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선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 농도 : 19 pmol/㎕
□ 용량 : 53 ㎕
□ 보존 : -20℃(동결)
□ 검출 세균명
Staphylococcus aureus
□ 제품설명
아래와 같이 프라이머의 각 형을 조합하여 PCR을 실시하면 황색 포도상구균의각 enterotoxin 유전자와 독소성 쇼크 증후군 독소
1형 (TSST-1) 유전자를 특이적 으로 검출 할 수 있다.
□ 사용 전 주의사항
본 제품은 유전자검출방법을 이용하므로 생균과 사균에서 모두 검출됩니다.염색체 상에서 primer 결합부위에 서열 변이, 결실 또는 삽입이 된 경우, 목적 유전자를 검출할 수 없는 경우도 있습니다. 판정의 확정을 위해서는유전자 검사 외의 미생물학적인 검사도 병행하십시오. (TakaraBio는 본 제품으로 도출된 검사 결과판정에 의하여 발생하는 문제에 관해 책임지지 않습니다.)
Primer (TaKaRa Code) | 검출 가능한 유전자 | 증폭 DNA 크기 |
SEA-1 & 2 (S009) | Enterotoxin A 유전자 | 423 bp |
SEB-1 & 2 (S010) | Enterotoxin B 유전자 | 391 bp |
SEZ-1 & 2 (S011) | Enterotoxin C 유전자 | 146 bp |
SED-1 & 2 (S012) | Enterotoxin D 유전자 | 499 bp |
SEE-1 & 2 (S013) | Enterotoxin E 유전자 | 557 bp |
TST-1 & 2 (S015) | 독소성 쇼크증후군 독소 1형유전자 (TSST-1) | 228 bp |
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1. 血细胞与血清分离:
取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm离心20min .弃沉淀,留上清备用(沉淀为血细胞,上部为血清).
2. 乳糜粒分离:4000rpm 10°C离心10分钟,采用密度梯度离心
梯度液配置:离心管下部3/4容积加血浆,上部1/4容积加0.5MnaCl+0.3MEDTA,PH7.4 乳糜粒上浮,将乳糜粒吸出,留其余液体备用.
3. 血清蛋白分离:除去球蛋白,白蛋白及其它蛋白质.
【教学内容一】分段盐析法,凝胶过滤法(盐析法概念及原理,分段盐析概念,分子筛效应,柱层析基本技术)
【实验原理】1.盐析法是一种利用蛋白质在高盐溶液中溶解度不同而分离的方法。通过将硫酸铵加入蛋白质溶液中,使蛋白质表面电荷被中和,水化膜被破坏,导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。2.通过分段改变盐类浓度达到分离目的的方法叫分段盐析法。3.凝胶过滤又称分子筛层析。混合物随流动相流经装有凝胶作为固定相的层析柱时,分子量大的物质因不能进入凝胶网孔而沿凝胶颗粒间的空隙先被洗脱(阻力小,流程短,流速大),分子量小的物质因能进入凝胶网孔而受阻滞,流速缓慢,流程长而后被洗脱,由于流速不同可以把大小不同的分子分开.
【仪器与试剂】1.离心机2.真空泵3.饱和硫酸铵溶液:称取767g固体硫酸铵,加入1000ml水中,加热使之溶解,室温冷却后4℃静置过夜,然后用氨水将pH调至中性。4.固体(NH4)2SO45.SephadexG—256.奈氏试剂7.双缩脲试剂8.pH7.4,0.05MPBS
【步骤】
一分段盐析
1.观看人血清抗胰蛋白酶(α1-AT)的分离及鉴定教学录像2.每组量取20ml血清,倒入一干净烧杯中,缓慢加入饱和硫酸铵20ml,边加边搅拌,放入4℃冰箱30分钟3.从冰箱中取出烧杯,将血清倒入离心管,3000rpm,离心20分钟4.将上清倒入一干净量筒中,记录体积后,倒入干净烧杯中,按17.6g/100ml量取固体硫酸铵,缓慢加入上清中,边加边搅拌。4℃冰箱放置30分钟5.将烧杯中液体倒入抽滤器中,负压抽滤6.刮下滤纸上的粗提蛋白,用4ml缓冲液溶解,准备加样
二凝胶过滤层析
1.凝胶柱准备:(1)连接层析柱(2)夹住出口,加入1/3体积的0.05MpH6.4PBS,灌胶,待凝胶自然沉降约1cm时,打开出口,控制流速,60滴/分(3)层析柱填装完成后,连接下口瓶,调节流速,使入口和出口流速相同。平衡至入口pH值与出口pH值相同(即pH试纸呈色相同),关闭出口,等待加样2.加样:用吸管吸去胶面以上的缓冲液,立即加入蛋白粗提液(沿管壁缓慢加入)3.打开出口,调流速15滴/分,待蛋白粗提液完全进入胶面,用少量缓冲液清洗管壁。连接下口瓶4.检测:用双缩脲试剂检测洗脱液。待试剂变红,开始收集,直到试剂不变色停止收集。测量并记录收集液的体积,留取1ml样品(标记为G—25样品),放入一冷冻管中冰箱冻存;剩余的液体收集入一大试管中,作好标记,下次实验用5.洗去铵盐:全速洗脱,用奈氏试剂检测洗脱液,直到橙色消失为止,回收凝胶
【注意事项】1.盐析所用器皿一定要干燥2.盐析时,应将饱和硫酸铵或固体硫酸铵加入到血清中,且边加边搅拌3.层析柱上方要留有少量液体,避免使凝胶暴露于空气中4.凝胶过滤上样时,使样品沿管壁缓缓流下,勿冲破胶面
(信息提供:探生网生物医药)
蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降低,使蛋白质分子之间聚集而沉淀。一般33%硫酸铵为沉淀Ig-G的最适饱和度

