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Haematologic Technologies/Bovine glu-Plasminogen/BCPG-1130/1 mg
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Haematologic Technologies/Bovine glu-Plasminogen/BCPG-1130/1 mg
品牌 / 
HTI
货号 / 
BCPG-1130
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4000-520-616
Formulation50%glycerol/water(v/v)
Storage-20°C
Purity>95%bySDS-PAGE
ActivityDetermination< 100 ppm plasmin activity
ShelfLife(properlystored)12months
HumanPlasminogen
Thedomainstructureofhumanplasminogenisrepresentedwhere:K1-K5=the5kringledomains,B-CHAIN=catalyticdomainofplasmin,andthearrowsindicatethesitesofproteolyticcleavagebyplasmin,elastase,andplasminogenactivators(PA"S).

SampleGelInformation:

Lane1HumanGlu-Plasminogen(HCPG-0130)Reduced
Lane2HumanGlu-PlasminogenCHOI(HCPG-0131)Reduced
Lane3HumanGlu-PlasminogenCHOII(HCPG-0132)Reduced
Lane4HumanLys-Plasminogen(HCPG-0133)Reduced
Marker:SeeBlue+2_MOPS
Lane5HumanGlu-Plasminogen(HCPG-0130)Non-Reduced
Lane6HumanGlu-PlasminogenCHOI(HCPG-0131)Non-Red
Lane7HumanGlu-PlasminogenCHOII(HCPG-0132)Non-Red
Lane8HumanLys-Plasminogen(HCPG-0133)Non-Reduced
GelNovex4-12%Bis-Tris
Load1µgperlane
BufferMOPS
StandardSeeBluePlus2;Myosin(191kDa),PhosphorylaseB(97kDa),BSA(64kDa),GlutamicDehydrogenase(51kDa),AlcoholDehydrogenase(39kDa),CarbonicAnhydrase(28kDa),MyoglobinRed(19kDa),Lysozyme(14kDa)

Overview:

Plasminogenisasinglechainglycoproteinzymogenwhichissynthesizedintheliverandcirculatesinplasmaataconcentrationofapproximately2.4µM(1,2).Theplasminogenmoleculecontains790aminoacids,24disulfidebridges,nofreesulfhydrylsand5regionsofinternalsequencehomology,knownaskringles,betweenLys77andArg560.Thesefivetriple-looped,threedisulfidebridged,kringleregionsarehomologoustothekringledomainsint-PA,u-PAandprothrombin.Plasminogencontainsonehighaffinity(Kd=9x10-6M)andfourlowaffinity(Kd=5x10-3M)lysinebindingsites.Thehighaffinitybindingsiteresideswithinthefirstkringleregionofplasminogen.Theinteractionofplasminogenwithfibrinandα2-antiplasminismediatedbytheselysinebindingsites.Nativeglu-plasminogen(Mr=88,000)isreADIlyconvertedtoLys-77-plasminogen(Mr=83,000)byplasminhydrolysisoftheLys76-Lys77peptidebond.ElastasecatalyzedcleavageoftheVal441-Val442peptidebondofglu-plasminogenyieldsafunctionallyactivezymogentermedVal-442plasminogenormini-plasminogen.

Theconversionofplasminogentoplasminoccursbyavarietyofmechanisms,butallresultinhydrolysisoftheArg560-Val561peptidebondofplasminogen,yieldingtwochainswhichremaincovalentlyassociatedbyadisulfidebond.

Nativeglu-plasminogenispreparedfromfreshfrozenhumanplasmabyamodificationoftheprocedureofCastellino(3),utilizinggelfiltrationandaffinitychromatography.Thetwocarbohydratevariantsofglu-plasminogen(CHOIandCHOII)areisolatedbygradientelutionfromlysine-Sepharoseusingthelysineanalog,e-aminocaproicacid(3).Theplasminogenissuppliedin50%(vol/vol)glycerol/H2Oforstorageat-20oC.PurityisdeterminedbySDS-PAGEanalysis.

