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Biovendor/LIGHT Murine E. coli/RBG20087100/100 μg
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Biovendor/LIGHT Murine E. coli/RBG20087100/100 μg
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RBG20087100
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  • Regulatorystatus:RUO
  • Type:Recombinant
  • Source:E.coli
  • Species:Murine

Type

Recombinant

Description

LIGHTbelongstotheTNFfamilyofligands,andcansignalthroughtheherpesvirusentrymediatortypeA receptor(HVEM,TNFRSF14),LTβR,orbindtoadecoyreceptor,DcR3.Itisexpressedinsplenocytes,activatedPBL,CD8+tumorinfiltratinglymphocytes,granulocytes,andmonocytes.LIGHThastheABIlitytoactiveNF-κB,toco-stimulatetheactivationoflymphocytesandtoinduceapoptosisincertainhumantumorcells.RecombinantMurineLIGHTisa20.1 kDaproteincontaining183 aminoacidresidues,comprisingtheTNF-homologousregionoftheLIGHTextracellulardomain.

AminoAcidSequence

MRLHQRLGDIVAHLPDGGKGSWEKLIQDQRSHQANPAAHLTGANASLIGIGGPLLWETRLGLAFLRGLTYHDGALVTMEPGYYYVYSKVQLSGVGCPQGLANGLPITHGLYKRTSRYPKELELLVSRRSPCGRANSSRVWWDSSFLGGVVHLEAGEEVVVRVPGNRLVRPRDGTRSYFGAFMV

Source

E.coli

Purity

98%

BIOLOGicalActivity

DeterminedbyitscytotoxiceffectonHT-29 cells(humancolonadenocarcinomacells)inthepresenceofhuman IFN-γ.

Endotoxin

Endotoxinlevelis<0.1 ng/μgofprotein(<1EU/μg).

Reconstitution

Centrifugethevialpriortoopening.Reconstituteinwatertoaconcentrationof0.1–1.0 mg/ml.Donotvortex.Forextendedstorage,itisrecommendedtofurtherdiluteinabuffercontainingacarrierprotein(example0.1%BSA)andstoreinworkingaliquotsat-20°Cto –80°C.

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重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。目前,体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功... 查看更多>
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开个贴,做好准备,已经有战友开始采用CTD格式写申报资料,大家多交流。


怎么好多只有题

而没答案
帮帮我
给我提供答案
考研细胞的题答案
包涵体的形成是一个由许多蛋白质参与的极端复杂的动力学过程,依赖于蛋白质的折叠速率和聚集速率,并且与蛋白质的合成和降解程度相关。强的表达系统,高的诱导剂浓度,相对较高的培养温度常常造成包涵体的形成。除了外界因素,包涵体的形成依赖于蛋白质特异的折叠行为,而不是蛋白的通常特性,如大小,融合标签,相对的疏水性。尽管如此,限制折叠速率的结构特性,如二硫键的形成常常是含有二硫键蛋白质正确折叠的限速步骤(并不绝对,因为有些蛋白质二硫键的破坏并不影响其功能),富含二硫键的蛋白质具有更为复杂的结构,当高水平表达时,由于大肠杆菌细胞质是一个偏还原性的环境,蛋白质容易形成错配的二硫键,这常常是包涵体形成的主要原因。膜蛋白具有暴露的疏水区,表达时易于聚集形成包涵体,也有可能由于降解或对细胞的毒性作用使得表达水平极低。蛋白质的糖基化可以影响到蛋白质的折叠行为和溶解性,当它们在原核系统进行表达时,也容易聚集。
防止包涵体常用的方法:使用中等强度或弱的启动子,低温培养,有限的诱导,优化培养基条件,进行融合表达,与伴侣分子和折叠酶共表达,表达定位于不同的空间,选择突变的菌株或其他的原核表达系统。
增加蛋白质折叠的添加剂:添加剂可能的作用机制甘油对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度L-精氨酸两亲分子/渗压剂甘氨酰甜菜碱/山梨糖醇 对蛋白质具有优先的水合作用阿拉伯聚糖 增加黏度木糖醇 增加黏度乙醇 调节极性DMSO 调节极性
两性离子表面活性剂(Zwitterionic detergents)保护非极性表面Triton X-100保护非极性表面硫代甜菜碱类物质(NDSBs)保护非极性表面蔗糖/海藻糖对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度N-氧化三甲胺(TMAO)对蛋白质具有优先的水合作用/渗压剂三氟乙醇(TFE)促进二级结构的形成低浓度盐酸胍使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性低浓度尿素使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性配体稳定天然结构状态聚乙二醇保护熔球体(molten globule)/增加黏度需要强调的是在培养细菌时,在培养基中加入5%的乙醇可以起到一定的防止包涵体产生的作用。
对比另外一篇文章:
减少包涵体形成的策略降低重组菌的生长温度,降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法,较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用,从而可减少包涵体的形成。2. 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂,培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应,在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输,其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇(诱导热休克蛋白的表达)、低分子量的巯基或二硫化合物(影响细胞周质的还原态,从而影响二硫键的形成)和NaCl。3. 供给丰富的培养基,创造最佳培养条件,如供氧、pH等。
美迪西生物医药在重组蛋白表达与纯化服务方面有10余年经验积累,拥有多种蛋白表达系统。
希望能把问题写的更为明确一些。
你可以试着读一下看看。
蛋白质重组,先要全部水解为氨基酸,蛋白质的种类多就是因为它的数量大,结构复杂,空间结构千变万化。而基本的氨基酸只有20中,所以它重组以后就可能变成完全不同的东西,控制和以前完全无关的代谢过程。
基因重组只是控制同一性状表达不同而已,但是它不会改变性状的基本情况。如:控制眼睛颜色的基因,亲本的基因重组之后可能亲本为黑色,子代便为蓝色。但绝对不会控制眼睛颜色的基因在重组之后就变成控制耳朵的基因。
举例如下,分别的特点,可以分别百度搜索查看。
▷ 重组蛋白生产平台
▪ HEK293细胞瞬转
▪ CHO细胞
▪ 昆虫细胞/杆状病毒
▪ 酵母细胞
▪ 大肠杆菌发酵
重组蛋白多肽的分离纯化问题不管是对生产还是研究工作都是关键性的问题,这里给大家一点总结性的文章,希望能够抛砖引玉,欢迎热烈的讨论:)

