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abfrontier/MightyAmp DNA Polymerase Ver.2/MightyAmp DNA Polymerase Ver.2, 250U/R071B
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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
|---|
제품특징
□ 제품설명
MightyAmp DNA Polymerase는 특히 2 kb정도까지의 짧은 단편을 증폭하는데 있어서 높은 반응성을 가지는 신규 DNA Polymerase이다. 본 효소의 강력한 증폭 능력에 의해 일반적인 PCR 효소에서 증폭이 곤란한 PCR 저해 물질을 많이 포함하는 crude 생체 추출액으로부터 PCR 증폭이 가능하다. MightyAmp DNA Polymerase Ver. 2 에서는 기존의 MightyAmp DNA Polymerase에 개량된 buffer를 조합하여 혈액, 동식물 조직 등의 생체 시료를 직접 반응액에 첨가하는 「Direct PCR」이 가능하게 되었다. 기존의 MightyAmp DNA Polymerase와 같이 PCR저해 물질을 많이 포함한 crude 생체 추출액으로부터 PCR 증폭뿐만 아니라 GC rich, AT rich 서열에 관계없이, 광범위한 타겟의 증폭이 가능하게 되었다. 소량의 주형으로부터의 증폭에서도 양호한 반응성을 나타낸다. 또한 98 ℃까지 polymerase 활성을 억제하는 강력한 monoclonal 항체를 이용하여 hot start PCR이 가능하다.
□ 내용 (200 회*1)
| MightyAmp® DNA Polymerase Ver.2 | 200 ㎕ | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 2× MightyAmp Buffer Ver. 2 (Mg2+, dNTP plus)*2 | 1 ㎖ x 5 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
*1 50㎕ PCR 반응시 용량 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
*2 4mM Mg2+, 800 μM dNTP 포함 □보존 -20℃□일반적인 PCR 반응액 조성 (total 50 ㎕)
*1 아래 표를 참조
*1 EDTA 또는 heparin을 처리한 혈액을 사용한다.Citric acid (구연산)을 처리한 혈액을 이용하면 반응성이 현저하게 저하되므로, Direct PCR에서는 추천하지 않는다. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
□ Primer 설계
primer는 가능한 primer 설계 소프트웨어를 이용하여 최적인 배열을 선택하고, Tm값*이 60℃ 이상이 되도록 설계하는 것을 추천한다. *Tm값 (℃)=[(nA+nT)×2]+ [(nC+nG)×4]-5MightyAmp DNA Polymerase의 경우 이노신 (inosinic acid)을 포함하는primer의 사용은 피한다.
□ PCR 증폭조건
Extension 온도 68℃에 3 step PCR이 표준조건이고, 증폭길이가 2 kb이상이거나 GC rich 서열을 증폭하는 경우는 2 step PCR을 권장한다.
[3 Step PCR]
| 98 ℃ | 2 min. * 1 | |
| ↓ | ||
| 98 ℃ | 10 sec. | ┐ |
| 60 ℃ | 15 sec. | │ 30~40 cycles |
| 68 ℃* 2 | 1 min. / kb | ┘ |
[2 Step PCR]
| 98 ℃ | 2 min. * 1 | |
| ↓ | ||
| 98 ℃ | 10 sec. | ］30~40 cycles |
| 68 ℃ | 1 min. / kb |
*1 강력한 Hot start Antibody를 포함하므로, 98℃, 2분의 pre-denaturation과정이 필수임.*2 3 step PCR의 경우도 extension온도는 68℃로 설정해 주십시오.
□ PCR산물
MightyAmp DNA Polymerase를 이용해서 증폭한 PCR산물의 대부분은 3’ 말단에 A가 1염기 부가되어 있다.
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运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2021-06-03
蛋白G是从G类Streptococci细菌中分离出来的胞壁蛋白，与多数哺乳动物的IgG Fc段结合（包括：人、山羊、绵羊、兔、豚鼠、马、猪、猴、小鼠等）。不与狗IgG结合、不结合人IgM、IgD、和IgA。重组蛋白G（Recomb Protein G）已经除去了与白蛋白及细胞表面结合位点，减少了交叉反应和非特异性结合。因此，它比天然蛋白G和蛋白A有更大的亲和力。可以代替二抗，广泛应用于免疫化学等领域。在亲和力、稳定性等方面好。蛋白A是从... 查看更多
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2021-07-27
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2021-09-16
上海钰博生物科技有限公司在发布的TGF-β1 重组蛋白供应信息，浏览与TGF-β1 重组蛋白相关的产品或在搜索更多与TGF-β1 重组蛋白相关的内容。 查看更多
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2021-07-29
