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MoBiTec/Anti-TNF-a (IN), Z-FISH®/Primary Antibodies/AS-55383
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MoBiTec/Anti-TNF-a (IN), Z-FISH®/Primary Antibodies/AS-55383
品牌 / 
Mo Bi Tec
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ProductSubcategory:PrimaryAntibodies
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MoBiTecGmbH是一家私人控股公司,由StephanDiekmann教授于1987年创立。与Max-Planck学会的密切关系以及德国领先的研究中心之一哥廷根的所在地促进了与某些研究中心的密切合作。德国最具创造力的科学家。此外,MoBiTec一直与欧洲和北美的科学家广泛合作,包括法国巴斯德研究所和荷兰Vrije大学的科学家。通过将许多研究人员的精彩创意商业化,MoBiTec能够提供一系列独特的高质量产品和简化的协议,使实验室生活更轻松,并为实际研究留出更多时间。MoBiTec的产品包括e。G。用于体内检测蛋白质-蛋白质或DNA-蛋白质相互作用的双杂交系统,用于筛选特定肽配体的噬菌粒展示系统和选择具有特异性结合特性的新蛋白质,方便的LamBDaPS基因组文库用于克隆的多功能DNA载体,表达和分析靶基因,有效表达和纯化重组蛋白试剂盒细胞转染试剂和细胞培养工具,固定化和可溶性酶,许多用于基因组学和蛋白质组学研究的产品(例如用于PCR,核酸和蛋白质纯化和分析),众多抗体细胞因子生长因子和重组蛋白,优质荧光试剂和试剂盒(如蛋白标记试剂盒,标记抗体,细胞染色试剂,柱和凝胶电泳附件)。与其自有产品线并行,MoBiTec分销德国多家国际公司的产品,包括荧光探针和研究化学品(AnaSpec,TEFLabs),量子点,各种DNA纯化试剂盒DNA聚合酶(EdgeBio),诊断工具(ZJBioTech)),凝胶电泳配件(Amresco,ClareChemical),糖生物学产品(DextraLaboratories,Sumitomo),细胞转染试剂(Mirus)以及抗体,蛋白质,底物,精细化学品和分子和细胞生物学试剂盒 -特别是病毒学,免疫学,神经生物学,细胞凋亡,信号转导,细胞增殖,细胞毒性和癌症研究(MBLI,AGScientific,Amresco,AdarBiotech,AnaSpec,Echelon)。MoBiTec提供全面的服务,从清晰完整的产品文档开始,为客户提供个性化的建议和技术服务。MoBiTec产品通过MoBiTec的总部在德国分销,在其他国家由分销商分销。此外,MoBiTec不断寻求新产品和可销售的许可技术,因此对科学合作非常感兴趣,以开发创新的产品理念。


MoBiTec拥有来自欧洲和北美的研究人员,包括法国的Pasteur研究中心和荷兰的Vrije大学的科学家。MoBiTec公司能提供独一无二的高质量产品,从而简化实验设计,而留出更多更宝贵的时间用于实际的研究。产品包括:双杂交和单杂交系统——体内蛋白-蛋白和DNA-蛋白关系,噬菌体展示系统——筛选特殊的多肽配体和选择具有特异性结合特性的新的蛋白质,LamdaPS基因文库,用于克隆的多功能DNA载体,靶基因的表达与分析,重组蛋白质高效表达和纯化试剂盒,细胞转染试剂和细胞培养工具,各种固体和溶解状态的酶,基因组学和蛋白组学研究产品(PCR,核酸,蛋白质纯化分析),各种抗体、细胞因子、生长因子、重组蛋白质,高级荧光试剂和试剂盒(蛋白质标记试剂盒,标记抗体,细胞染色试剂,钙指示器),亲和层析仪,凝胶分析工具——凝胶柱和凝胶电泳附件。



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2021-07-22
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磷酸缓冲溶液已经配好了,是不是在里面加辣根过氧化物酶就行了,加多少?最好说明出处,或者简单说一下怎么算的
抗甲状腺过氧化物酶抗体是诊断甲状腺自身免疫性疾病的首选指标,单一抗甲状腺过氧化物酶抗体升高是不能判断是什么疾病,需要进一步检查抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺微粒体抗体(TMAb)、TRAB、甲状腺彩超、甲状腺功能等。
1.若都为正常,那么并未有太大问题,只要定期复查就可以了。
2.如果TGAb、TMAb、甲状腺功能均高,那么就是桥本氏甲状腺炎并甲亢,需要抗甲亢治疗。
3.如果TGAb、TMAb高,甲状腺功能下降,那么就是桥本氏甲状腺炎并甲减,需要进行甲减治疗。
4.如果TGAb、TMAb高,甲状腺功能正常,那么就是桥本氏甲状腺炎,无需特殊治疗,只要定期复查甲状腺功能就可能以了,不过这种情况有可能以后演变成甲减或者甲亢。
EMSA结合反应:(1) 如下设置EMSA结合反应阴性对照反应:Nuclease-Free Water 7微升EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) 2微升细胞核蛋白或纯化的转录因子 0微升标记好的探针 1微升总体积 10微升样品反应:Nuclease-Free Water 5微升EMSA/Gel-Shift结合...
