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Caltag/A-431 (human epidermoid carcinoma) nuclear extract lysate (denatured)/50 ug/L015V3
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Caltag/A-431 (human epidermoid carcinoma) nuclear extract lysate (denatured)/50 ug/L015V3
品牌 / 
Caltag
货号 / 
L015V3
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A-431 (human epidermoid carcinoma) nuclear extract lysate (denatured)

Product Code:
L015V3
Pack Size:
50 ug
Form:
Western Blot
Target Species:
Human
Product Type:
Lysate
Supplier:
Abnova Corporation
Product Category:
Cell Fractions & Lysates > Nuclear Extract
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Product Code:
L015V3
Price (50 ug):
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可以用温和的红细胞裂解液,和外周血一样,裂解液不会对单个核细胞有影响,HY StemCell是一家为干细胞研究服务的知名公司,有各种生化试剂供客户选择,可以查询各大品牌红细胞裂解液,供参考
蛋白在细胞内,需要把细胞裂解才能提出
细胞总蛋白提取方法123
coollanlan2021-08-04
最近将长满的100毫升的细胞培养瓶的细胞进行总蛋白的提取,每次只加了100微升的三去污溶液,最后测的溶度还是比较低,5微升里最多只有十几微克的总蛋白。不知道大家的经验是什么?如何提高细胞总蛋白的浓度?
裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解.化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法,通常会很少使DNA 断裂.这两种方法(包括SDS 和溶菌酶处理等)提取纯化DNA中常用的方法.机械裂解可以更均一的裂解细胞,同化学裂解相比,机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性.机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞,但也会造成DNA 的断裂.
一、机械裂解法主要有以下两中:
1.热休克(Thermal shock),既反复冻溶法,是一种常用的机械裂解方式比,通常由冷冻和解冻两部分组成(freezing and thawing),.原理:由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎.冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行,解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和,但是很有效,有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率.
2.超声波处理(Ultrasonication)既利用超声加热的方法,把细胞破碎.但这种处理会导致DNA 的断裂,所以加热不宜过剧烈,要设定好超声时间和间隙时间,一般超声时间不超过5秒,间隙时间最好大于超声时间,这些都有利于保护酶的活性.bead-beating 也是常用的机械处理方式,有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高,但通常得到的DNA片段较小.
二、 化学裂解和酶裂解法(在提核酸时联合使用)
主要是裂解液处理法,细胞裂解液的主要目的有以下几种:(1)利用去污剂破坏脂质双分子层,破裂细胞;(2)溶解蛋白;(3)蛋白变性使其稳定;(4)抑制蛋白酶活性.
主要根据不同的目的,裂解液的组成有所不同,主要有提取核酸和蛋白两中.在提取RNA或DNA时,我们主要是要充分裂解细胞,得到更多的核酸;如果我们的目的是蛋白,那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液,在提取蛋白后,再根据实验需要复性蛋白等.以下是细胞裂解中常用试剂和其作用:
50 mM Tris-HCl pH 7.4(缓冲体系),150 mM NaCl(等渗体系),1 mM PMSF (强大的蛋白酶抑制剂),1 mM EDTA(变性剂和稳定剂),5 μg/ml Aprotinin(蛋白酶抑制剂),5 μg/ml Leupeptin(蛋白酶抑制剂),1% Triton x-100(破坏细胞),1% Sodium deoxycholate(中度变性剂和蛋白溶解剂),0.1% SDS(强变性剂和蛋白溶解剂).7M 尿素,2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解),蛋白酶K等.
干细胞是重要细胞,其能够自我更新或者分化成多种类型的细胞,这种能力由细胞信号传导和转录调控所控制,因此转录调控在细胞识别和功能实现过程中起决定作用。干细胞逐步成熟成为终末分化细胞,需要由重要的转录因子适时的激活级联转录程序,多种转录因子和靶基因广泛报告与干细胞的自我更新和多能性有关,包括EGR1、OCT4、FOXD3、FOXO、Nanog、SOX2、SOX18、ETS、GLI、KLF4、MEF2、Myc、RNUX1、Pax6、TCF/LEF和GATA。分析这些TF的活性可以为干细胞的研究和应用提供有价值的线索。美国Signosis公司开发一种干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂,以同时分析哺乳动物样本中16种干细胞特异的TF,该方法可以用1000—10000个细胞的全细胞裂解物进行。
A.优点:
多重分析——一次分析可以检测16种干细胞相关的TF
定量比较——二个样本的差异可以定量分析和比较
步骤简单——探针温育、柱分离、板杂交和HRP检测
无需贵重仪器——无需如Luminex那样的贵重仪器
B.原理:
干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂用于同时检测多种TF活性。该技术中,基于TFDNA结合位点的一致性序列,制备一系列生物素标记的探针。当探针混合物与核提取物一起温育时,每个探针寻找相应的TF,形成TF/探针复合物,通过柱离心纯化可以很容易与游离探针分开。结合的探针从混合物中分离出来,通过板杂交分析。板孔中预包被上与探针互补的特异序列,捕获的DNA探针进一步用链酶亲和素-HRP检测,化学发光检测仪测定发光强度(RLUs)。
细胞裂解液的配制123
__蔷衣°24902017-10-03
【1】可以把裂解液用量调整为50-100微升。

【2】加入裂解液后可以加用超声破碎细胞。

【3】提完细胞的器具可以在显微镜下看一下,剩余的细胞还多不多。如果还多,说明细胞提取的不彻底,还要改进方法,争取提取的细胞彻底一些。
(仅供参考)
DNA提取加细胞裂解液的量是固定的吗?有的书上说加50μl,有的加500μl,不知为什么,请指教!谢谢!
蛋白提取时使用蛋白裂解液将细胞裂解,然后离心分为上清液和下层沉淀,如果你说的是这个上清液的话,那么这个上清液是细胞中的可溶性蛋白,一般包括细胞质的蛋白和细胞核的可溶性蛋白,下层沉淀主要是细胞碎片以及不可溶的蛋白以及染色质之类的。
如果要培养,用淋巴细胞分离液。如果只是用于检测,用红细胞裂解液
细胞癌变后,细胞膜表面的糖蛋白会减少。甲胎蛋白是一种,糖蛋白。这种长蛋白主要来自于胎儿的干细胞,常人体内极少,而且甲胎蛋白一般是用来检测肝癌的。 当肝细胞发生癌变时,恢复了产生这种蛋白质的功能,而且随着病情恶化它在血清中的含量会急剧增加,甲胎蛋白就成了诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标,所以要如果说细胞癌变后,产生甲胎蛋白并不是非常的严谨。因为它只是作为肝癌的一个指标罢了。而抗原的表示范围比较大。所以这里是使用的抗原而不是甲胎蛋白。
提取DNA时裂解液的配制方法应该是怎样的
用SDS裂解,RNA酶降解,
在过柱,后洗脱
有多大,会不会引起基因突变,甚是惶恐,求解答
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