超亲和性的新型亲和标签系统“PA Tag System”关键词： 蛋白质 标签系统 亲和性2015-05-20 16:20 来源：宝柏 点击次数：607大阪大学蛋白质研究所藤井勇树、高木淳一东北大学大学院医学系研究科金子美华、加藤幸成 前言在分析蛋白质的功能时最重要的是如何得到高纯度的蛋白。现今提纯蛋白最常用的方法是亲和标签系统。被统称为「EpitopeTag」的肽标签以及其单克隆抗体组成的系统有FLAG、HA、Myc等多种标签。但是，... 查看更多
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2017-01-31
上海信裕生物科技有限公司在发布的异连蛋白结合蛋白1(DTNBP1)重组蛋白 供应信息，浏览与异连蛋白结合蛋白1(DTNBP1)重组蛋白 相关的产品或在搜索更多与异连蛋白结合蛋白1(DTNBP1)重组蛋白 相关的内容。 查看更多
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BioLegend新产品—TNF家族新重组蛋白，&nbsp;<br><br><br><br><br><br>&nbsp;<br><br>&nbsp;<br><br>&nbsp; &nbsp; &nbsp;&nbsp;TNF家族新重组蛋白<br><br>& 查看更多
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2021-07-24
Featured Recombinant Proteins On Sale For August Featured Recombinant Proteins On Sale For August: Buy Any Two Featured Recombinant Proteins, Save 20% Off, The Third 30% Off.These recombinant proteins have highly aggr... 查看更多
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2021-08-22
提供商：福因德科技（武汉）有限公司 查看更多
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2016-11-21
重组蛋白A预装柱/填料（技术指标：每毫升rProtein G结合30-55mg人血清IgG，22-45mg兔IgG /ml填料，4-12mg鼠血清IgG/ml填料，4-13是由广州洁特生物过滤股份有限公司代理或销售的JET BIOFIL品牌的试剂，产品来源于中国。广州洁特生物过滤股份有限公司是中国最权威的重组蛋白A预装柱/填料（技术指标：每毫升rProtein G结合30-55mg人血清IgG，22-45mg兔IgG /ml填料，4-12mg鼠血清IgG/ml填料，4-13试剂销售服务商之一，在广州等地方 查看更多
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2021-08-20
上海钰博生物科技有限公司在发布的轻肽铁蛋白(FTL)重组蛋白供应信息，浏览与轻肽铁蛋白(FTL)重组蛋白相关的产品或在搜索更多与轻肽铁蛋白(FTL)重组蛋白相关的内容。 查看更多
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2017-01-31
上海钰博生物科技有限公司在发布的解整合素金属蛋白酶33(ADAM33)重组蛋白供应信息，浏览与解整合素金属蛋白酶33(ADAM33)重组蛋白相关的产品或在搜索更多与解整合素金属蛋白酶33(ADAM33)重组蛋白相关的内容。 查看更多
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包涵体是外源基因在原核细胞中表达时，尤其在大肠杆菌中高效表达时，形成的由膜包裹的高密度、不溶性蛋白质颗粒，在显微镜下观察时为高折射区，与胞质中其他成分有明显区别。包涵体形成是比较复杂的，与胞质内蛋白质生成速率有关，新生成的多肽浓度较高，无充足的时间进行折叠，从而形成... 查看更多
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如何优化组氨酸标签蛋白纯化123
m_kawayi2021-08-11
6xHis标签可用一些酶，譬如TAGZyme去除
抗生素的发酵生产123
zcqh272021-08-01
1、2015版药典，”生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程“中指出，”用于生物制品细胞制备过程中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素。配制各种溶液的化学药品应符合《中国药典》（二部）或其他相关国家标准的要求。“
生物制品细胞制备过程中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素，明确表明不准使用青霉素。那么进行的重组蛋白类表达的微生物发酵，可以用青霉素吗？
2、2015版药典三部，各论中指出，”将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基(可含适量抗生素）中培养“，”发酵用培养基（采用适宜的不含抗生素的培养基）“。
这里说明种子培养基中可以使用抗生素，而且也没有限定究竟是哪种抗生素。
3、关于发酵中使用的抗生素，不知大家一般用哪家的，一些常用的，氨苄西林钠，硫酸卡那霉素，氯霉素等，都是用的什么级别，那个厂家的呢？我现在生工的，阿拉丁的，生兴生物的都用过。主要还是用的生工生物的，但是生工生物的抗生素都是进口分装的，不仅仅抗生素，国内很多进口分装的试剂，都无法提供相应的产品质量检测证书。而且因为是分装的，基本也就属于只有销售，所以，以后真的生产了，原材料来源的稳定性也无法保证。请问这个问题，大家是怎么解决的，一般用的哪家的呢。
生物制品细胞制备过程中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素，明确表明不准使用青霉素。那么进行的重组蛋白类表达的微生物发酵，可以用青霉素吗？
2、2015版药典三部，各论中指出，”将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基(可含适量抗生素）中培养“，”发酵用培养基（采用适宜的不含抗生素的培养基）“。
这里说明种子培养基中可以使用抗生素，而且也没有限定究竟是哪种抗生素。
