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Novus/INSTA-Blot Male Lung Tissue OncoPair/NBP2-30122
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| Description | Tissue
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| Background | The development of biomarkers has enormous potential for revolutionizing the diagnosis and treatment of disease. Western blot analysis is an integral technique for biomarker profiling. While key for biomarker discovery, the existing body of western blot data has primarily been defined from studies of tumor, immortal, and primary cells growing in vitro. Collectively, results obtained over dec...ades have been integral to the dogma that up- and down-regulation of proteins can be leveraged as biomarkers of normal development, homeostasis, and disease. However, data from human tissue-derived products is key for generating biomarker validation data and progressing the most promising biomarker targets towards the clinic. The OncoPair INSTA-Blot͐ product line addresses the increasing demand for the inclusion of human tissue-derived products in biomarker profiling.The OncoPair INSTA-Blot͐ is a ready-to-use PVDF western blot membrane containing denatured protein lysates manufactured from Novus extensive Human Clinical Tissue Lysate collection. Each blot contains 14 lanes of alternating tumor (T) and matched normal adjacent (NA) tissue lysates from 7 patient donors. Incorporating both T and NA on the blot enables protein expression analysis of the tumor and microenvironment. The tumor microenvironment is increasingly being recognized as a major factor in influencing malignant progression and metastatic potential.Cancer is a heterogeneous disease and the presence of multiple donors on a single blot enables rapid screening of protein expression variability between T/NA from different individuals and at different disease stages. OncoPair INSTA-Blots͐ are available for a wide range of tumor types and stages. The product line is manufactured from donor patient tissue obtained from established hospital-based collection sites around the world. Tissues are collected under strict bioethical standards using IRB and HIPAA approved protocols. These protocols ensure patient confidentiality, safety, and informed consent. Tissues are flash frozen at collection sites within minutes of removal, maintained in liquid nitrogen and processed into lysates using protocols optimized for extracting proteins from tissues. Lysates are denatured for OncoPair INSTA-Blot͐ production; native lysates are available for follow up proteomic studies. OncoPair INSTA-Blots͐ and lysates are also useful in conjunction with the Cell Line and Normal Tissue INSTA-Blots͐ and lysates for comprehensive antibody validation and to profile antibody reactivity and protein expression patterns across species and between tissues and cells lines. The OncoPair INSTA-Blots͐ are proteomic discovery tools and are useful for screening the expression of various proteins in tumor and normal adjacent tissues from various donors. Researchers may want to follow up on their results by further analysis with the corresponding individual lysates when available. Show More | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| PreparationMethod | Tissue specimens were homogenized in modified RIPA buffer to obtain the soluble proteins and centrifuged to clarify. The concentration of protein in each lysate was determined by a standard protein assay and standardized to 1 mg/ml. Sample buffer was added to the soluble fraction and approximately 14 ug/lane of protein was run and then transferred to PVDF membrane.Soluble fraction extraction buffer (extract 1): PBS at pH 7.4, 1 ug/ml Aprotinin, 1 mM NaF -Modified RIPA buffer: 1 mM EDTA, 1 ug/ml Pepstatin-A, 0.1% SDS, 0.25% Na deoxycholate, 1 ug/ml Leupeptin, 1 mM PMSF, 1 mM Na3VO45X Sample buffer: 50 ml glycerol, 15 g SDS, 3.819 g Tris, pH 6.8, 25 ml 2-ME, 100 mg bromophenol blue, final volume of 100 ml with DI H2O. |
| Application Notes | Use in Western blot reported in scientific literature (PMID 25985210) | |