BAS-ELISA是在常规ELISA原理的基础上,结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用,而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样,结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应,既起到了多级放大作用,又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色,达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。
抗甲状腺过氧化物酶抗体是诊断甲状腺自身免疫性疾病的首选指标,单一抗甲状腺过氧化物酶抗体升高是不能判断,需要进一步检查抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺微粒体抗体(TMAb)、TRAB、甲状腺彩超、甲状腺功能等。
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过氧化物酶,酶学分类号为EC 1.11.1.7。 Donor+ H2O2--→Oxidized donor+2 H2O。
辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)比活性高,稳定,分子量小,纯酶容易制备,所以最常用。HRP广泛分布于植物界,辣根中含量高,它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白,糖含量18%。HRP由多个同功酶组成,分子量为40,000,等电点为PH3~9,酶催化的最适PH因供氢体不同而稍有差异,但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下饱和度硫酸铵溶液。HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm,一般以OD403nm /OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的纯度。高纯度的酶RZ值应在3.0左右(最高可达3.4)。RZ值越小,非酶蛋白就越多。 1) RZ>3 活性 >250u/mg, 主要应用于免疫学,是高纯度的过氧化酶。采用特殊色谱纯化技术以除去会影响免疫学反应的同工酶B .
2) RZ>2 活性 >180u/mg ,主要应用于临床化学,我们的客户也有将这个规格的产品应用于免疫学研究的。此时,一个标准化的分析方法就变得尤为重要。
3) RZ>1 活性 >100u/mg,主要应用于血糖试纸和尿液分析试纸。
4) RZ>0.6 活性 >60u/mg ,主要应用于尿液分析试纸。向左转|向右转
辣根过氧化物酶用于ELISA的标记用酶RP是一种分子量达44000的糖蛋白,由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成,中性糖和氨基糖约占18%。每一个HRP分子中含一个氯化血红素IX作辅基,该辅基在403nm波长处有最大吸收峰,而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有最大吸收。HRP在403nm的OD值与275nm的OD值之比,也就是所谓的RZ(ReinheitsZahl)值。RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量,并非表示HRP制剂的真正纯度,而且RZ值高的HRP制剂,并不意味着酶活性也高。但可以一纯酶溶液在10mm光径403nm波长下的吸光度来计算酶浓度[1%(W/V)酶溶液吸光度为22.5,浓度为227umol/L]。纯HRP干燥贮存于一200C可保持稳定,使用1.36mol/L甘油、10mmol/L磷酸钠、30umol/L牛血清白蛋白和20umol/L细胞色素C(pH7.4)溶液作为基质冷冻保存,可使酶结合物稳定数年。HRP对热及有机溶剂的作用比较稳定,用甲苯与石蜡切片处理或用纯乙醇或lo%甲醛水溶液固定做冷冻切片,均不能使其活性改变。氰化物或硫化物在10-5~10-6mol/L浓度时具有可逆性地抑制HRP的作用;氟化物、叠氮化合物或羟胺仅在高于10-3mol/L浓度时抑制HRP;HRP还可被羟甲基过氧化氢不可逆地抑制。强酸也是HRP的强烈的抑制剂。因此,在酶免疫测定常选用上述的某些化合物如氟化钠、叠氮钠和强酸等作为酶反应的终止剂。此外,在配制酶免疫测定的稀释缓冲液时,为防止酶失活,应避免使用叠氮钠作防腐剂。HRP的同工酶主要可分为三种类型:①含糖量高的酸性同工酶。②等电点接近于中性(或微碱)的含糖量相对较低的同工酶。③含糖量低的碱性(PI>11)同工酶。酶免疫试验中所使用的HRP,以PI为8.7~9.0的所谓“C”同工酶为主要组成成分,其他同工酶的活性则很低。“C”同工酶的共价结构由2个密切接近的区域组成,血红素基团则位于其间而成夹心结构,糖链以8个不同的部位结合于多肽。天然的酶所带的纯电荷极少;无游离的。—氨基,仅有2个可测出的组氨酸,6个赖氨酸似乎全被糖链外壳所遮盖。因此,HRP一般仅有1~2个可用于耦联的氨基。根据HRP的催化特性,ELISA中一般使用过氧化氢(H2O2)作为HRP底物之一,在供氢体(即色原底物)存在时,HRP与H2O2的反应迅速而又专一。