3、关于发酵中使用的抗生素，不知大家一般用哪家的，一些常用的，氨苄西林钠，硫酸卡那霉素，氯霉素等，都是用的什么级别，那个厂家的呢？我现在生工的，阿拉丁的，生兴生物的都用过。主要还是用的生工生物的，但是生工生物的抗生素都是进口分装的，不仅仅抗生素，国内很多进口分装的试剂，都无法提供相应的产品质量检测证书。而且因为是分装的，基本也就属于只有销售，所以，以后真的生产了，原材料来源的稳定性也无法保证。请问这个问题，大家是怎么解决的，一般用的哪家的呢。
细胞因子重组蛋白品牌：进口123
kellychen0082021-07-31
江苏省南通市、泰州市20192020学年高三第一次调研测试生物试题(...123
凹凸曼慢1522021-07-24
重组蛋白的话，一般在蛋白冻干或最终制得之前，都会进行纯化，一般的生物公司可以纯化纯度到达90%，就是不会有其他的杂蛋白存在。做抗体或者抗原等都不会对免疫有影响的，如有你的里面其他杂蛋白多的话，建议先做蛋白纯化（亲和纯化，分子筛都可，一般的亲和纯化，带有his标签或者GST标签都可到达最少85%以上的纯度）
提供亲和纯化相关资料：http://wenku.baidu.com/view/ef8f3831f8c75fbfc67db276
如有帮助，请采纳，谢谢~
提供亲和纯化相关资料：http://wenku.baidu.com/view/ef8f3831f8c75fbfc67db276
如有帮助，请采纳，谢谢~
科学家发现低温等离子体杀菌更强 或可代替抗生素_中国发展门户网国家...123
火皇煌2021-08-09
期刊网上有的。建议你自己去搜集资料
上海哪家公司可以做重组蛋白表达?123
2018-02-27
美迪西
Flag标签抗体抗Flag抗体小包装试用标签抗体铭研生物123
lc城市拾荒者2021-07-27
精蛋白生物合成人胰岛素注射液(预混30R)即是30%的R（重组人胰岛素）和70%的N（精蛋白重组人胰岛素）的混合制剂。R是速效产品，N是缓释效用。
生物合成人胰岛素注射液，比如诺和灵R笔芯。是单一品种、不是混合的胰岛素。是不含鱼精蛋白的短效胰岛素。
生物合成人胰岛素注射液，比如诺和灵R笔芯。是单一品种、不是混合的胰岛素。是不含鱼精蛋白的短效胰岛素。
生物学凝胶作用和用途123
温存迷醉丶覫2018-03-23
生物分子下游纯化的对象一般包括蛋白、酶、重组蛋白、单抗、抗体及抗原、肽类、病毒、核酸等。纯化前首先需要测定生物分子的各物理和化学特性，然后通过实验选择出最有效的纯化流程。
1.测定——分子量、PI
当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中，可简易地测出PI，并选择纯化用缓冲液的最佳PH。
2.选择——层析方法
若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解，可尝试几种不同的纯化方法：
一 使用最通用的凝胶过滤方法，选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份。
二 用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质，再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。
三 体积大的样品，往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品，可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理，洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。
3.纯化——大量粗品
处理大量原液时，为避免堵塞柱子，一般使用sepharose big beads、sepharoseXL、sepharose fast flow等大颗粒离子交换介质。扩张柱床吸附技术利用多种STREAMLINE介质，直接从含破碎细胞或组织萃取物的发酵液中俘获蛋白。将离心、超滤、初纯化结合为一。提高回收率，缩短纯化周期。
4.纯化——硫酸氨样品
硫酸氨沉淀方法常被用来初步净化样品，经处理过的样本处于高盐状态下，很适合直接上疏水层析。若作离子交换，需先用Sephadex G-25脱盐。疏水层析是较新技术，随着介质种类不断增多，渐被融入各生产工艺中。利用Hitrap HIC Test Kit 和RESOURCE HIC Test Kit可在八种疏水介质中选择最适合介质及最佳的纯化条件。低盐洗脱的样品可稍加稀释或直接上其它吸附性层析。
5.纯化——糖类分子
固化外源凝订素如刀豆球蛋白、花生、大麦等凝集素，可结合碳水化合物的糖类残基，很适合用作分离糖化细胞膜组份、细胞、甚至亚细胞细胞器，纯化糖蛋白等。两种附上外源凝集素的Sepharose 6MB亲和层析介质，专为俘获整个细胞或大复合物，如膜囊等。
6.纯化——膜蛋白
膜蛋白分离常使用去污剂以保持其活性。离子性去污剂应选用与目标蛋白相反电荷者，避免在作离子交换时和目标蛋白竞争交换介质，藉此除去去污剂。非离子性去污剂可以疏水层析除去。
7.纯化——单抗、抗原
单抗多为IgG.来源主要是腹水和融合瘤培养上清液。在培养前除去IgG.重组蛋白A介质Mabselect和rProtein A Sepharose FF对IgG有更高的载量和专一性，基团脱落更少。脱落的rProtein A用离子交换Q Sepharose HP或凝胶过滤Superdex 200，很容易去除。
疏水层析Phenyl Sepharose HP亦很适合纯化IgG.宿主抗体和污染IgG可用凝胶过滤Superdex 200在精细纯化中去除。
纯化IgG抗原最有效的方法是用活化偶联介质如CNBr、NHs activated Sepharose FF偶联IgG，再进一步获取IgG抗原。
HiTrap IgM是用来纯化融合瘤细胞培养的单抗IgM，结合量达5mg IgM.HiTrap IgY是专门用来纯化IgY，结合量达100mg纯IgY.
8.纯化——重组蛋白
重组蛋白在设计、构建时应已融入纯化构想。样品多夹杂了破碎细胞或溶解产物，扩张柱床吸附技术STREAMLINE便很适合做粗分离。Amersham biosciences提供三个快速表达、一步纯化的融合系统。
一 GST融合载体使要表达的蛋白和谷胱甘肽S转移酶一起表达，然后利用Glutathione Sepharose 4B作亲和层析纯化，再利用凝血酶或因子Xa切开。
2. 蛋白A融合载体使要表达的蛋白和蛋白A的IgG结合部位融合在一起表达，以IgG Sepharose 6 FF纯化。
