生物素化抗三聚氰胺抗体IgG
编号:XY-0904R
修复液:0.01M枸橼酸(pH6.0)或者0.05MEDTA(pH8.0)
{一}抗体修复方法:
方法1:沸水浴修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境,保持外部沸腾状态15min,自然冷却至室温;
方法2:微波修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中,高火5min,停火3min,中火5min,自然冷却至室温。
{二}抗体溶解方法:
方法1:我们的抗体(冻干粉)已经包含了0.01MPBS、1%BSA和0.1%防腐剂(叠氮钠或庆大霉素),您只需要加入灭菌的双蒸水就行了。抗体溶解后,置于-20℃保存,最好分装后使用,避免反复冻融,可保证至少1年有效;
方法2:也可以只加入一半体积的双蒸水,再用一半体积的甘油补足,置于-20℃保存,这样抗体不会冻,有利于抗体的稳定。
我们的抗体(冻干粉),在常温放置下,至少一个月有效;若在-20℃下保存(推荐),至少三年有效。
{三}常用试剂的配制:
1、抗体或免疫球蛋白稀释液0.01mol/LpH7.2PBS
试剂质量/容量NaH2PO4·2H2O0.39克Na2HPO41.27克NaCl0.85克NaN3200mgH2O(蒸馏水)至1000ml
2、ELISA洗液及HRP标记抗体稀释液pH7.4,PBST
试剂质量/容量NaCl2.0克KH2PO40.2克Na2HPO4·12H2O2.9克KCl0.2克NaN30.2克H2O至1000ml吐温(Tween)200.5ml注:4°C保存备用
3、包被液(简称CB)pH9.6
试剂质量/容量Na2CO31.59克NaHCO32.93克NaN30.2克H2O至1000ml注:密封盖好,4°C存放备用
4、ELISA底物液(可溶性底物)
试剂质量/容量磷酸-柠檬酸缓冲液pH5.00.1mol/L柠檬酸(21.014克/100ml)24.3ml0.2mol/LNa2HPO4(28.4克/1000ml)25.7mlH2O50ml注:4°C存放备用
5、DAB底物液(不溶性底物,组化病理等)
试剂质量/容量0.05mol/LpH7.6Tris-HCLTris6.05克HCL(36%)3.15克(约2.7ml浓HCL)H2O至1000ml注:DAB为3´,3´二氧基联苯胺,不溶性底物,呈棕红色
6、DAB溶液配制:(组化及Westernblot显色)
称DAB30mg,用0.05mol/LpH7.6Trs-HCL缓冲液100ml溶解,如有沉淀,过滤后使用,一般新鲜配制使用;
使用前加入1%H2O21ml至1.5ml,H2O2浓度为0.01%,混均后使用。
7、3′,3′,5′,5′,-四甲基联苯胺(TMB)溶液配制
用二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)或无水乙醇,将TMB配成1%浓度,4°C保存半年以内使用;
使用前,用pH5.0磷酸-柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml(1mg/TMB)1%TMB溶液中,再按每毫升TMB加入30%H2O21ul,混匀后立即使用。2NH2SO4终止后,450nm测定OD值。
8、1%离子琼脂胶配制液
作免疫双相扩散,单相扩散及免疫电泳中使用。
0.05UpH8.6巴比妥钠-HCL缓冲液。
试剂质量/容量巴比妥钠23.8克1mol/LHCL34.5mlH2O2150ml