| Publications |
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
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运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2018-12-26
. Overview This protocol provides considerations and generalized procedures for the use of dialysis to alter the composition of a protein solution. It is a use 查看更多
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2018-04-24
上海研生实业有限公司所提供的红细胞裂解液质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息！ 查看更多
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2021-07-31
西安昌岳生物科技有限公司在发布的绿原酸50%绿咖啡豆提取物 抗氧化 保健品原料供应信息，浏览与绿原酸50%绿咖啡豆提取物 抗氧化 保健品原料相关的产品或在搜索更多与绿原酸50%绿咖啡豆提取物 抗氧化 保健品原料相关的内容。 查看更多
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2021-08-15
货号：EH0024 查看更多
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2018-03-29
浙江圣氏生物科技有限公司在发布的辅助治疗猴头菇提取物供应信息，浏览与辅助治疗猴头菇提取物相关的产品或在搜索更多与辅助治疗猴头菇提取物相关的内容。 查看更多
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2018-06-20
徐州微科曼得生物工程有限公司在发布的RIPA组织/细胞裂解液（中）供应信息，浏览与RIPA组织/细胞裂解液（中）相关的产品或在搜索更多与RIPA组织/细胞裂解液（中）相关的内容。 查看更多
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货号：WBR0105 查看更多
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2017-12-26
人肺动脉内皮细胞裂解液是由上海中乔新舟生物科技有限公司代理或销售的sciencell品牌的试剂，产品来源于美国。上海中乔新舟生物科技有限公司是中国最权威的人肺动脉内皮细胞裂解液试剂销售服务商之一，在上海等地方销售人肺动脉内皮细胞裂解液试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业人肺动脉内皮细胞裂解液仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的人肺动脉内皮细胞裂解液产品 查看更多
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2018-03-20
南京森贝伽生物科技有限公司在发布的通用细胞裂解液供应信息，浏览与通用细胞裂解液相关的产品或在搜索更多与通用细胞裂解液相关的内容。 查看更多
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2018-04-18
南京道斯夫生物科技有限公司在发布的菠菜提取物供应信息，浏览与菠菜提取物相关的产品或在搜索更多与菠菜提取物相关的内容。 查看更多
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2021-07-25
枸杞子提取物是由西安四叶草生物科技有限公司代理或销售的SYC品牌的试剂，产品来源于西安。西安四叶草生物科技有限公司是中国最权威的枸杞子提取物试剂销售服务商之一，在西安等地方销售枸杞子提取物试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业枸杞子提取物仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的枸杞子提取物产品 查看更多
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2021-08-06
图片来源：www.sciencedaily.com阿尔兹海默病和帕金森疾病是两种和年龄相关相关的神经变性疾病，其主要特点就是随着时间延续，患者的大脑中会积累损伤患者机体神经系统的粘性蛋白聚集物，进而就会影响患者的运动能力和记忆力。日前一项发表在国际杂志Neuroscience Letters上的研究报告中，来自马尔他大学等机构的研究人员通过研究发现，提取自地中海植物仙人掌和褐海藻中的特殊化合物或可作为新型候选药物来帮助抵御神经变性疾病的 查看更多
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【求助】细胞裂解液能否用于组织提取总蛋白 蛋白质和糖学...123
廖小明83jE2017-10-03
不是用的试剂盒吗？
【求助】急, !!!请教下细胞裂解的方法 蛋白质和糖学技术讨论版...123
小时候的梦想家2021-07-26
各位大虾，我想请教下，本人试验作香烟烟雾提取物（CSE）对细胞色素C氧化酶（COX）活性的影响，采用ECV304，拟将细胞破碎后用碧云天的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，用GENMED细胞/组织悬液细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒测定COX活性，但是我不知该选用和种方法裂解细胞，请各位多多指导，小妹万分感谢，
不知单纯使用冰浴中超声裂解够了吗？还是说要选用裂解液呢？最主要的就是我不知道该怎么赔这个裂解液，使其COX活性不产生影响
不知单纯使用冰浴中超声裂解够了吗？还是说要选用裂解液呢？最主要的就是我不知道该怎么赔这个裂解液，使其COX活性不产生影响
从细胞中提取RNA的方法123
陌语哲俀2021-07-22
操作步骤：
样品处理：
a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。9. 12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。10. 将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。
注意事项：
所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。
样品处理：
a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。9. 12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。10. 将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。
注意事项：
所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。
请教请问碧云天的细胞裂解液提膜蛋白谁用过– 960问答123
仔爱鬼840122017-10-03
裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解.化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法,通常会很少使DNA 断裂.这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法.机械裂解可以更均一的裂解细胞,同化学裂解相比,机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性.机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞,但也会造成DNA 的断裂.
一、机械裂解法主要有以下两中：
1．热休克（Thermal shock）,既反复冻溶法,是一种常用的机械裂解方式比,通常由冷冻和解冻两部分组成（freezing and thawing）,.原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎.冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行,解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和,但是很有效,有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率.