Properties:

LocalizationPlasma
Plasmaconcentration2.4µM(human)(4)
ModeofactionZymogen;precursortotheserineproteaseplasmin
Molecularweight88,000(gluplasminogen)(5)
83,000(lys-plasminogen)(5)
38,000(val-plasminogen)(6)
Extinctioncoefficient
E
1%
1cm,280nm
=17.0(5)
Isoelectricpoint6.2(glu-plasminogen)(1)
6.7-8.3(lys-plasminogen)(1)
Structuresinglechain,24intrachaindisulfidebridges,5kringleregions.
PercentcarbohydrateApproximately2%
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10ml 三去污裂解液配方如下:50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0): 0.07882g 150 mmol/L NaCl: 0.08775g0.2 g/L叠氮钠: 0.002g 1 g/LSDS 0.01g100 mg/L Aprotin 0.001g10 g/L NP-40 0.1g 5 g/L去氧 查看更多>
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各位大侠:俺在提取细胞总蛋白时,蛋白质提取出像果冻一样的东西,俺的步骤如下:
1细胞用冷PBS洗两遍,离心,去除上清;
2加50~100ul三去污细胞裂解液;
3加PMSF,AP各1ul;
4用100ulTIp头吹打数次;
5置冰上15分钟
612000rpm,15min,4度
7取上清。这时,上清呈黏液状,用枪头吸时会将细胞碎片一起吸出。拉丝度很长,测蛋白浓度显示有,各位,这是怎么回事?做WB会影响结果吗?这种蛋白质在保存过程中会容易降解吗?
有的资料上显示第四步,不是用Tip头吹打,而是将EP管在桌上猛敲击几下,这个方法我也试过,但是结果蛋白浓度很低,没有出现上述现象,这是怎么回事呀?
聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]是存在于真核细胞中催化聚ADP核糖化的细胞核酶,其参与的聚ADP核糖化是真核细胞中蛋白质翻译后的重要修饰方式之一。PARP-1在DNA修复和细胞凋亡中发挥至关重要的作用。在凋亡过程中,PARP-1由116kDa被切割成85kDa,催化NAD-依赖的多聚(ADP-核糖)(PAR)往各自质膜以及核蛋白上的聚合。总而言之,PARP在DNA损伤修复与细胞凋亡中发挥着重要作用。
**捷向您推荐美国Trevigen的一款通用PARP分析试剂盒检测试剂盒。该试剂盒是检测凋亡前与凋亡中细胞提取液中PARP活性的理想方案,操作简单,重复性高。其通过检测96孔板上生物素标记的多聚ADP核糖聚合到邻近组蛋白的反应,从而确定已知的或可能的PARP抑制剂。试剂盒中的依托泊苷(Etoposide)是拓扑异构酶Ⅱ抑制剂,在拓扑异构酶Ⅱ切割完DNA后能够稳定该酶。在试剂盒中,依托泊苷作为凋亡诱导的对照参与检测。
通量PARP/凋亡分析试剂盒可广泛应用于1)检测原代、肿瘤等细胞的PARP活性;2)检测凋亡前后的PARP活性;3)利用细胞裂解液筛选PARP抑制剂。
试剂盒特色比色法/化学发光法,无放射性输出。96well,高通量检测。极大地节省了分析时间,提高了使用效率。高敏感性。能够检测到500个细胞中低至0.1mU的PARP。检测范围广。0.1-10mU。样本用量少。仅仅需要10-100ng的提取物。检测时间短。仅需要3h即可完成检测。

