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Sciencell/Recombinant Cys-Protein G/1002-02/1 Ea
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Sciencell/Recombinant Cys-Protein G/1002-02/1 Ea
品牌 / 
Sciencell
货号 / 
1002-02
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ProteinG,similartoProteinA,isanimmunoglobulin-bindingproteinexpressedingroupCandGStreptococcalbacteriabutwithdifferentspecificities.ItbindstotheconstantregionofmanyspeciesofimmunoglobulinGandcanbeusedtodetect,quantifyandpurifyIgGantibodiesandantibody/antigencomplexes.ThisrecombinantProteinGcontainsonlyIgGbindingdomains.Itlacksthealbumin-binding,cellwallandcellmembranebindingdomainstoensuremaximumspecificIgGbindingcapacity.RecombinantCys-ProteinGcontains196aminoacidresidues,correspondstoaminoacid190-384oftheStreptococcusspandaCysresidueatC-terminus.

Specifications:

CatalogNo.1002-02
CountryofManufacture
ProductCoderCysProteinG
Size/Quantity5mg
ProductUseThisproductisforresearchuseonly.Itisnotapprovedforuseinhumans,animals,orinvitrodiagnosticprocedures.
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ShippingInfoDryice
AASequenceMTYKLILNGKTLKGETTTEAVDAATAEKVFKQYANDNGVDGEWTYDDATKTFTVTEKPEVIDASELTPAVTTYKLVINGKTLKGETTTEAVDAATAEKVFKQYANDNGVDGEWTYDDATKTFTVTEKPEVIDASELTPAVTTYKLVINGKTLKGETTTKAVDAETAEKAFKQYANDNGVDGVWTYDDATKTFTVTEC
SourceEscherichiacoli
MolecularWeightPredicted22.5kDabutmigratesto32kDaonSDS-PAGE.
Purity>95%bySDS-PAGEanalyses.
PhysicalAppearanceWhitelyophilizedpowder.
FormulationLyophilizedwithnoadditives.
Endotoxin
ReconstitutionReconstituteinsteriledistilledwaterorsaline.
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一般认为,在几乎所有的后生动物(metazoans), 尤其是脊椎动物中,都普遍存在选择性剪接,这就为从单基因产生多种功能性多肤提供了一'条经济的途径。根据 EST(expressedsequencedtag,表达序列标签)序列定位和对合成的mRNA (resultant mRNA) 家族进行图谱分析的结果,估计约有 35% 的人类基因能产生多种不同的剪接产物。 查看更多>
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1) Remove 2 500 µl aliquots of supernatant into scintillation vials, add scintillation fluid and count.2) Aliquot 1.6 mls of the remaining supernatant in 查看更多>
BioLegend新产品—TNF家族新重组蛋白,&amp;nbsp;<br><br><br><br><br><br>&amp;nbsp;<br><br>&amp;nbsp;<br><br>&amp;nbsp; &amp;nbsp; &amp;nbsp;&amp;nbsp;TNF家族新重组蛋白<br><br>& 查看更多>
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Extraction:1) Following spin, save supernatant for analysis. Be extremely careful not to disturb the pellet since it is somewhat dispersed.2) Immediately upon 查看更多>
重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。目前,体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功... 查看更多>
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疫苗与重组蛋白有何本质区别和工艺区别
1.在悬浮培养液中培养Sf9细胞,并使之适应无血清培养液。

2.准备旋转培养瓶,用于按比例扩增Sf9细胞,将合适大小的两孔盖连接在转瓶的一个 侧臂,另用一平盖接在另一侧臂。将一段短管(约6英寸或15 cm)装在通气孔中,末端连接一滤器,借助张力器用管索将管子与通气孔和滤器固牢。

3.将一段长管(30~60 cm)连接至进气孔,并在末端连接一滤器,用管索加固,另一段管子连接于滤器的另一端,用管索固牢。管子末端用铝箔封好。

4.将与两孔装置相对的侧壁上的盖子旋转90度以松开,高压灭菌培养瓶1 h。

5.将适应了无血清培养液的细胞接种于经高压灭菌的培养瓶中。将培养瓶装至半
你可以咨询下武汉普健生物,已经在他那做了几个蛋白,优先提供的上清表达的蛋白,实验的活性比预期的还好些

大家好,想请教大家一个关于HPLC方法学的问题。

目前我们做的一个蛋白药,没有标准品,液相建立一个方法只想用于纯度鉴定,不去定量,这个方法所得到的图谱就一个主蛋白峰,面积归一化法相当于100%,现在就这个方法的方法学验证提出下面几点疑问:

1.因为我只做纯度鉴定,这个方法的方法学应该做系统适用性、专属性、检测限、耐用性和精密度这些,还是按照定量的全套加上定量限、线性、范围、准确度这些?

2.纯度鉴定中,我觉得应该对杂质进行定量,但是我们的这个方法只有一个主蛋白峰,几乎没有杂质峰,这样的话这个方法学我应该以什么为标准证明纯度呢?需将样品进行适当的氧化、酸、碱破坏吗?然后证明破坏后主峰能和产生的杂质分开?

3.对应生物蛋白药的杂质,应该属于无法获得的,如果通过强破坏,这个杂质也是不好鉴定的,是不是我只需要知道主峰能和强破坏的降解物分开,就可以说方法建立成功?还是生物药没有必要做这个强破坏,简单的走一下系统适用性、专属性、检测限、耐用性和精密度这样的流程就行?