2．超声波处理（Ultrasonication）既利用超声加热的方法,把细胞破碎.但这种处理会导致DNA 的断裂,所以加热不宜过剧烈,要设定好超声时间和间隙时间,一般超声时间不超过5秒,间隙时间最好大于超声时间,这些都有利于保护酶的活性.bead-beating 也是常用的机械处理方式,有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高,但通常得到的DNA片段较小.
二、 化学裂解和酶裂解法（在提核酸时联合使用）
主要是裂解液处理法,细胞裂解液的主要目的有以下几种：（1）利用去污剂破坏脂质双分子层,破裂细胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白变性使其稳定；（4）抑制蛋白酶活性.
主要根据不同的目的,裂解液的组成有所不同,主要有提取核酸和蛋白两中.在提取RNA或DNA时,我们主要是要充分裂解细胞,得到更多的核酸；如果我们的目的是蛋白,那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液,在提取蛋白后,再根据实验需要复性蛋白等.以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：
50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系）,150 mM NaCl（等渗体系）,1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂）,1 mM EDTA（变性剂和稳定剂）,5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂）,5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂）,1% Triton x-100（破坏细胞）,1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂）,0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）.7M 尿素,2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解）,蛋白酶K等.
一、机械裂解法主要有以下两中：
1．热休克（Thermal shock）,既反复冻溶法,是一种常用的机械裂解方式比,通常由冷冻和解冻两部分组成（freezing and thawing）,.原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎.冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行,解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和,但是很有效,有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率.
2．超声波处理（Ultrasonication）既利用超声加热的方法,把细胞破碎.但这种处理会导致DNA 的断裂,所以加热不宜过剧烈,要设定好超声时间和间隙时间,一般超声时间不超过5秒,间隙时间最好大于超声时间,这些都有利于保护酶的活性.bead-beating 也是常用的机械处理方式,有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高,但通常得到的DNA片段较小.
二、 化学裂解和酶裂解法（在提核酸时联合使用）
主要是裂解液处理法,细胞裂解液的主要目的有以下几种：（1）利用去污剂破坏脂质双分子层,破裂细胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白变性使其稳定；（4）抑制蛋白酶活性.
主要根据不同的目的,裂解液的组成有所不同,主要有提取核酸和蛋白两中.在提取RNA或DNA时,我们主要是要充分裂解细胞,得到更多的核酸；如果我们的目的是蛋白,那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液,在提取蛋白后,再根据实验需要复性蛋白等.以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：
50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系）,150 mM NaCl（等渗体系）,1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂）,1 mM EDTA（变性剂和稳定剂）,5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂）,5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂）,1% Triton x-100（破坏细胞）,1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂）,0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）.7M 尿素,2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解）,蛋白酶K等.
产品类别细胞凋亡检测试剂盒| 博士德生物BOSTER Biological ...123
nakuta1302021-07-28
求助!蛋白质提取物像果冻样的东东!!!正常吗?_问答详情_细胞裂解和...123
liuhl2021-08-05
各位大侠:俺在提取细胞总蛋白时，蛋白质提取出像果冻一样的东西，俺的步骤如下:
1细胞用冷PBS洗两遍，离心，去除上清；
2加50～100ul三去污细胞裂解液；
3加PMSF，AP各1ul;
4用100ulTIp头吹打数次；
5置冰上15分钟
612000rpm,15min,4度
7取上清。这时，上清呈黏液状，用枪头吸时会将细胞碎片一起吸出。拉丝度很长，测蛋白浓度显示有，各位，这是怎么回事？做WB会影响结果吗？这种蛋白质在保存过程中会容易降解吗?
有的资料上显示第四步，不是用Tip头吹打，而是将EP管在桌上猛敲击几下，这个方法我也试过，但是结果蛋白浓度很低，没有出现上述现象，这是怎么回事呀?
1细胞用冷PBS洗两遍，离心，去除上清；
2加50～100ul三去污细胞裂解液；
3加PMSF，AP各1ul;
4用100ulTIp头吹打数次；
5置冰上15分钟
612000rpm,15min,4度
7取上清。这时，上清呈黏液状，用枪头吸时会将细胞碎片一起吸出。拉丝度很长，测蛋白浓度显示有，各位，这是怎么回事？做WB会影响结果吗？这种蛋白质在保存过程中会容易降解吗?
