
Product Specifications:
Item#1004-G: rgp160 HIV-1 IIIB Conjugated to Colloidal Gold
Concentration: See vial
Volume/vial: 1ml Gold Conjugate
Diluent: 10mM Tris, pH 8; 5% BSA; 0.05 PEG; 0.02% NaN3
Storage: 4°C
Stability: At least 3 months at 4°C Minimum
Dilution: 1 : 50
Application: Dot Blot Assay-CD4 Binding, Dot Blot Assay-Anti-gp120 Antibody Binding, Immunohistochemistry.
Description: rgp160 HIV-1 IIIB conjugated to Colloidal Gold (25nm mean particle size).
Coupling Ratio: OD 520nm = 10; protein content approximately 25µg.
Specificity: Gold conjugated rgp160 binds to murine monoclonal antibodies of defined epitope specificity and human/rabbit polyclonal antibodies as determined by dot blot assays.
Biological Activity: Not determined.
Application and Instructions for use:
Recommended dilutions for use are approximate values. A dose dependent response assay should be performed to determine the optimal concentration for use in specific applications.
1. Dot blot assays may be performed in 1 : 100 dilution range depending on the concentration of solid phase CD4/Anti-gp120 in the test system.
2. Immunohistochemical studies may be performed in 1 : 50 dilution range.
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Application: Human diagnostics, CD4 binding, Drug screening, Human T-cell CD4 studies.
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Application: Human diagnostics, Human B and T-cell panning
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链接很容易,就用EDC或者CMC等碳二亚胺,是最容易在羧基和氨基之间催化形成酰胺键,反应条件就是0到4度,过夜,用磁力搅拌子温和搅拌,pH<7反应快,不过pH=7或稍微pH>7也关系不大。EDC或者CMC等碳二亚胺催化活性极高,而且一般的蛋白质的分子表面总有Lys,Arg,Asn,Gln,所以游离在分子表面的羧基和氨基总是不少的,参与反应的两种蛋白质用大致10:1的比例混合(哪种蛋白质便宜,哪种蛋白质的物质的量就大些,但是这不是全部原因),反应样品浓度就按照平时使用时的浓度或略微更低浓度(别用储存液的浓度)即可。很容易反应,而且EDC或者CMC等碳二亚胺是零臂连接试剂,用于空间位阻,形成多分子交联可能较小,即使形成了也很容易用分子筛层析按照分子量区分开。
参与反应的两种蛋白质用大致10:1的比例混合(哪种蛋白质便宜,哪种蛋白质的物质的量就大些,但是这不是全部原因),为了避免两种蛋白质之间发生交联成为串联,因为一种蛋白质形成串联的可能性低一些;即使要形成串联的蛋白质串珠,最好也不要是价格高的那种;另外,EDC或者CMC等碳二亚胺催化活性极高,室温下即会催化,所以要在0到4度,过夜,用磁力搅拌子温和搅拌,一方面避免碳二亚胺催化活性太高形成串联的蛋白质串珠,另一方面,保护蛋白质不变性;反应样品浓度就按照平时使用时的浓度或略微更低浓度(别用储存液的浓度)即可,为什么?因为浓度高了更易形成串联的蛋白质串珠结构,浓度低了,没有反应成功,通过分子筛层析还可以分离出来接着连接,如果形成了酰胺键再要专一性切开就没有那么容易了。
【过敏性咳嗽血清学IGE检查】
以过敏患者血清作为实验材料的本外试验方法称为血清学试验。其它体液如炎症部位分泌物、渗出物、灌洗液也可采用相同的实验方法进行检测。主要检测项目有总IgE和特异性IgE,即过敏原特异性IgE。
【什么是总IgE?】
IgE即免疫球蛋白E,是I型变态反应病如过敏性鼻炎、过敏性哮喘、异位性皮炎、湿疹、急慢性荨麻疹发病机制中起主要作用的免疫分子,因而在过敏反应的免疫学实验诊断中是首选的检测项目。总IgE是过敏性疾病的特异性检查项目,IgE水平增高提示I型变态反应病的可能性大,但不能用于判断过敏原。
【IgE的特点】
IgE是血清浓度最低的免疫球蛋白 ,只有血清中IgG浓度的万分之一。IgE对热不稳定,是半衰期最短一的免疫球蛋白 ,只有2.8天,与细胞表面结合的IgE半衰期稍长,8~14天,IgE由变应原入侵部位(鼻咽、支气管、胃肠道)的黏膜固有层中的浆细胞合成。在各类免疫球蛋白中,IgE是合成率最低、分解率最高的。属于亲细胞抗体,过敏体质者的胎儿脐带血中IgE浓度可能升高,检测脐血中IgE浓度可用于评估胎儿过敏体质的可能性。
【IgE检测方法】
通常用ELISA方法检测总IgE。由于血清IgE浓度很低,一般酶免疫试验方法的敏感性不足以检出血清IgE,现在常规实验室检测血清IgE的试剂盒采用生物素——抗生物素蛋白 放大的ELISA。试剂盒中所含用于制定标准曲线的IgE标准品和检测结果的IgE浓度单位与其它免疫球蛋白 不同,不是用mg/L表示,而是用u/ml或ku/l表示。
【IgE的正常值(参考范围)】:
血清IgE水平在正常人群中呈偏态分布,即多数人为0或接近于0,IgE水平越高的人数越少。因此计算平均值时应计算几何平均值才能反映其真实情况,即用对数转换后其分布才能近似正态分布。
健康人群血清IgE水平与年龄关系较大,小儿和老年人的IgE水平低于成年人。新生儿血清中IgE水平很低,接近于零。随年龄增长,IgE水平也不断升高,5~7岁后接近正常人水平。按Pharmacia公司提供的参考范围,1个月以内<12KU/L,1岁<11KU/L,2~4岁<33KU/L,5岁以上至成人<85KU/L.
过敏性疾病患者的血清IgE水平可达2000~8000KU/L,当IgE水平高于2000KU/L时应考虑寄生虫感染.
有时血清总IgE水平检测结果为0或参考范围内低值,并不能排除过敏性疾病的可能,须结合临床表现和血清特异性IgE检测结果进行判断.
【什么是特异性IgE检测(sIgE)?】
通常所称的过敏原检测,并非真正检测血液样本中的过敏原分子,而是间接地检测其中针对某种过敏原的特异性IgE分子,特异性IgE检测实际上是检测过敏原特异性IgE,即检测样本中针对某种变应原的特异性IgE,从而间接地判断患者是否对某种过敏原过敏。
环境中常见的过敏原包括以下类别:
寄生虫和微生物:各种螨类(屋尘螨和粉尘螨等)、各种真菌(点青霉、烟曲霉、分枝孢霉、交连孢霉等)、蟑螂。
植物花粉:各种草花粉(豚草、葎草、蒿草)、各种树花粉(桑树、柏树、悬铃木、桦树、榆树、柳树、杨树等)。
动物皮毛:猫、狗、马、鸽子等动物的毛和皮屑。
叶酸和生物素都属于B族维生素,
对维持机体的生理功能有重要作用。
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SP法是生物素-卵白素系统:生物素为一种小分子维生素,卵白素又称为抗生物素,SP法的染色步骤为一抗~生物素化二抗~ABC复合物~DAB显色,其中ABC复合物是由一分子抗生物素蛋白与三分子结合有HRP的生物素组合成的复合物。
PV法属于非生物素系统免疫组化方法,应该是称为二步法,是以高分子的葡聚糖为载体将多个二抗分子和酶结合在一起,代替了传统的二抗和三抗,是检测变得简单而且增加了敏感性。
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