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蛋白提取时使用蛋白裂解液将细胞裂解,然后离心分为上清液和下层沉淀,如果你说的是这个上清液的话,那么这个上清液是细胞中的可溶性蛋白,一般包括细胞质的蛋白和细胞核的可溶性蛋白,下层沉淀主要是细胞碎片以及不可溶的蛋白以及染色质之类的。
裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解.化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法,通常会很少使DNA 断裂.这两种方法(包括SDS 和溶菌酶处理等)提取纯化DNA中常用的方法.机械裂解可以更均一的裂解细胞,同化学裂解相比,机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性.机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞,但也会造成DNA 的断裂.
一、机械裂解法主要有以下两中:
1.热休克(Thermal shock),既反复冻溶法,是一种常用的机械裂解方式比,通常由冷冻和解冻两部分组成(freezing and thawing),.原理:由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎.冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行,解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和,但是很有效,有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率.
2.超声波处理(Ultrasonication)既利用超声加热的方法,把细胞破碎.但这种处理会导致DNA 的断裂,所以加热不宜过剧烈,要设定好超声时间和间隙时间,一般超声时间不超过5秒,间隙时间最好大于超声时间,这些都有利于保护酶的活性.bead-beating 也是常用的机械处理方式,有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高,但通常得到的DNA片段较小.
二、 化学裂解和酶裂解法(在提核酸时联合使用)
主要是裂解液处理法,细胞裂解液的主要目的有以下几种:(1)利用去污剂破坏脂质双分子层,破裂细胞;(2)溶解蛋白;(3)蛋白变性使其稳定;(4)抑制蛋白酶活性.
主要根据不同的目的,裂解液的组成有所不同,主要有提取核酸和蛋白两中.在提取RNA或DNA时,我们主要是要充分裂解细胞,得到更多的核酸;如果我们的目的是蛋白,那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液,在提取蛋白后,再根据实验需要复性蛋白等.以下是细胞裂解中常用试剂和其作用:
50 mM Tris-HCl pH 7.4(缓冲体系),150 mM NaCl(等渗体系),1 mM PMSF (强大的蛋白酶抑制剂),1 mM EDTA(变性剂和稳定剂),5 μg/ml Aprotinin(蛋白酶抑制剂),5 μg/ml Leupeptin(蛋白酶抑制剂),1% Triton x-100(破坏细胞),1% Sodium deoxycholate(中度变性剂和蛋白溶解剂),0.1% SDS(强变性剂和蛋白溶解剂).7M 尿素,2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解),蛋白酶K等.
一、细胞凋亡检测系统和试剂
Caspase-GloTM3/7检测
Apo-ONETM均质Caspase-3/7检测
CaspACETMFITC-VAD-FMK原位标准物
CaspACETM检测系统,比色法
CaspACETM检测系统,荧光法
末端脱氧核苷酸转移酶
DeadEndTM比色法TUNEL系统
DeadEndTM荧光法TUNEL系统
DeathCheckTM检测系统
Caspase抑制物Z-VAD-FMK
Caspase抑制物Ac-DEVD-CHO

二、与细胞凋亡有关的抗体
抗pS473Akt抗体
抗ACTIVE®Caspase-3抗体
抗细胞色素C单克隆抗体
抗PARPp85片段抗体
请教各位高手一下,我收集细胞后,因为不能马上做实验,就把细胞加了Trizol保存在-80度,我想请教一下,是先在室温放5分钟后再冻存还是直接放置于-80度,用时再取出,放置室温5分钟(说明书上说加了Trizol后一定要置于室温5分钟).很菜的问题,请各位不要见笑.谢谢!
磷酸酶活性测定123
greenfish19742021-08-02
我是新手,请问如何检测的活性。请各位大侠指导,谢了
我的邮箱:maoyuanqing@citiz.net
细胞总蛋白提取方法123
coollanlan2021-08-04
最近将长满的100毫升的细胞培养瓶的细胞进行总蛋白的提取,每次只加了100微升的三去污溶液,最后测的溶度还是比较低,5微升里最多只有十几微克的总蛋白。不知道大家的经验是什么?如何提高细胞总蛋白的浓度?
提取DNA时裂解液的配制方法应该是怎样的
用SDS裂解,RNA酶降解,
在过柱,后洗脱
我是提细胞总蛋白的,6cmdish,我现在是用250ul裂解液的量,可是测出来的蛋白浓度比较低(1ug/ul),提细胞前在显微镜下看了细胞长满了,是不是我的裂解液量加的太多了,应该加多少量比较适合?请教。
如果要培养,用淋巴细胞分离液。如果只是用于检测,用红细胞裂解液