有的资料上显示第四步，不是用Tip头吹打，而是将EP管在桌上猛敲击几下，这个方法我也试过，但是结果蛋白浓度很低，没有出现上述现象，这是怎么回事呀?
非放射性荧光TRAP法对端粒酶活性的检测与定量123
memory09132021-08-03
一、细胞裂解的准备
(1)1×107细胞重悬,其来源可为新鲜样品或贮存于-80℃1mol冰冻清洗缓冲液中
的无DMSO的样品,冰冻缓冲液包括10mMHEPES(pH7.5),1.5mMMgCl2,10mMKCl,
1mM二硫苏糖醇(DTT),然后离心(16000rpm、4℃、1min)。
(2)重悬细胞团于100ul冰冻裂解缓冲液,其包含10mMTris-HCl(pH7.5),1mMMgCl2,1mMEGTA,0.1mM苯甲基磺酰氟(DMSF),5mMB2巯基乙醇,0.5%CHAPs(Pierce)和10%甘油。
(3)冰育30分,然后在超速离心机中离心30分钟。
(4)去上清,液氮速冻沉淀,裂解细胞于-80℃保存。
二、扩增
(1)在微量管中冻干0.1ug荧光标记的cx反转引物,蜡封(5′CCCTTACCCTTACCC
TTACCCTTA3′)。
(2)于蜡界之上加50ulTRAP反应物,包括Tris-Cl(pH8.3)20mM,1.5mMMgCl2,
63mMKCl,0.005%,TWeen20,1mMEGTA,50mM三磷酸脱氧核苷,0.1ug荧光标记
TS前导引物(5′AATCCGTCGAGCAGAGTT3′),1ugT4基因32蛋白,牛血清白蛋白0.1mg/ml,2UTaqNDA聚合酶(Takara,shyzou)和5ugCHAPs细胞提取液。荧光标记TS引物可由市场购得。扩增前5ug提取物与1ugRNA酶37℃水浴20分钟,为了端粒酶活性的标准化,运用体内端粒酶活性标准(TTAS):TS重叠引物和CX重叠引物(TS:5′AATCCGTCGAGCAGAGTTGTGAATGAGGCCTTC3′及CX:5′CCCTTACCCTTACCCTTACCCTTATAGGCGCTCAATGTA3′)TS(18bp)和CX(24bp)序列为普通型,下划线标出的为成肌素序列(每个15bp)。成肌素CDNA通过这些引物扩
增产生了150bp的产物,它可用与ITAS扩增端粒酶梯度相同的TS引物和CX引物进行
再扩增。每一项测定用25attogram以显现I-TAS,它并不干扰TRAP测量。
(3)置于22℃10分钟,作为TS引物由端粒酶介导的延伸。90℃热灭活反应物90秒。
(4)PCR扩增,条件94℃30S,50℃30S,72℃1.5min;共27循环。
三、分析
(1)制备8%的变性胶(longRanger,ATBiochem)含6M尿素。
(2)加电泳缓冲液(1×TBE)于电泳槽。
(3)上样缓冲液与产物各1ul混合后上样,上样缓冲液含90%甲酰胺和10%蓝葡聚
糖(Bluedertian)。
(4)95℃预发性4分钟,速冷,上样,运用100bp,150bp,200bp大小荧光标记物。
(5)测序
(6)测序结果由FiagmuntManager程序自动分析,每一荧光峰根据大小、高度、面积定
量。因为过量扩增的产物会产生不可信的面积值,一部分PCR产物应在蒸馏水稀释后再分析
(1)1×107细胞重悬,其来源可为新鲜样品或贮存于-80℃1mol冰冻清洗缓冲液中
的无DMSO的样品,冰冻缓冲液包括10mMHEPES(pH7.5),1.5mMMgCl2,10mMKCl,
1mM二硫苏糖醇(DTT),然后离心(16000rpm、4℃、1min)。
(2)重悬细胞团于100ul冰冻裂解缓冲液,其包含10mMTris-HCl(pH7.5),1mMMgCl2,1mMEGTA,0.1mM苯甲基磺酰氟(DMSF),5mMB2巯基乙醇,0.5%CHAPs(Pierce)和10%甘油。