说的有点乱,主要是自己对这个生物药的HPLC纯度鉴定的方法学,实在是疑惑重重,希望有经验的大侠能帮忙解答下。非常感谢!

6xHis标签可用一些酶,譬如TAGZyme去除
重组蛋白多肽的分离纯化问题不管是对生产还是研究工作都是关键性的问题,这里给大家一点总结性的文章,希望能够抛砖引玉,欢迎热烈的讨论:)

理论总结.rar(116.67k)
抗生素的发酵生产123
zcqh272021-08-01
1、2015版药典,”生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程“中指出,”用于生物制品细胞制备过程中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素。配制各种溶液的化学药品应符合《中国药典》(二部)或其他相关国家标准的要求。“
生物制品细胞制备过程中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素,明确表明不准使用青霉素。那么进行的重组蛋白类表达的微生物发酵,可以用青霉素吗?
2、2015版药典三部,各论中指出,”将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基(可含适量抗生素)中培养“,”发酵用培养基(采用适宜的不含抗生素的培养基)“。
这里说明种子培养基中可以使用抗生素,而且也没有限定究竟是哪种抗生素。
3、关于发酵中使用的抗生素,不知大家一般用哪家的,一些常用的,氨苄西林钠,硫酸卡那霉素,氯霉素等,都是用的什么级别,那个厂家的呢?我现在生工的,阿拉丁的,生兴生物的都用过。主要还是用的生工生物的,但是生工生物的抗生素都是进口分装的,不仅仅抗生素,国内很多进口分装的试剂,都无法提供相应的产品质量检测证书。而且因为是分装的,基本也就属于只有销售,所以,以后真的生产了,原材料来源的稳定性也无法保证。请问这个问题,大家是怎么解决的,一般用的哪家的呢。
可以跑SDS-PAGE电泳,不插梳子,每次一块板子点样200ul,跑完了切胶,攒几次之后,用灭菌的研钵研磨,边磨边加PBS,注意不要加多了,一定要研磨得很细,研磨之后用1ml的注射器过一边,不堵塞说明就可以打兔子了。每次打兔子的胶不超过1.5ml,首次蛋白的量要高一些,400-500ug,以后两次减半,一般三次就可以了。我们实验室有人做过。
或者可以过柱纯化,过柱纯化要加一半的佐剂,所以纯化后浓度要高于500ug/ml为宜,否则要增加免疫的次数。
包涵体的形成是一个由许多蛋白质参与的极端复杂的动力学过程,依赖于蛋白质的折叠速率和聚集速率,并且与蛋白质的合成和降解程度相关。强的表达系统,高的诱导剂浓度,相对较高的培养温度常常造成包涵体的形成。除了外界因素,包涵体的形成依赖于蛋白质特异的折叠行为,而不是蛋白的通常特性,如大小,融合标签,相对的疏水性。尽管如此,限制折叠速率的结构特性,如二硫键的形成常常是含有二硫键蛋白质正确折叠的限速步骤(并不绝对,因为有些蛋白质二硫键的破坏并不影响其功能),富含二硫键的蛋白质具有更为复杂的结构,当高水平表达时,由于大肠杆菌细胞质是一个偏还原性的环境,蛋白质容易形成错配的二硫键,这常常是包涵体形成的主要原因。膜蛋白具有暴露的疏水区,表达时易于聚集形成包涵体,也有可能由于降解或对细胞的毒性作用使得表达水平极低。蛋白质的糖基化可以影响到蛋白质的折叠行为和溶解性,当它们在原核系统进行表达时,也容易聚集。
防止包涵体常用的方法:使用中等强度或弱的启动子,低温培养,有限的诱导,优化培养基条件,进行融合表达,与伴侣分子和折叠酶共表达,表达定位于不同的空间,选择突变的菌株或其他的原核表达系统。
增加蛋白质折叠的添加剂:添加剂可能的作用机制甘油对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度L-精氨酸两亲分子/渗压剂甘氨酰甜菜碱/山梨糖醇 对蛋白质具有优先的水合作用阿拉伯聚糖 增加黏度木糖醇 增加黏度乙醇 调节极性DMSO 调节极性
两性离子表面活性剂(Zwitterionic detergents)保护非极性表面Triton X-100保护非极性表面硫代甜菜碱类物质(NDSBs)保护非极性表面蔗糖/海藻糖对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度N-氧化三甲胺(TMAO)对蛋白质具有优先的水合作用/渗压剂三氟乙醇(TFE)促进二级结构的形成低浓度盐酸胍使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性低浓度尿素使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性配体稳定天然结构状态聚乙二醇保护熔球体(molten globule)/增加黏度需要强调的是在培养细菌时,在培养基中加入5%的乙醇可以起到一定的防止包涵体产生的作用。
对比另外一篇文章:
减少包涵体形成的策略降低重组菌的生长温度,降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法,较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用,从而可减少包涵体的形成。2. 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂,培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应,在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输,其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇(诱导热休克蛋白的表达)、低分子量的巯基或二硫化合物(影响细胞周质的还原态,从而影响二硫键的形成)和NaCl。3. 供给丰富的培养基,创造最佳培养条件,如供氧、pH等。
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