由图4—1可见,HRP被H2O2二价地氧化形成复合物I,而复合物I又可与氢供体的二步连续的单价相互作用而还原至起始状态。复合物Ⅱ是被氧化的带一个电子的中间产物,当H2O2:过量,由于复合物Ⅲ或Ⅳ的形成,酶活性受抑制。30%的H2O2并不稳定。由于H2O2既为HRP的底物,也为其抑制剂,因而ELISA要想得到满意的测定结果,H2O2必须限定在一定的浓度范围内,终浓度通常为2~6mmol/L。然而在实际研究工作中,一般很少注意这一点。大多数研究者所使用的H2O2的浓度常较理想反应所需的量大2~4倍。吸附于固相的HRP较游离的HRP更易受过量H2O2的抑制。如果30%H:O:贮存液浓度经测定证实确为30%,则稀释10000—12000倍常是较为理想的底物。H2O2的摩尔消光系数为10mm光径240nm波长下为43.6,因此,可通过这种方式来检测H2O2工作溶液的浓度。固相ELISA中,当温度高于20~C时,HRP活性常较低,在底物溶液中加入非离子去垢剂聚山梨醇—20或TritonX-100可延迟HRP的失活,且可使反应温度加大,但非离子去垢剂的这种酶活性保护效应依氢供体的不同而有差异。如以2,2’—联氮—双—[3—乙基苯并噻唑啉]—6—磺酸(ABTS)为氢供体,则只能保护20%的酶活性,而以邻联茴香胺(ODA)为氢供体时,酶活性的保护提高至90%。HRP之所以是迄今为止在ELISA中应用最为广泛的标记用酶,主要是因为其一方面易于提取,价格相对低廉;另一方面性质稳定,耐热及有机溶剂的作用,与抗原或抗体耦联后,活陛很少受损失。
苯胺盐酸盐的结构简式 123
哊歞喞12021-07-29
DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一种借助辣根过氧化物酶(HRP),用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色的试剂盒。DAB,即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride,是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下,DAB会产生棕色沉淀。该棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在DAB显色后,还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。本试剂盒可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色,也可以用于Western等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。
HRP标记抗体的方法 酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法1. 原理 戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。2. 标记步骤 (1) 称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中,于室温静置过夜。 (2) 反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱,用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟,收集棕色流出液。如体积大于5ml,则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中,缓慢搅拌。 (3) 将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml,搅拌下逐滴加入酶溶液中。 (4) 用1M PH9.5碳酸缓冲液0.25ml,继续搅拌3?小时。 (5) 加0.2M赖氨酸0.25ml,混匀后,置室温2小时。 (6) 在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵,置4℃1小时。 (7) 3000rpm离心半小时,弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次,最后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。 (8) 将上述溶液装入透析袋中,对0.15M PH7.4的PB缓冲盐水透析,去除铵离子后(用萘氏试剂检测),10,000rpm离心30分钟去除沉淀,上清液即为酶结合物,分装后,冰冻保存。…………………… ……………………………… 更多具体材料请参考: 酶标签去除http://product.bio1000.com/100165/
通常用做光学和电子显微镜的组织化学示踪物。
英文名称:horseradish peroxidase;HRP
定义:一种糖蛋白,由于在辣根中该酶的含量很高,故名。它以铁卟啉为辅基,在过氧化氢存在时能催化苯酚、苯胺及其取代物聚合。
麦芽凝集素和辣根过氧化物酶两种物质单买很多公司都有,但你这复合物好像没见买,是不是自己可以通过什么手段将两种物质结合?