二 含组氨酸标记（Histidine-tagged）的融合蛋白可用Chelating Sepharose FF螯合Ni2+金属，在一般或变性条件（8M尿素）下透过组氨酸螯合融合蛋白。HisTrap试剂盒提供整套His-Tag蛋白的纯化方法。
9.纯化——包涵体蛋白
包涵体蛋白往往需溶于6M盐酸胍或8M尿素中。一般包涵体蛋白样品的纯度越高，复性效果越好。SOURCE 30 RPC反相层析介质很适合纯化复性前的粗品，并可以1MnaOH重生。此方法纯化后的包涵体蛋白，复性回收率明显提高。
10.包涵体蛋白固相复性
许多文献报导将包涵体蛋白在变性条件下固定（吸附）在层析介质上，一般用各种Sepharose FF离子交换层析介质。而且无需大量稀释样品，并将复性和初纯化合二为一，大大节省时间及提高回收率。
固相复性方法也被用于以HiTrap Chelating金属螯合层析直接复性及纯化包涵体形式表达的组氨酸融合蛋白；以HiTrap Heparin肝素亲和层析直接复性及纯化包涵体形式表达的含多个赖氨酸的融合蛋白。两种亲和层析预装柱均可反复多次重复使用，比一般试剂盒更方便、耐用。
11.纯化——中草药有效成分
中药的化学成分极其复杂。例：如用甲醇分离黄酮甙，三糖甙先被洗下来，二糖甙其次，单糖甙随后，最后是甙元。Sephadex LH-20可使用水、醇、丙酮、氯仿等各种试剂，广泛用于各种天然产物的分离，包括生物碱、甙、黄酮、醌类、内脂、萜类、甾类等。
生物碱在酸性缓冲液中带正电，成为盐，HiTrap SP阳离子交换层析柱可以分离许多结构非常近似的生物碱。相反，黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸等可溶于偏碱的缓冲液中，在HiTrap Q阴离子交换柱上分离效果良好。
一般多糖纯化大多使用分子筛如Sephadex，Sephacryl.若分子量在600KD以下，并需更高分辨率，可选择新一代的Superdex.一般植物可能含水溶性、酸溶性、碱溶性多种多糖。SOURCE5、15、30RPC反相层析也很适合各种中药有效成分的检测、分离和放大制备。由于中药的成分非常复杂，SOURCE反相层析可用范围为PH1-14 ，并可用1M NaOH，1M HCL清洗、再生。比传统硅胶反相层析更易于工艺优化及在位清洗，寿命也更长。
12.纯化——肽类
肽类的来源有天然萃取，合成肽和重组肽三种。肽容易被酶降解，但可从有机溶剂或促溶剂中复性，所以多以高选择性的反相层析如SOURCE 30RPC、SOURCE 15RPC、SOURCE 5RPC或离子交换Minibeads、Monobeads作纯化。Superdex Peptide HR是专为肽分子纯化设计的凝胶过滤预装柱，能配合反相层析做出更精美的肽图。肽分子制备可用离子交换配合凝胶过滤Superdex 30 PG。医学都市多功能
13.纯化——核酸、病毒
核酸的纯化用于去除影响测序或PCR污染物等研究。核酸可大致上分为质粒DNA、噬菌体DNA和PCR产物等。病毒也可视作核酸大分子，和质粒DNA一样，可用分离大分子的Sephacry S-1000 SF、Superose或Sepharoce 4FF凝胶过滤介质去除杂蛋白，再配合离子交换如Mono Q、 SOURCE Q分离核酸。
14.纯化——寡核苷酸寡酸苷酸
多应用在反义（anti-sense）DNA、RNA测序、PCR和cDNA合成等研究。合成后含三苯甲基的寡核苷酸以阴离子交换的Mono Q或快速低反压的SOURCE Q在PH12下可除副产物，并避免凝集和保护基的脱落。载量大大高过反相层析，可用做大量制备。不含三苯甲基的失败序列可用反相柱ProRPC去除。
15.脱盐、小分子去除
使用凝胶过滤介质Sephadex G10，G15，G25，G50等去除小分子，效率高，处理量可达床体积30%.只需在进样后收集首1/3-1/2柱体积的洗脱液，HiPrep Desalting（26ml）可在数分钟为多至10ml样品脱盐。
16.疫苗纯化
使用凝胶过滤介质Sepharose 4FF纯化疫苗，去除培养基中的杂蛋白，处理量可大于床体积10%.柱高一般40-70cm，整个过程约半至一小时。使用此法生产的疫苗品种有乙肝、狂犬、出血热、流感、肺结核、小儿麻痹疫苗等。分子量较小的疫苗可使用Sephacryl S-500HR，如甲肝疫苗等。
17.抗生素聚合物分析
中国药典从2000年版起要求抗生素头孢曲松钠需要找出聚合物占产品的白分比，规定使用Sephadex G10凝胶过滤法测定。
18.纯化-基因治疗用病毒载体
SORRCE 15Q
19.纯化-基因治疗用质粒
Q Sepharose XL，SOURCE 15Q，STREAMLINE Q，Sephacryl S500，Plasmidselect 在下游纯化中，可应用不同层析技术在纯化生物分子的同时，去除各种污染物。 1.去除——内毒素
内毒素又称热原。含脂肪A、糖类和蛋白，是带负电的复合大分子。
内毒素的脂肪A部份有很强的疏水性。但在高盐下会凝集，无法上疏水层析。利用疏水层析试验盒（17-1349-01）可选择结合目标蛋白的介质而去除内毒素。
内毒素与阴离子交换介质Q或DEAE Sepharose Fast Flow有较强结合。可在洗脱目标蛋白后用高盐缓冲液或NaOH去除。
利用CNBr或NHS Sepharose FF可偶联内毒素底物如LAL，PMB，自动成亲合层析介质结合内毒素。内毒素经常是多聚体，凝胶过滤层析可有效地将之去除。
2.去除——蛋白中的核酸
大量核酸增加样本黏度，令区带扩张，反压增加，降低分辨率和流速。药审和食检对核酸含量也有严格限制。
胞内表达蛋白的核酸问题尤其严重。核酸带阴电荷，在初步纯化时利用阳离子交换介质如STREAMLINESP，SP Sepharose Big Beads，SP或CM Sepharose FF，SP SepharoseXL结合目标蛋白，可除去大量核酸。
核酸在高盐下会和蛋白解离，疏水层析介质很适合用来结合目标蛋白，在纯化蛋白的同时去除核酸。
利用核酸酶将核酸切成小片断，用凝胶过滤做精细纯化时便很容易去除了。
3.去除——病毒和微生物
病毒和微生物可成为病原，应尽量减除。结合不同层析技术，使用注射用水，用NaOH定期进行仪器和凝胶的在位消毒和在位清洗，皆可避免污染物增加。
病毒大都有脂外壳。可用与目标蛋白电荷相反的S/D（solvent/detergent）处理，使病毒失活，如Triton和Tween.再用适当的离子交换介质如CM Sepharose FF结合目标蛋白，去除S/D.
