确认实验室应配置-20℃的低温冰箱和-80℃的超低温冰箱保存。
　　三、样品的运送：
　　确认阳性反应的血清或血浆，应WHO的三级包装系统。层容器：装样品、防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上有明确的标记、受检者的姓名、种类和采集时间。在试管周围应垫有缓冲吸水，以防碰碎。随样品应附有送检单。要填写送检单种类信息，分开放置。层容器：要求耐受性好的、防渗漏、容纳保护层容器，容器便于消毒处理。层容器：是运输用于外层包装内，应易于消毒。在层容器外面要贴有标签（注明数量、收样单位等内容）血清或血浆样品应在2--8℃条件下专人运送。
　　检测检测CD4/CD8+T淋巴细胞测定的清或血浆温样品应在室温下（18--23℃）运送。但三级包装要求将盛样品的试管放好，避开使用玻璃容器，以保证不会破碎和渗漏。运送要有感染防护措施。
　　四、样品的接收
　　在有感染源设备的实验室内由经过培训、则在生物安全柜中戴手套、口罩、戴防护衣、带防护眼镜、的工作人员打开，用后的包裹应消毒。认真核对样品盒送检单、检查样品有无破损和渗漏，如渗漏立即将存留的样品移出，对样品管和渗漏消毒，检查样品情况，有无溶血、微生物污染、血脂过高及黄疸等情况，污染或溶血等情况样品被接受，则应将样品安全废弃，并要将样品情况立即通知送样人或单位。打开标本容器时要小心，以防皮肤或粘膜污染，以防内容物泼溅。
aware天猫唾液检测不用抽血！

我买的santa crua的抗体sc-7787（FLAG标签抗体），做western，结果融合蛋白用目的蛋白的抗体能检测出来。用FLAG标签抗体就做不出来，这应该说明抗体不行吧，santa crua得是不是很差阿？DAB显色，操作没问题。
有用过FLAG标签抗体的高手们来指点下，FLAG标签抗体那个公司的效果好啊，我准备买。
同时希望能提供宝贵意见。
谢谢各位阿

（一）辣根过氧化物酶标抗体制备技术编辑本段辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）广泛分布于植物中，因辣根中含量最高而得名，由无色酶蛋白和深棕色铁卟啉（辅基）构成一种糖蛋白（含糖18%）。
此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。

楼主新手，最近在做一个蛋白的抗体，表达了目的蛋白的GST融合蛋白送去免疫兔子，现在收到了返回的抗体，想用His标签的融合蛋白对抗体进行纯化，我只知道Ni柱纯化His标签蛋白的方法，最终是要用咪唑洗下融合蛋白，但是现在想把His标签与Ni柱之间的结合固定，从而纯化洗脱抗体，但是不知道His标签与Ni柱固定的的方法...！！！老板发飙了，小女子**大神指点啊55555

Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统，广泛应用于Western blotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。
选择Flag标签抗体，主要根据实验的需要。一个抗体检测后应用类型越多，使用中选择余地就越大。要综合考虑抗体来源，特异性，稳定性，效价等等因素

最近要买GST标签抗体，但是看santa cruz的抗体有抗原表位，请问要考虑吗？为什么呢？
例如 GST (1-109):

•epitope corresponding to amino acids 1-109 mapping at the N-terminus of GST of Schistosoma japonicum origin
•recommended for detection of GST fusion proteins and glutathione-S-transferase (GST) of Schistosoma japonicum origin by WB, IP, IF and ELISA
还有Schistosoma japonicum origin 跟我载体pGEX4T-1表达的融合蛋白可用Western Blot吗?它们有什么关系？
十分感谢

小弟我最近在做Western，目的蛋白是一个加了6×His和Flag标签的融合蛋白，不过实验室还存有Anti-His抗体（并不是Anti-6×His抗体），就拿这个抗体跑了WB，但是内参什么的都很好，目的条带出不来，不知道是不是与一抗有关。

另外质粒转染细胞应该也没问题，设的阳性对照pGFP转染的荧光量很高（转染效率在90%左右），所以理论上讲蛋白表达和提取没有问题。

在这里先谢过！

标签蛋白抗体是一类经过亲和纯化的小鼠单克隆抗体。用于检测各种商品化表达载体上的标签序列（如：MyC、His、GST、HA等），籍以分析检目的蛋白的表达含量及其功能。其原理是抗原—抗体反应，这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签融合蛋白。标签抗体是开展基因蛋白表达、信号转导和基因功能研究的常用工具。
百度上的，，，，，搬运

非特异性吧~ 不能排除封闭和抗体的问题 现在的温度封闭一个小时怕不够，我们实验室用的25℃封闭2h，一般没有非特异性，封闭用的是牛奶和TBST 不好的抗体容易出非特异性，以前出现过这种情况，换抗体就好了

想做个蛋白的定位，可是没有好抗体，就想做个转基因小鼠，在基因后面加一个标签。但是之前没有相关经验，不知道哪一种tag更好呢，更适合在小鼠里表达呢？因为我蛋白比较小，加GFP那么大的话可能会影响表达。比较小的tag例如HA，Flag还有His等，不知道哪个更适合一些？求大神们给些经验。

本数据来源于百度地图，最终结果以百度地图最新数据为准。如何根据蛋白的活性部位选择相应的抗体进行免疫荧光实验？
Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统，广泛应用于Westernblotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。Flag标签是一个与重组蛋白相融合的由8个亲水氨基酸（Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）组成的多肽片断。FLAG标签只有8个氨基酸组成，因此它不会占据其他表位与结合域，避免导致融合蛋白的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点，FLAG标签倾向于定位在融合蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。
由于Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，这一系统已用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳细胞。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。EarthOx的Anti-FlagTagMonoclonalAntibody可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag融合表达蛋白等。比如在免疫荧光IF的实验里，同时配合EarthOx的Dylight549荧光二抗，使用该抗体可以准确的定位出Flag融合表达蛋白在细胞内的位置（如图红色显示部分）。另外，做融合表达分析前，通过免疫共沉淀技术获得Flag融合表达蛋白也是非常重要的一步，因此选择一个合适的、可用于免疫共沉淀（Immunoprecipitation，IP）Flag标签抗体也是很必要的。EarthOx的Anti-FlagTagMonoclonalAntibody不仅能应用于细胞内定位的IF实验，同样还能应用于IP实验。1:200甚至更高的IP实验稀释比率，也说明了该抗体本身的具有很高的效价，同时，因为是单克隆抗体，因此特异性也很高。高效价所对应的高稀释比率也意味着超高性价比。