过氧化氢酶属于过氧化物酶,是包含关系。过氧化物酶的范围更大,其有过氧化氢酶的一切性质,和其没有的性质。过氧化氢酶:是催化过氧化氢分解成氧和水的酶,存在于细胞的过氧化物体内。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶,约占过氧化物酶体酶总量的40%。过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中,特别在肝脏中以高浓度存在。过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。过氧化氢酶也被用于食品包装,防止食物被氧化。过氧化物酶:这是很大的一族酶,这一类酶当中有很多酶的最理想底物为过氧化氢,还有一些则有机的氢过氧化物如过氧化脂类。过氧化物酶有时会在其活化位置上包含一个血红素辅因子。作用:(1)使毒性物质失活这种作用是过氧化氢酶利用过氧化氢氧化各种底物,如酚、甲酸、甲醛和乙醇等,氧化的结果使这些有毒性的物质变成无毒性的物质,同时也使H2O2进一步转变成无毒的H2O。这种解毒作用对于肝、肾特别重要,例如人们饮入的乙醇几乎有一半是以这种方式被氧化成乙醛的,从而解除了乙醇对细胞的毒性作用。(2)对氧浓度的调节作用过氧化物酶体与线粒体对氧的敏感性是不一样的,线粒体氧化所需的最佳氧浓度为2%左右,增加氧浓度,并不提高线粒体的氧化能力。过氧化物酶体的氧化率是随氧张力增强而成正比地提高。因此,在低浓度氧的条件下,线粒体利用氧的能力比过氧化物酶体强,但在高浓度氧的情况下,过氧化物酶体的氧化反应占主导地位,这种特性使过氧化物酶体具有使细胞免受高浓度氧的毒性作用。(3)脂肪酸的氧化动物组织中大约有25~50%的脂肪酸是在过氧化物酶体中氧化的,其他则是在线粒体中氧化的。另外,由于过氧化物酶体中有与磷脂合成相关的酶,所以过氧化物酶体也参与脂的合成。(4)含氮物质的代谢在大多数动物细胞中,尿酸氧化酶(urateoxidase)对于尿酸的氧化是必需的。尿酸是核苷酸和某些蛋白质降解代谢的产物,尿酸氧化酶可将这种代谢废物进一步氧化去除。另外,过氧化物酶体还参与其他的氮代谢,如转氨酶(aminotransferase)催化氨基的转移。过氧化物酶体的反应:各类氧化酶的共性是将底物氧化后,生成过氧化氢。RH2+O2→R+H2O2过氧化氢酶又可以利用过氧化氢,将其它底物(如醛、醇、酚)氧化。R′H2+H2O2→R′+2H2O此外当细胞中的H2O2过剩时,过氧化氢酶亦可催化以下反应:2H2O2→2H2O+O2
在不断搅拌下,每升滤液中慢慢加入226克硫酸铵粉末(相当于0.40饱和度),大约在1~2小时内加完,置冷室中放置过夜。次日将上清液小心地用虹吸管移出,下面浑浊液以3000转/分离心15分钟,弃沉淀,合并上清液。再按每升上清液加258克硫酸铵粉末(0.8饱和度)随加随搅拌,当硫酸铵全部溶解后,置冷室过夜。次日,虹吸出上清液,沉淀部分在冰冻离心机中以13000转/分离心20分钟,弃去上清液,收集沉淀。将沉淀悬浮于100~150毫升蒸馏水中(加水量要使沉淀全部溶解为止),分装于透析袋内,放在流动自来水中进行透析1~2天,直到硫酸铵透析完毕为止(可用5%乙酸钡溶液或奈氏试剂进行检查)。然后改换成用蒸馏水透析,中间更换2~3次,用0.1 mol/L硝酸银溶液检查透析外液无氯离子为止。
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