其它污染物可以改变pH和离子强度使其从目标分子中解离或失活，凝胶过滤介质Superdex及多种吸附性介质，SOURCE都是很好的精细纯化介质，可去除多种微量污染物。 凝胶是指颗粒大小在1埃到10埃之间的混合物。高分子溶液和某些溶胶，在适当的条件下，整个体系会转变成一种弹性的半固体状态的稠厚物质，失去流动性。这种现象称为胶凝作用,所形成的产物叫做凝胶或冻胶.
“气凝胶”是指分散系为气态的，如：云，雾等，“固凝胶”有烟水晶等，“液凝胶”就是呈液态的胶体，如氢氧化铁胶体 。向左转|向右转
1.测定——分子量、PI
当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中，可简易地测出PI，并选择纯化用缓冲液的最佳PH。
2.选择——层析方法
若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解，可尝试几种不同的纯化方法：
一 使用最通用的凝胶过滤方法，选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份。
二 用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质，再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。
三 体积大的样品，往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品，可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理，洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。
3.纯化——大量粗品
处理大量原液时，为避免堵塞柱子，一般使用sepharose big beads、sepharoseXL、sepharose fast flow等大颗粒离子交换介质。扩张柱床吸附技术利用多种STREAMLINE介质，直接从含破碎细胞或组织萃取物的发酵液中俘获蛋白。将离心、超滤、初纯化结合为一。提高回收率，缩短纯化周期。
4.纯化——硫酸氨样品
硫酸氨沉淀方法常被用来初步净化样品，经处理过的样本处于高盐状态下，很适合直接上疏水层析。若作离子交换，需先用Sephadex G-25脱盐。疏水层析是较新技术，随着介质种类不断增多，渐被融入各生产工艺中。利用Hitrap HIC Test Kit 和RESOURCE HIC Test Kit可在八种疏水介质中选择最适合介质及最佳的纯化条件。低盐洗脱的样品可稍加稀释或直接上其它吸附性层析。
5.纯化——糖类分子
固化外源凝订素如刀豆球蛋白、花生、大麦等凝集素，可结合碳水化合物的糖类残基，很适合用作分离糖化细胞膜组份、细胞、甚至亚细胞细胞器，纯化糖蛋白等。两种附上外源凝集素的Sepharose 6MB亲和层析介质，专为俘获整个细胞或大复合物，如膜囊等。
6.纯化——膜蛋白
膜蛋白分离常使用去污剂以保持其活性。离子性去污剂应选用与目标蛋白相反电荷者，避免在作离子交换时和目标蛋白竞争交换介质，藉此除去去污剂。非离子性去污剂可以疏水层析除去。
7.纯化——单抗、抗原
单抗多为IgG.来源主要是腹水和融合瘤培养上清液。在培养前除去IgG.重组蛋白A介质Mabselect和rProtein A Sepharose FF对IgG有更高的载量和专一性，基团脱落更少。脱落的rProtein A用离子交换Q Sepharose HP或凝胶过滤Superdex 200，很容易去除。
疏水层析Phenyl Sepharose HP亦很适合纯化IgG.宿主抗体和污染IgG可用凝胶过滤Superdex 200在精细纯化中去除。
纯化IgG抗原最有效的方法是用活化偶联介质如CNBr、NHs activated Sepharose FF偶联IgG，再进一步获取IgG抗原。
HiTrap IgM是用来纯化融合瘤细胞培养的单抗IgM，结合量达5mg IgM.HiTrap IgY是专门用来纯化IgY，结合量达100mg纯IgY.
8.纯化——重组蛋白
重组蛋白在设计、构建时应已融入纯化构想。样品多夹杂了破碎细胞或溶解产物，扩张柱床吸附技术STREAMLINE便很适合做粗分离。Amersham biosciences提供三个快速表达、一步纯化的融合系统。
一 GST融合载体使要表达的蛋白和谷胱甘肽S转移酶一起表达，然后利用Glutathione Sepharose 4B作亲和层析纯化，再利用凝血酶或因子Xa切开。
2. 蛋白A融合载体使要表达的蛋白和蛋白A的IgG结合部位融合在一起表达，以IgG Sepharose 6 FF纯化。
二 含组氨酸标记（Histidine-tagged）的融合蛋白可用Chelating Sepharose FF螯合Ni2+金属，在一般或变性条件（8M尿素）下透过组氨酸螯合融合蛋白。HisTrap试剂盒提供整套His-Tag蛋白的纯化方法。
9.纯化——包涵体蛋白
包涵体蛋白往往需溶于6M盐酸胍或8M尿素中。一般包涵体蛋白样品的纯度越高，复性效果越好。SOURCE 30 RPC反相层析介质很适合纯化复性前的粗品，并可以1MnaOH重生。此方法纯化后的包涵体蛋白，复性回收率明显提高。
10.包涵体蛋白固相复性
许多文献报导将包涵体蛋白在变性条件下固定（吸附）在层析介质上，一般用各种Sepharose FF离子交换层析介质。而且无需大量稀释样品，并将复性和初纯化合二为一，大大节省时间及提高回收率。
