Pervanadate is a protein tyrosine phosphatase inhibitor that is commonly used to increase tyrosine phosphorylation in cells. When cells are treated with pervanadate for 30 minutes they undergo significant tyrosine phosphorylation, as shown by western blotting using anti-Phosphotyrosine.
Confluent cultures of A431 cells were serum starved overnight. Cells were then either left untreated (Cat.# AL9401) or treated with pervanadate (1 mM) for 30 minutes at 37°C (cat.# AL9501). Cells were lysed in 1% SDS, 1.0 mM sodium ortho-vanadate, 10 mM Tris (pH 7.4) buffer. Protein concentration was determined using the BCA method (Pierce) before diluting to final concentration and buffer.

Western blot analysis of A431, HeLa, and Jurkat cells (20 µg/lane) untreated or treated with pervanadate (1 mM) for 30 min. Blots were probed with anti-Phosphotyrosine rabbit polyclonal.
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*All molecular weights (MW) are confirmed by comparison to Bio-Rad Rainbow Markers and to western blotmobilities of known proteins with similar MW.
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KIT SUMMARY
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开个贴,做好准备,已经有战友开始采用CTD格式写申报资料,大家多交流。
而没答案
帮帮我
给我提供答案
考研细胞的题答案
防止包涵体常用的方法:使用中等强度或弱的启动子,低温培养,有限的诱导,优化培养基条件,进行融合表达,与伴侣分子和折叠酶共表达,表达定位于不同的空间,选择突变的菌株或其他的原核表达系统。
增加蛋白质折叠的添加剂:添加剂可能的作用机制甘油对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度L-精氨酸两亲分子/渗压剂甘氨酰甜菜碱/山梨糖醇 对蛋白质具有优先的水合作用阿拉伯聚糖 增加黏度木糖醇 增加黏度乙醇 调节极性DMSO 调节极性
两性离子表面活性剂(Zwitterionic detergents)保护非极性表面Triton X-100保护非极性表面硫代甜菜碱类物质(NDSBs)保护非极性表面蔗糖/海藻糖对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度N-氧化三甲胺(TMAO)对蛋白质具有优先的水合作用/渗压剂三氟乙醇(TFE)促进二级结构的形成低浓度盐酸胍使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性低浓度尿素使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性配体稳定天然结构状态聚乙二醇保护熔球体(molten globule)/增加黏度需要强调的是在培养细菌时,在培养基中加入5%的乙醇可以起到一定的防止包涵体产生的作用。
对比另外一篇文章:
减少包涵体形成的策略降低重组菌的生长温度,降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法,较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用,从而可减少包涵体的形成。2. 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂,培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应,在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输,其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇(诱导热休克蛋白的表达)、低分子量的巯基或二硫化合物(影响细胞周质的还原态,从而影响二硫键的形成)和NaCl。3. 供给丰富的培养基,创造最佳培养条件,如供氧、pH等。
你可以试着读一下看看。
基因重组只是控制同一性状表达不同而已,但是它不会改变性状的基本情况。如:控制眼睛颜色的基因,亲本的基因重组之后可能亲本为黑色,子代便为蓝色。但绝对不会控制眼睛颜色的基因在重组之后就变成控制耳朵的基因。
▷ 重组蛋白生产平台
▪ HEK293细胞瞬转
▪ CHO细胞
▪ 昆虫细胞/杆状病毒
▪ 酵母细胞
▪ 大肠杆菌发酵
事实上,现在多数药用级别白蛋白都是用血清生产的.
白蛋白的销售方向若是面向实验室,可采用重组质粒转到微生物发酵的方法生产,对土地面积的要求小,更集约,成本效率更高.
提供亲和纯化相关资料:http://wenku.baidu.com/view/ef8f3831f8c75fbfc67db276
如有帮助,请采纳,谢谢~