(3)冰育30分,然后在超速离心机中离心30分钟。
(4)去上清,液氮速冻沉淀,裂解细胞于-80℃保存。
二、扩增
(1)在微量管中冻干0.1ug荧光标记的cx反转引物,蜡封(5′CCCTTACCCTTACCC
TTACCCTTA3′)。
(2)于蜡界之上加50ulTRAP反应物,包括Tris-Cl(pH8.3)20mM,1.5mMMgCl2,
63mMKCl,0.005%,TWeen20,1mMEGTA,50mM三磷酸脱氧核苷,0.1ug荧光标记
TS前导引物(5′AATCCGTCGAGCAGAGTT3′),1ugT4基因32蛋白,牛血清白蛋白0.1mg/ml,2UTaqNDA聚合酶(Takara,shyzou)和5ugCHAPs细胞提取液。荧光标记TS引物可由市场购得。扩增前5ug提取物与1ugRNA酶37℃水浴20分钟,为了端粒酶活性的标准化,运用体内端粒酶活性标准(TTAS):TS重叠引物和CX重叠引物(TS:5′AATCCGTCGAGCAGAGTTGTGAATGAGGCCTTC3′及CX:5′CCCTTACCCTTACCCTTACCCTTATAGGCGCTCAATGTA3′)TS(18bp)和CX(24bp)序列为普通型,下划线标出的为成肌素序列(每个15bp)。成肌素CDNA通过这些引物扩
增产生了150bp的产物,它可用与ITAS扩增端粒酶梯度相同的TS引物和CX引物进行
再扩增。每一项测定用25attogram以显现I-TAS,它并不干扰TRAP测量。
(3)置于22℃10分钟,作为TS引物由端粒酶介导的延伸。90℃热灭活反应物90秒。
(4)PCR扩增,条件94℃30S,50℃30S,72℃1.5min;共27循环。
三、分析
(1)制备8%的变性胶(longRanger,ATBiochem)含6M尿素。
(2)加电泳缓冲液(1×TBE)于电泳槽。
(3)上样缓冲液与产物各1ul混合后上样,上样缓冲液含90%甲酰胺和10%蓝葡聚
糖(Bluedertian)。
(4)95℃预发性4分钟,速冷,上样,运用100bp,150bp,200bp大小荧光标记物。
(5)测序
(6)测序结果由FiagmuntManager程序自动分析,每一荧光峰根据大小、高度、面积定
量。因为过量扩增的产物会产生不可信的面积值,一部分PCR产物应在蒸馏水稀释后再分析
细胞裂解液的配制123
__蔷衣°24902017-10-03
【1】可以把裂解液用量调整为50－100微升。
【2】加入裂解液后可以加用超声破碎细胞。
【3】提完细胞的器具可以在显微镜下看一下，剩余的细胞还多不多。如果还多，说明细胞提取的不彻底，还要改进方法，争取提取的细胞彻底一些。
（仅供参考）
【2】加入裂解液后可以加用超声破碎细胞。
【3】提完细胞的器具可以在显微镜下看一下，剩余的细胞还多不多。如果还多，说明细胞提取的不彻底，还要改进方法，争取提取的细胞彻底一些。
（仅供参考）
RNA提取的流毒非浅的经典误区（RNA提取的实践指南） RNA提取 ...123
2017-10-03
有多大，会不会引起基因突变，甚是惶恐，求解答
细胞总蛋白提取方法123
coollanlan2021-08-04
最近将长满的100毫升的细胞培养瓶的细胞进行总蛋白的提取，每次只加了100微升的三去污溶液，最后测的溶度还是比较低，5微升里最多只有十几微克的总蛋白。不知道大家的经验是什么？如何提高细胞总蛋白的浓度？
(推荐)细胞组织裂解(提蛋白)方法123
小小V冣6932017-10-03
蛋白在细胞内，需要把细胞裂解才能提出
加多了细胞裂解液是否有补救措施 实验方法123
天堂夜丶騩綄2017-10-03
裂解细胞用的溶液；适合目的蛋白的溶液，例如PBS，tris盐溶液
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