GoldBio growth factors are manufactured for RESEARCH USE ONLY and cannot be sold for human consumption!
RecombinantMurine Sonic HedgeHog (SHH)rMuSHHHhg1Hxl3
Members of the Hedgehog (Hh) family are highly conserved proteins that are widely represented throughout the animal kingdom. The three known mammalian Hh proteins, Sonic (Shh), Desert (Dhh) and Indian (Ihh), are structurally related and share a high degree of amino acid sequence identity. Each Hh protein has a unique expression pattern and distinct biological role within its respective region of secretion. All Hh proteins use the same signaling pathway and can substitute for each other in experimental systems. Shh has been found to have a critical role in development, acting as a morphogen in the patterning of limbs, brain structure, facial structure, lungs, spinal cord, thalamus and the teeth. Shh has been shown to attract commissural axons in the developing spinal cord by attracting or repelling retinal ganglion cell (RGC) axons depending on concentration. Murine SHH is frequently coexpressed with BMP2, BMP4, and BMP6.
Sterile Filtered White lyophilized powder. Purified and tested for use in cell culture.
Source: Escherichia coli
MW: ~19.8 kDa (176amino acids)
Purity: >95% by SDS-PAGEand HPLC analyses
Biological Activity: Fully biologicallyactive when compared to standard. The ED50 as determined byinducing alkaline phosphatase production of murine C3H10T1/2 cells is 0.5-1.0 μg/ml.
Storage/Handling: Store desiccated at-20°C.
MGD: 98297
NOT FOR HUMAN USE!
Additional resources for this protein may be found at:OMIM
GoldBio活体成像技术:早在1999年由美国哈佛大学Weissleder博士率先提出了分子影像学(molecularimaging,MI)的概念,即应用影像学的方法对活体状态下的生物过程进行细胞和分子水平的定性和定量研究。活体成像便是基于分子影像学孕育而生的,通过这个成像系统,可以观测活体动物体内肿瘤的生长及转移,感染性疾病的发展进程,特定基因的表达等生物学过程。活体成像技术主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术。★生物发光是用荧光素酶基因标记细胞或DNA。★荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP,Cyt及dyes等)进行标记。★这一技术对肿瘤微小转移灶的检测灵敏度极高,不涉及放射性物质和方法,非常安全。操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高。
活体成像两种检测技术介绍活体成像特点优点缺点生物发光检测bioluminescence★荧光素酶(Luciferase)对基因、细胞和活体动物进行标记;★荧光素酶催化底物(例如荧光素钾盐)反应后,会产生化学发光。这种光是由化学反应而来,不需要激发光;★标记方法是通过克隆技术,将荧光素酶的基因插入到预期观察的细胞染色体内,通过对克隆细胞进行筛选,培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株。再将细胞株转移至特定的小鼠体内形成模型。★特异性强,无自发荧光;★高灵敏度,在体内可检测到几百个细胞,检测的深度在3-100px;★定量精确 ★信号较弱,检测时间较长;★仪器精密度要求较高;★细胞或基因需要转基因标记;★不可用于人体,不适用于抗体、多肽等标记荧光检测fluorescence★采用荧光报告基因(GFP、RFP等)或荧光染料进行标记;★需要外接激发光源,利用报告基因、荧光蛋白质或染料产生的荧光,就可以形成体内的生物光源。★荧光染料、蛋白标记能力强;★信号强,成像速度快,操作简便,实验成本较低;★未来可用于人;★适用范围广,可以是动物、细胞、微生物,也可以是抗体、药物、纳米材料等。★存在自发荧光,影响灵敏度;★光容易被动物组织吸收;★检测深度受限;★背景光干扰,定量准确度低
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防止包涵体常用的方法:使用中等强度或弱的启动子,低温培养,有限的诱导,优化培养基条件,进行融合表达,与伴侣分子和折叠酶共表达,表达定位于不同的空间,选择突变的菌株或其他的原核表达系统。
增加蛋白质折叠的添加剂:添加剂可能的作用机制甘油对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度L-精氨酸两亲分子/渗压剂甘氨酰甜菜碱/山梨糖醇 对蛋白质具有优先的水合作用阿拉伯聚糖 增加黏度木糖醇 增加黏度乙醇 调节极性DMSO 调节极性
两性离子表面活性剂(Zwitterionic detergents)保护非极性表面Triton X-100保护非极性表面硫代甜菜碱类物质(NDSBs)保护非极性表面蔗糖/海藻糖对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度N-氧化三甲胺(TMAO)对蛋白质具有优先的水合作用/渗压剂三氟乙醇(TFE)促进二级结构的形成低浓度盐酸胍使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性低浓度尿素使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性配体稳定天然结构状态聚乙二醇保护熔球体(molten globule)/增加黏度需要强调的是在培养细菌时,在培养基中加入5%的乙醇可以起到一定的防止包涵体产生的作用。
对比另外一篇文章:
减少包涵体形成的策略降低重组菌的生长温度,降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法,较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用,从而可减少包涵体的形成。2. 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂,培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应,在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输,其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇(诱导热休克蛋白的表达)、低分子量的巯基或二硫化合物(影响细胞周质的还原态,从而影响二硫键的形成)和NaCl。3. 供给丰富的培养基,创造最佳培养条件,如供氧、pH等。
生物制品细胞制备过程中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素,明确表明不准使用青霉素。那么进行的重组蛋白类表达的微生物发酵,可以用青霉素吗?
