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abfrontier/DNA Polymerase I (E. coli )/DNA Polymerase I(E. coli), 500 U/2130B
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abfrontier/DNA Polymerase I (E. coli )/DNA Polymerase I(E. coli), 500 U/2130B
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2130BDNA Polymerase I(E. coli) 2,500 U로그인후 확인가능 합니다.
2130ADNA Polymerase I(E. coli), 500 U로그인후 확인가능 합니다.

제품특징

□ 농도 3~6 U/㎕
□ 형상
50 mMPotassium Phosphate (pH6.5)
10 mM2-Mercaptoethanol
50%Glycerol
□ 보존 -20℃
□ 첨부 Buffer 조성 (10×)
500 mMTris-HCl (pH7.8)
100 mMMgCl2
1 mMDTT
250 ㎍/mlBSA*

*BSA가 침전될 우려가 있으므로 동결· 융해는 가능한 피한다.

□ 기원

Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Pol I

□ 제품설명

본 효소는 주형, 프라이머(DNA, RNA 모두 가능) 존재하에서 dNTP를 기질로 하여, 주형에 상보적인 DNA를 5’→ 3’방향으로 합성한다. 이중가닥 특이적 5’→3’exonuclease 활성 및 단일가닥 특이적 3’→ 5’exonuclease 활성도 가진다.

□ 활성의 정의

Poly d(A-T)합성 DNA를 주형/프라이머로 하여 37℃, pH7.4에서, 30분 동안 모든 10 nmol nucleotide를 산불용성 침전물로 바꾸는 효소 활성을 1 U으로 한다.

□ 활성측정용 반응액조성
67 mMPotassium phosphate (pH7.4)
6.7 mMMgCl2
1 mM2-Mercaptoethanol
20 μM기질 DNA
33 μMdATP
33 μM[3H]dTTP
□ 순도

- SDS 전기영동에서 90% 이상의 순도를 나타낸다.- 10 U의 본 효소와 1㎍의 closed circular (RF I)фX174 DNA를 37℃, 1시간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 일어나지

않는다.

□ 사용상의 주의

- 상기 보존조건에서 6개월 이상 안정하고 희석에 의한 활성저하는 일어나지 않으나, 심하게 교반하면 실활할 수도 있다.- Endonuclease를 포함하고 있지 않으므로 단독으로는 거의 nick translation 활성은 나타내지 않는다.- DNA와 친화성이 강하기 때문에 과량을 사용하면 aggregation이 일어나 반응이 충분히 진행되지 않는 경우가 있다.

□ 용도

- DNase I (TaKaRa Code 2210)과의 병용에 의한 nick translation- Okayama-Berg법에 있어서 second strand의 합성반응 (DNA polymerase I 0.3 ㎍은 약 2.5 U에 상당한다).

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Western Blot(免疫印迹法)主要包括以下4个基本步骤:n 样品制备n 电泳分离n 蛋白的膜转移n 免疫杂交与显色――蛋白检测溶液和试剂n 1X 磷酸盐缓冲液(PBS)n Modified RIPA buffer Tris-HCl: 50 mM, pH 7.4 ; NP-40: 1% ;Na-deoxycho 查看更多>
Phosphate esters are widely distributed in any organism. Nucleic acids, metabolic intermediates like glucose-6-phosphate, energy-rich substrates (AMP, creatine 查看更多>
丹麦研究小组在自然通讯杂志上报道,他们开发了一类新的人工蛋白质。从长远来看,结果可能会导致更好地治疗癌症和糖尿病。大自然创造了许多蛋白质,它们有多种形式,在我们体内有很多功能。他们是身体的主体,也是最难的工作积木。例如,它们中的一些为我们的肌肉提供力量; 而其他人确保我们的单元格收到消息。尽管存在这种自然多样性,但在过去20年左右的时间里,人们对创造人工蛋白产生了巨大的科学兴趣,部分受到药物开发机会的刺激。现在,来自丹麦南部大学,哥本哈根大学和奥胡斯大学的丹麦研究人员团队报告说,他们开 查看更多>
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请教,天然菌种发酵的蛋白和重组技术发酵的蛋白在质量检测指标上有何区别?谢谢!
我想做个目的蛋白的单抗,通过基因克隆、表达、纯化来得到目的蛋白,但是因为用的是原核表达系统,缺少翻译后的正常修饰,所以肯定与天然蛋白有区别,这样的话,作出来的单抗就不一定能够识别组织中的天然蛋白了,有什么方法可以减少他们的差异?也就是尽量让单抗可以识别天然蛋白。谢谢!
gleason分级_123
隐幽羽2018-02-04
如题,最好有详解
我现在在纯化天然蛋白时第一步层析使用的是苯基的疏水层析柱,样品和缓冲液的硫酸铵浓度为0.5M,PH在5.6左右,发现蛋白能结合到柱子上,但是在洗脱时采用梯度洗脱洗不下来,最后用水洗也洗不下来,后来我用少量的0.15M的氢氧化钠洗出一高峰,请问,这是因为我的蛋白结合的太牢吗?该怎样解决呢?
再就是疏水层析和PH值有这么大的关系吗?
谢谢!