理论总结.rar(116.67k)
无细胞蛋白表达系统又称为体外翻译系统,是模拟生物细胞的生命现象,重现胞内蛋白转录翻译过程。无细胞蛋白质合成体系以外源目的mRNA或DNA为蛋白质合成模板,通过人工控制补加蛋白质合成所需的底物和转录、翻译相关蛋白因子等物质,能实现目的蛋白质的体外蛋白合成。金开瑞的与传统的蛋白表达系统相比,省略了耗时耗力的质粒转化、细胞培养、收集、破碎和离心等,极大地提高了工作效率;2.反应体系小,能同时平行合成多种不同的蛋白质;3.反应周期短,能满足高通量配体筛选和蛋白质组学的科研要求;4.开放的反应体系,便于改变各项反应条件,有利于调控基因的转录,蛋白质的合成和翻译后修饰,避免包涵体的形成;5.稳定的反应体系,可以偶联其它工艺,形成自动化、程序化、规模化生产,加快重组蛋白的纯化、功能表征和后续的结构解析;6.无细胞结构限制,可用于生产对宿主有毒害作用的外源蛋白,避免蛋白表达对宿主细胞的致死作用;7.添加非天然氨基酸或同位素标记氨基酸,表达特殊蛋白。8.对于多次跨膜或由于疏水性强导致的普通细胞系表达困难的项目有显著改善。
使用大动物血液生产血清白蛋白大概有五方面优点:技术要求较低; 产量大(如果养殖规模大的话); 可以反复生产(抽完一次血过一个时期又可以抽); 目的蛋白组分及结构较明确(相对于重组细菌发酵生产白蛋白来说);生产方法固定(参见药典,或相关生产GMP).
事实上,现在多数药用级别白蛋白都是用血清生产的.
白蛋白的销售方向若是面向实验室,可采用重组质粒转到微生物发酵的方法生产,对土地面积的要求小,更集约,成本效率更高.
重组蛋白的话,一般在蛋白冻干或最终制得之前,都会进行纯化,一般的生物公司可以纯化纯度到达90%,就是不会有其他的杂蛋白存在。做抗体或者抗原等都不会对免疫有影响的,如有你的里面其他杂蛋白多的话,建议先做蛋白纯化(亲和纯化,分子筛都可,一般的亲和纯化,带有his标签或者GST标签都可到达最少85%以上的纯度)
提供亲和纯化相关资料:http://wenku.baidu.com/view/ef8f3831f8c75fbfc67db276
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