固相复性方法也被用于以HiTrap Chelating金属螯合层析直接复性及纯化包涵体形式表达的组氨酸融合蛋白；以HiTrap Heparin肝素亲和层析直接复性及纯化包涵体形式表达的含多个赖氨酸的融合蛋白。两种亲和层析预装柱均可反复多次重复使用，比一般试剂盒更方便、耐用。
11.纯化——中草药有效成分
中药的化学成分极其复杂。例：如用甲醇分离黄酮甙，三糖甙先被洗下来，二糖甙其次，单糖甙随后，最后是甙元。Sephadex LH-20可使用水、醇、丙酮、氯仿等各种试剂，广泛用于各种天然产物的分离，包括生物碱、甙、黄酮、醌类、内脂、萜类、甾类等。
生物碱在酸性缓冲液中带正电，成为盐，HiTrap SP阳离子交换层析柱可以分离许多结构非常近似的生物碱。相反，黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸等可溶于偏碱的缓冲液中，在HiTrap Q阴离子交换柱上分离效果良好。
一般多糖纯化大多使用分子筛如Sephadex，Sephacryl.若分子量在600KD以下，并需更高分辨率，可选择新一代的Superdex.一般植物可能含水溶性、酸溶性、碱溶性多种多糖。SOURCE5、15、30RPC反相层析也很适合各种中药有效成分的检测、分离和放大制备。由于中药的成分非常复杂，SOURCE反相层析可用范围为PH1-14 ，并可用1M NaOH，1M HCL清洗、再生。比传统硅胶反相层析更易于工艺优化及在位清洗，寿命也更长。
12.纯化——肽类
肽类的来源有天然萃取，合成肽和重组肽三种。肽容易被酶降解，但可从有机溶剂或促溶剂中复性，所以多以高选择性的反相层析如SOURCE 30RPC、SOURCE 15RPC、SOURCE 5RPC或离子交换Minibeads、Monobeads作纯化。Superdex Peptide HR是专为肽分子纯化设计的凝胶过滤预装柱，能配合反相层析做出更精美的肽图。肽分子制备可用离子交换配合凝胶过滤Superdex 30 PG。医学都市多功能
13.纯化——核酸、病毒
核酸的纯化用于去除影响测序或PCR污染物等研究。核酸可大致上分为质粒DNA、噬菌体DNA和PCR产物等。病毒也可视作核酸大分子，和质粒DNA一样，可用分离大分子的Sephacry S-1000 SF、Superose或Sepharoce 4FF凝胶过滤介质去除杂蛋白，再配合离子交换如Mono Q、 SOURCE Q分离核酸。
14.纯化——寡核苷酸寡酸苷酸
多应用在反义（anti-sense）DNA、RNA测序、PCR和cDNA合成等研究。合成后含三苯甲基的寡核苷酸以阴离子交换的Mono Q或快速低反压的SOURCE Q在PH12下可除副产物，并避免凝集和保护基的脱落。载量大大高过反相层析，可用做大量制备。不含三苯甲基的失败序列可用反相柱ProRPC去除。
15.脱盐、小分子去除
使用凝胶过滤介质Sephadex G10，G15，G25，G50等去除小分子，效率高，处理量可达床体积30%.只需在进样后收集首1/3-1/2柱体积的洗脱液，HiPrep Desalting（26ml）可在数分钟为多至10ml样品脱盐。
16.疫苗纯化
使用凝胶过滤介质Sepharose 4FF纯化疫苗，去除培养基中的杂蛋白，处理量可大于床体积10%.柱高一般40-70cm，整个过程约半至一小时。使用此法生产的疫苗品种有乙肝、狂犬、出血热、流感、肺结核、小儿麻痹疫苗等。分子量较小的疫苗可使用Sephacryl S-500HR，如甲肝疫苗等。
17.抗生素聚合物分析
中国药典从2000年版起要求抗生素头孢曲松钠需要找出聚合物占产品的白分比，规定使用Sephadex G10凝胶过滤法测定。
18.纯化-基因治疗用病毒载体
SORRCE 15Q
19.纯化-基因治疗用质粒
Q Sepharose XL，SOURCE 15Q，STREAMLINE Q，Sephacryl S500，Plasmidselect 在下游纯化中，可应用不同层析技术在纯化生物分子的同时，去除各种污染物。 1.去除——内毒素
内毒素又称热原。含脂肪A、糖类和蛋白，是带负电的复合大分子。
内毒素的脂肪A部份有很强的疏水性。但在高盐下会凝集，无法上疏水层析。利用疏水层析试验盒（17-1349-01）可选择结合目标蛋白的介质而去除内毒素。
内毒素与阴离子交换介质Q或DEAE Sepharose Fast Flow有较强结合。可在洗脱目标蛋白后用高盐缓冲液或NaOH去除。
利用CNBr或NHS Sepharose FF可偶联内毒素底物如LAL，PMB，自动成亲合层析介质结合内毒素。内毒素经常是多聚体，凝胶过滤层析可有效地将之去除。
2.去除——蛋白中的核酸
大量核酸增加样本黏度，令区带扩张，反压增加，降低分辨率和流速。药审和食检对核酸含量也有严格限制。
胞内表达蛋白的核酸问题尤其严重。核酸带阴电荷，在初步纯化时利用阳离子交换介质如STREAMLINESP，SP Sepharose Big Beads，SP或CM Sepharose FF，SP SepharoseXL结合目标蛋白，可除去大量核酸。
核酸在高盐下会和蛋白解离，疏水层析介质很适合用来结合目标蛋白，在纯化蛋白的同时去除核酸。
利用核酸酶将核酸切成小片断，用凝胶过滤做精细纯化时便很容易去除了。
3.去除——病毒和微生物
病毒和微生物可成为病原，应尽量减除。结合不同层析技术，使用注射用水，用NaOH定期进行仪器和凝胶的在位消毒和在位清洗，皆可避免污染物增加。
病毒大都有脂外壳。可用与目标蛋白电荷相反的S/D（solvent/detergent）处理，使病毒失活，如Triton和Tween.再用适当的离子交换介质如CM Sepharose FF结合目标蛋白，去除S/D.