本人目前需从电鳗放电器官中提取乙酰胆碱受体蛋白,提纯需要的步骤和电鳗器官都可以提供,有没有提供外包提纯服务的公司或者实验室。

天然蛋白质中不存在的氨基酸是。。。鸟氨酸羟脯氨酸瓜氨酸哪个啊?好象不同版本答案不一样啊
人体能产生20种
算上其他生物24种
大概是记不太清了
小弟用E.coli表达的一蛋白(一天然毒素的N段)制备了11株单抗,但没有一株能中和天然蛋白,这可急死我了.再拖下去就不能毕业了.导师天天催我建立诊断方法呢.大家给我出出主意!
http://www.medicalnewstoday.com/medicalnews.php?newsid=58498

NaturalProteinStopsDeadlyHumanBrainCancerInMice


ScientistsfromJohnsHopkinsandfromtheUniversityofMilanhaveeffectivelyproventhattheycaninhibitlethalhumanbraincancersinmiceusingaproteinthatselectivelyinducespositivechangesintheactivityofcellsthatbehavelikecancerstemcells.ThereportispublishedinNature.

Themostcommontypeofbraincancer-glioblastoma-ismarkedbythepresenceofthesestem-cell-likebraincells,which,insteadoftriggeringthereplacementofdamagedcells,formcancertissue.Stemcells,unlikeallothercellsinthebody,arecapableofformingalmostanykindofcellwhentheright"signals"triggertheirdevelopment.

Fortheirtreatmentexperiment,theresearchersreliedonaclassofproteins,bonemorphogenicproteins,thatcauseneuralstem-cell-likeclusterstolosetheirstemcellproperties,whichinturnstopstheirABIlitytodivide.

Firsttheypretreatedhumanglioblastomacellswithbonemorphogenicprotein4(BMP4),theninjectedthesetreatedcellsintomousebrains.Inmiceinjectedwithcellsthatwerenotpretreated,large,invasivecancersgrew.InthemicewithBMP4-treatedcells,nocancersgrewatall.Threetofourmonthsafterinjection,allmicethatgotuntreatedcellsdied,andnearlyallmicewithBMP4-treatedcellswerealive.

Next,thescientistsdeliveredslow-releaseBMP4-containing"beads"directlyintomousebrainswithimplantedglioblastomacells.Micethatgotemptybeadsdevelopedlargemalignanttumorsanddied.MicewithBMP4beadssurvivedmuchlonger,and80percentsurvivedfourmonthsaftercancercellimplants.

"OurideaistotreatpatientswithBMP4orsomethinglikeitrightaftersurgerytoremoveglioblastomainhopesofpreventingtheregrowthofthecancerandimprovingsurvivaltime,"saysAlessandroOlivi,M.D.,directoroftheDivisionofNeurosurgicalOncologyatHopkinsandacontributortothestudy.

OlivisaysclinicalstudiesusingBMP4couldbeginwithinayearand,ifsuccessful,drugtherapiescouldbeavailabletothepublicwithinthreetofouryears.

"ThiswasproofoftheideathatBMPscouldstopglioblastomabydepletingthestem-cell-likepopulationthatfeedsit,"saysHenryBrem,M.D.,chairmanoftheDepartmentofNeurosurgeryatHopkinsandacollaboratorinthestudy."Thisopensexcitingdoorstofutureresearchintotreatmentsandtherapiesforsuchadevastatingdisease."
常见的都是天然蛋白质,人工合成的蛋白质也是要遵从自然界的规律的,元素不是说添加就添加的,人工合成的蛋白质也离不开天然蛋白质的这些组成元素。蛋白质主要是由C(碳)、H(氢)、O(氧)、N(氮)组成,一般蛋白质可能还会含有P、S、Fe(铁)、Zn(锌)、Cu(铜)、B(硼)、Mn(锰)、I(碘)、Mo(钼)等 。
最近要用原核系统表达几条基因的成熟蛋白,N末端没有Met,而且最好能够表达出可溶的有活性的蛋白。
我本想用pET带有信号肽的载体表达到周质空间,但发现在信号肽切除的位置克隆进去我的基因的话还是会引入多余的氨基酸
请教各位有经验的高手,哪些载体或者方法我可以尝试去做?
多谢了!
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