2、2015版药典三部,各论中指出,”将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基(可含适量抗生素)中培养“,”发酵用培养基(采用适宜的不含抗生素的培养基)“。
这里说明种子培养基中可以使用抗生素,而且也没有限定究竟是哪种抗生素。
3、关于发酵中使用的抗生素,不知大家一般用哪家的,一些常用的,氨苄西林钠,硫酸卡那霉素,氯霉素等,都是用的什么级别,那个厂家的呢?我现在生工的,阿拉丁的,生兴生物的都用过。主要还是用的生工生物的,但是生工生物的抗生素都是进口分装的,不仅仅抗生素,国内很多进口分装的试剂,都无法提供相应的产品质量检测证书。而且因为是分装的,基本也就属于只有销售,所以,以后真的生产了,原材料来源的稳定性也无法保证。请问这个问题,大家是怎么解决的,一般用的哪家的呢。
基因重组只是控制同一性状表达不同而已,但是它不会改变性状的基本情况。如:控制眼睛颜色的基因,亲本的基因重组之后可能亲本为黑色,子代便为蓝色。但绝对不会控制眼睛颜色的基因在重组之后就变成控制耳朵的基因。
国内或者国外进口皆可!?看来你不缺钱啊!
这个问题问的过于笼统!
首先,蛋白表达与纯化包括很多种类型,比如原核蛋白表达,哺乳动物蛋白表达,酵母蛋白表达以及昆虫蛋白表达等等,而现在生物实验中常说的蛋白表达纯化通常是指利用大肠杆菌表达系统的原核蛋白表达,这种表达方式比较简单,普遍都可以做。但是如果是指很多种蛋白表达系统的话,可以做的单位就比较少了。
另外,蛋白的表达成功与否还需要取决于蛋白的性质,所以前期一定要问清楚!
各位业内前辈,我们正在考虑引进符合GMP认证标准的CHO细胞系,用于表达可做疫苗生产的重组蛋白类。目前已有符合标准信息的是Thermofisher的CHO-S悬浮培养细胞资料,希望能再多了解一些和这株细胞类似的其他公司符合GMP标准的生产株细胞做个比较。谢谢指教!
植物:抗虫、抗病、抗除草剂植物培育、改良作物品质(富含赖氨酸的玉米)
动物:提高生长速度、生产药物蛋白、器官移植、乳腺生物反应器
微生物:疫苗
基因治疗等等
大家好,想请教大家一个关于HPLC方法学的问题。
目前我们做的一个蛋白药,没有标准品,液相建立一个方法只想用于纯度鉴定,不去定量,这个方法所得到的图谱就一个主蛋白峰,面积归一化法相当于100%,现在就这个方法的方法学验证提出下面几点疑问:
1.因为我只做纯度鉴定,这个方法的方法学应该做系统适用性、专属性、检测限、耐用性和精密度这些,还是按照定量的全套加上定量限、线性、范围、准确度这些?
2.纯度鉴定中,我觉得应该对杂质进行定量,但是我们的这个方法只有一个主蛋白峰,几乎没有杂质峰,这样的话这个方法学我应该以什么为标准证明纯度呢?需将样品进行适当的氧化、酸、碱破坏吗?然后证明破坏后主峰能和产生的杂质分开?
3.对应生物蛋白药的杂质,应该属于无法获得的,如果通过强破坏,这个杂质也是不好鉴定的,是不是我只需要知道主峰能和强破坏的降解物分开,就可以说方法建立成功?还是生物药没有必要做这个强破坏,简单的走一下系统适用性、专属性、检测限、耐用性和精密度这样的流程就行?
说的有点乱,主要是自己对这个生物药的HPLC纯度鉴定的方法学,实在是疑惑重重,希望有经验的大侠能帮忙解答下。非常感谢!
生物合成人胰岛素注射液,比如诺和灵R笔芯。是单一品种、不是混合的胰岛素。是不含鱼精蛋白的短效胰岛素。