其它污染物可以改变pH和离子强度使其从目标分子中解离或失活，凝胶过滤介质Superdex及多种吸附性介质，SOURCE都是很好的精细纯化介质，可去除多种微量污染物。 凝胶是指颗粒大小在1埃到10埃之间的混合物。高分子溶液和某些溶胶，在适当的条件下，整个体系会转变成一种弹性的半固体状态的稠厚物质，失去流动性。这种现象称为胶凝作用,所形成的产物叫做凝胶或冻胶.
“气凝胶”是指分散系为气态的，如：云，雾等，“固凝胶”有烟水晶等，“液凝胶”就是呈液态的胶体，如氢氧化铁胶体 。向左转|向右转
美迪西是一家综合性的
悟空问答 电导滴定仪与电导率仪是同一个仪器吗?(0个回答) 123
steamedbread872021-07-23
His-Tag作为一种标签，对以后蛋白的分离纯化及检测鉴定都有好处。不含His-Tag的蛋白只能使用，如要检测，则需要购买专门的抗体。
蛋白质工程的原理是什么?123
2018-03-21
求详细标准的解答
Cell Stem Cell:利用重组蛋白诱导iPS细胞成功123
dede92021-08-14
美国Scripps研究所，ProteomTech公司，和德国马克斯普朗克分子生物医学研究所等机构的科研人员成功地利用重组蛋白诱导体细胞生成多能干细胞。较之传统的依赖于病毒载体的诱变方法，这一划时代的新方法无需使用任何形式的外源性遗传物质，从而消除了传统方法中不可避免的对靶细胞自身基因组的影响，而且更加简便快捷。这项成果已经在最近一期的"细胞·干细胞"期刊发表，并立即引起了包括华尔街日报,NBC和福布斯等在内的各大媒体的广泛关注。
人类医学发展到今天,对某些疑难疾病还是不能彻底根治,如遗传疾病，器官坏死，和糖尿病等。这些疾病仅靠药物治疗只能减缓症状，而器官移植又受捐赠器官有限和免疫排斥等因素的限制而不能推广。干细胞是唯一有可能攻克这些疾病的治疗手段。但长期以来，获取多能干细胞(pluripotentstemcell)的主要来源为人的胚胎。这引起道德和宗教的争议，进而在美国等国家受到法律限制。另外，用异己的胚胎干细胞发展的治疗手段将来还是会遇到免疫排斥的问题。
2006年，日本科学家ShinyaYamanaka领导的实验室第一次证明，通过以反转录病毒为载体转基因表达四个转录因子，可以将小鼠或人的体细胞转变为与胚胎干细胞拥有相似分化和繁殖能力的细胞，命名为诱导性干细胞（iPS）。这一成果具有划时代的意义：1）干细胞的产生可以不再需要破坏胚胎，避免了道德，宗教和法律上的限制；2）不同疾病的诱导性干细胞可衍生出不同类型的疾病模型，为基础研究和药物筛选提供了强大的武器；3）理论上，各种疑难疾病可以通过病人自己的体细胞转变为干细胞，再分化为各种类型的细胞，组织，甚至器官，经过或不经过体外加工后，放回病人体内，治愈疾病。
在本论文中，研究人员成功地用四个转录因子的蛋白完成了由体细胞到诱导性干细胞的转变过程。自始至终，细胞的遗传信息没有受到任何影响。蛋白诱导性干细胞的重大意义包括：1）安全性：转化过程没有使用病毒，没有使用基因，没有任何改变细胞遗传信息的风险；2）普及性：蛋白诱导方法远比基因诱导方法简单易行。这样一来，iPS技术不再被几个资深实验室所垄断。大部分实验室都可以重复蛋白方法而获得iPS。也就是说，蛋白诱导方法大大降低了iPS领域的"门坎"。3）可行性：由于该方法的简单易行，重复性强，它可以被扩大化，产业化，进而被商业化。蛋白诱导干细胞方法将大大降低利用干细胞对病人"量身定做"的治疗手段的成本，使得这一商业模式成为可能。
如果说，ShinyaYamanaka博士的成果第一次使人类看到了一个梦想，那么这篇论文的发表标志着我们从梦想向现实跨出了关键的一大步。
CellStemCell,23April2009doi:10.1016/j.stem.2009.04.005
GenerationofInducedPluripotentStemCellsUsingRecombinantProteins
HongyanZhou1,ShiliWu4,7,JinYoungJoo5,7,SaiyongZhu1,DongWookHan5,TongxiangLin1,SuniaTrauger2,3,GeofferyBien4,SusanYao4,YongZhu4,GarySiuzdak2,3,HansR.Sch?ler5,LingxunDuan6andShengDing1,,
1DepartmentofChemistry,TheScrippsResearchInstitute,10550NorthTorreyPinesRoad,LaJolla,CA92037,USA
2DepartmentofMolecularBIOLOGy,TheScrippsResearchInstitute,10550NorthTorreyPinesRoad,LaJolla,CA92037,USA
3CenterforMassSpectrometry,TheScrippsResearchInstitute,10550NorthTorreyPinesRoad,LaJolla,CA92037,USA
4ProteomTech,Inc.,3505CADIllacAvenue,SuiteF7,CostaMesa,CA92626,USA
5DepartmentofCellandDevelopmentalBiology,MaxPlanckInstituteforMolecularBiomedicine,R?ntgenstrasse20,Münster48149,Germany
6LD***aInc.,SandownWay,SanDiego,CA92130,USA
7Theseauthorscontributedequallytothiswork
Groundbreakingworkdemonstratedthatectopicexpressionoffourtranscriptionfactors,Oct4,Klf4,Sox2,andc-Myc,couldreprogrammurinesomaticcellstoinducedpluripotentstemcells(iPSCs)(TakahashiandYamanaka,2006),andhumaniPSCsweresubsequentlygeneratedusingsimilargeneticmanipulation(Takahashietal.,2007,Yuetal.,2007).Toaddressthesafetyissuesarosefromharboringintegratedexogenoussequencesinthetargetcellgenome,anumberofmodifiedgeneticmethodshavebeendevelopedandproducediPSCswithpotentiallyreducedrisks(fordiscussion,seeYamanaka,2009,andreferencestherein).However,allofthemethodsdevelopedtodatestillinvolvetheuseofgeneticmaterialsandthusthepotentialforunexpectedgeneticmodificationsbytheexogenoussequencesinthetargetcells.Herewereportgenerationofprotein-inducedpluripotentstemcells(piPSCs)frommurineembryonicfibroblastsusingrecombinantcell-penetratingreprogrammingproteins.WedemonstratedthatsuchpiPSCscanlong-termself-renewandarepluripotentinvitroandinvivo.
