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| 实验材料 | DNA 试剂、试剂盒 | 磷酸酶缓冲液封阻液牛血清蛋白TENBT 仪器、耗材 | 离心机分光光度计摇床 实验步骤 | 1. 用DNA稀释缓冲液，稀释生物素酰化标准DNA，浓度为0、1、2、5、10和20pg/μl。以同样稀释液处理待测DNA。 2. 对干硝酸纤维素滤膜：每个稀释度取1μl点膜，在80℃供干约1h接步骤4。 3. 对于足龙膜：每个稀释度取1μl点膜，晾干后用紫外照射法将DNA交联至膜上。接步骤4或化学发光检测。 4. 用少量体枳AP7.5液沆膜1min，在密封袋中（剪成合适大小），用10ml封阻液，37℃封闭1h注意排出气泡。 5. 稀释10μl亲和素-AP交联物至10mlAP7.5。剪去封闭袋一角挤出封闭液，用亲和素-AP交联物代替，重新封口，在旋转平台室温揺荡10min。 6. 从袋中取出滤膜移到一个浅盘中，用200mlAP7.5冼2次，每次15min。再用200mlAP9.5洗1次，10min，轻微摇荡。 7. 加入33μl75mg/ml的NBT至7.5mlAP9.5液中，混匀。再加入25μl 50mg/mlBCIP，混匀。 8. 在浅盘中避光温育溶液，不时观察直至发色达到满意程度为止。 |
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发布于 ： 2018-08-03
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