人类医学发展到今天,对某些疑难疾病还是不能彻底根治,如遗传疾病，器官坏死，和糖尿病等。这些疾病仅靠药物治疗只能减缓症状，而器官移植又受捐赠器官有限和免疫排斥等因素的限制而不能推广。干细胞是唯一有可能攻克这些疾病的治疗手段。但长期以来，获取多能干细胞(pluripotentstemcell)的主要来源为人的胚胎。这引起道德和宗教的争议，进而在美国等国家受到法律限制。另外，用异己的胚胎干细胞发展的治疗手段将来还是会遇到免疫排斥的问题。
2006年，日本科学家ShinyaYamanaka领导的实验室第一次证明，通过以反转录病毒为载体转基因表达四个转录因子，可以将小鼠或人的体细胞转变为与胚胎干细胞拥有相似分化和繁殖能力的细胞，命名为诱导性干细胞（iPS）。这一成果具有划时代的意义：1）干细胞的产生可以不再需要破坏胚胎，避免了道德，宗教和法律上的限制；2）不同疾病的诱导性干细胞可衍生出不同类型的疾病模型，为基础研究和药物筛选提供了强大的武器；3）理论上，各种疑难疾病可以通过病人自己的体细胞转变为干细胞，再分化为各种类型的细胞，组织，甚至器官，经过或不经过体外加工后，放回病人体内，治愈疾病。
在本论文中，研究人员成功地用四个转录因子的蛋白完成了由体细胞到诱导性干细胞的转变过程。自始至终，细胞的遗传信息没有受到任何影响。蛋白诱导性干细胞的重大意义包括：1）安全性：转化过程没有使用病毒，没有使用基因，没有任何改变细胞遗传信息的风险；2）普及性：蛋白诱导方法远比基因诱导方法简单易行。这样一来，iPS技术不再被几个资深实验室所垄断。大部分实验室都可以重复蛋白方法而获得iPS。也就是说，蛋白诱导方法大大降低了iPS领域的"门坎"。3）可行性：由于该方法的简单易行，重复性强，它可以被扩大化，产业化，进而被商业化。蛋白诱导干细胞方法将大大降低利用干细胞对病人"量身定做"的治疗手段的成本，使得这一商业模式成为可能。
如果说，ShinyaYamanaka博士的成果第一次使人类看到了一个梦想，那么这篇论文的发表标志着我们从梦想向现实跨出了关键的一大步。
CellStemCell,23April2009doi:10.1016/j.stem.2009.04.005
GenerationofInducedPluripotentStemCellsUsingRecombinantProteins
HongyanZhou1,ShiliWu4,7,JinYoungJoo5,7,SaiyongZhu1,DongWookHan5,TongxiangLin1,SuniaTrauger2,3,GeofferyBien4,SusanYao4,YongZhu4,GarySiuzdak2,3,HansR.Sch?ler5,LingxunDuan6andShengDing1,,
1DepartmentofChemistry,TheScrippsResearchInstitute,10550NorthTorreyPinesRoad,LaJolla,CA92037,USA
2DepartmentofMolecularBIOLOGy,TheScrippsResearchInstitute,10550NorthTorreyPinesRoad,LaJolla,CA92037,USA
3CenterforMassSpectrometry,TheScrippsResearchInstitute,10550NorthTorreyPinesRoad,LaJolla,CA92037,USA
4ProteomTech,Inc.,3505CADIllacAvenue,SuiteF7,CostaMesa,CA92626,USA
5DepartmentofCellandDevelopmentalBiology,MaxPlanckInstituteforMolecularBiomedicine,R?ntgenstrasse20,Münster48149,Germany
6LD***aInc.,SandownWay,SanDiego,CA92130,USA
7Theseauthorscontributedequallytothiswork
Groundbreakingworkdemonstratedthatectopicexpressionoffourtranscriptionfactors,Oct4,Klf4,Sox2,andc-Myc,couldreprogrammurinesomaticcellstoinducedpluripotentstemcells(iPSCs)(TakahashiandYamanaka,2006),andhumaniPSCsweresubsequentlygeneratedusingsimilargeneticmanipulation(Takahashietal.,2007,Yuetal.,2007).Toaddressthesafetyissuesarosefromharboringintegratedexogenoussequencesinthetargetcellgenome,anumberofmodifiedgeneticmethodshavebeendevelopedandproducediPSCswithpotentiallyreducedrisks(fordiscussion,seeYamanaka,2009,andreferencestherein).However,allofthemethodsdevelopedtodatestillinvolvetheuseofgeneticmaterialsandthusthepotentialforunexpectedgeneticmodificationsbytheexogenoussequencesinthetargetcells.Herewereportgenerationofprotein-inducedpluripotentstemcells(piPSCs)frommurineembryonicfibroblastsusingrecombinantcell-penetratingreprogrammingproteins.WedemonstratedthatsuchpiPSCscanlong-termself-renewandarepluripotentinvitroandinvivo.
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