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动物模型是现代生命科学研究的重要工具,特别是基因工程小鼠和大鼠,在基因功能研究、人类生理病理机制研究及新药研发中起着不可替代的作用。近几年来,制备动物模型的基因敲除技术主要包括传统ES基因打靶、TALEN、CRISPR/Cas9, 近期又有一项新的基因敲除技术——TetraOne... 查看更多>
该试剂盒由一套独特的基于阳离子脂类的载体系统1-3组成,可用于将生物学上有活性的蛋白质,肽段或抗体导入活细胞。试剂/蛋白质络合物粘在带负电荷细胞表面并通过直接与细胞膜融合或胞吞作用及随后的与内涵体融合,将捕获蛋白质释放入细胞质中而进入细胞4。形成的络合物是非共价的,因此不会干扰蛋白质的生物学活性。试剂可以用于研究细胞内信号传导,细胞周期调控,细胞凋亡,肿瘤发生和转录调节。使用Thermo Scientific蛋白质转染试剂成功导入细胞的分子包括β-半乳糖苷酶,荧光抗体,绿色荧光蛋白(GFP),高和低分子量 查看更多>
恩晶生物siRNA/shRNA/RNAi研究工具产品 一、siRNA/shRNA/RNAi系列套装产品       siRNA/shRNA/RNAi系列套装产品覆盖所有人、小鼠和大鼠的基因,保证基因沉默。       现举行购买siRNA/shRNA/RNAi系列套装产品送价值为900元的0.3ml高效配套转染试剂。二、恩晶生物的转染试剂       EnoGeneFec™转染试剂以最高的转染效率、使用方便、细胞毒性小、生物可降解为... 查看更多>
后来居上---美国SignaGen转染试剂SignaGen生物技术公司于2006年成立于美国马里兰州。公司的创始人系几个来自美国国立卫生研究院(National Institutes of Health, NIH)的致力于生物医学研究的科学家。自SignaGen生物技术公司建立的第一天起, 他们就一直致力于成为美国基因转导及基因治疗领域的先驱. 目前SignaGen公司已经成功地开发出三大系列分别用于体内和体外的DNA和RNA转染试剂,... 查看更多>
广州辉骏生物科技有限公司在发布的慢病毒shRNA干扰技术服务供应信息,浏览与慢病毒shRNA干扰技术服务相关的产品或在搜索更多与慢病毒shRNA干扰技术服务相关的内容。 查看更多>
上海博舜生物科技有限公司在发布的TALEN基因敲除大鼠定制供应信息,浏览与TALEN基因敲除大鼠定制相关的产品或在搜索更多与TALEN基因敲除大鼠定制相关的内容。 查看更多>
2017-07-30
据国外媒体报道,半个多世纪以来,科学家一直梦想着利用“自私的基因”对所有物种进行基因编辑。这种基因可谓自然界的一大怪胎,它竟能绕开正常的遗传法则、强行把自己遗传给下一代。几年前,伴随着 CRISPR-Cas9 基因编辑技术的问世,使这一带有科幻小说色彩的理念变成了触手可及的现实,名为“基因驱动技术”(gene drive)。但除了媒体的炒作和对滥用该技术的恐惧,科学家如今对基因驱动技术的实际作用提出了怀疑。基因驱动技术是一种分子技术,可 查看更多>
研究人员描述了一种能克服ELISA试剂盒问题的新方法。这种被称为siPools的低成本方法,能够简单而精确的生成含有多达60种siRNA的混合物,将脱靶效应降低到检出限以下。据介绍,siPools的关键一步是,设计针对同一个基因的几十种siRNA,并将这些序列结合到一个DNA模板上,不同siRNA序列之间以短序列相连。这些模板经过转录、退火和酶切就能生成成分明确的siRNA混合物。(延伸阅读:如何优化你的RNAi)为了验证siPools 查看更多>
8月23日,《核酸研究》(Nucleic Acids Research)在线发表了生化与细胞所王恩多研究组的*新研究成果“利用亮氨酸tRNA基因敲除菌株研究酵母亮氨酸tRNA的体内功能”。氨基酰-tRNA合成酶(aaRS)催化tRNA的氨基酰化反应,为蛋白质合成提供原料。合成正确的氨基酰-tRNA对保证蛋白质合成的质量控制至关重要。aaRS催化反应的专一性不仅涉及到aaRS,也与tRNA有关。目前,通常采用T7 ... 查看更多>
华科鉴联基因科技(北京)有限公司在发布的CRISPR/Cas9基因敲除细胞系供应信息,浏览与CRISPR/Cas9基因敲除细胞系相关的产品或在搜索更多与CRISPR/Cas9基因敲除细胞系相关的内容。 查看更多>
罗氏X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP的转染试剂、 罗氏公司新推出了两款高性能的DNA转染试剂,为其细胞分析产品线再添新军。这两款名为X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP的转染试剂沿用了X-tremeGENE siRNA转染试剂的前缀,应该与大名鼎鼎的Fugene 6不属于一类。据罗氏介绍,这两个产品是多组分的独特试剂,并非脂质体。它们能够提供高的转染效率、重复性和细胞存活率。这两款新产品都... 查看更多>
针对广泛的细胞类型被引用最多的通用试剂 针对质粒传递的最有效的试剂 强效和低细胞毒性 针对siRNA/miRNA传送最有效的试剂 高效的gene knock-down 针对所有细胞株的高效电穿孔  Lipofectamine® 2000Learn more >  Lipofectamine® LTXLearn more >  Lipofectamine® RNAiMAXLearn more >  Neon® Trans... 查看更多>
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Argonaute (AGO):一类庞大的蛋白质家族,是组成RISCs复合物的主要成员。AGO蛋白质主要包含两个结构域:PAZ和PIWI两个结构域,但具体功能尚不清楚。的研究表明,PAZ结构
域结合到siRNA 的3’的二核苷酸突出端;一些AGO蛋白质的PIWI结构域赋予slicer以内切酶的活性。PAZ和PIWI两个结构域,对于siRNA和目标mRNA相互作用,从而导致目标mRNA的切割或者翻译抑制过程,是必不可少的。同时,不同的AGO蛋白质有着不同的生物学功能。例如,在人当中,AGO2“筹划”了RISCs对于目标mRNA的切割过程;而AGO1 和AGO3则不具备这个功能。
Core RISC:是介导目标mRNA切割过程或者翻译抑制的最小的RNA-蛋白质复合物。在人和果蝇身上发现的分子量少于200kDa的RISCs可能就是core RISC的重要代表。AGO蛋白质和Core RISC密切相关。
Dicer (DCR):是RNAase Ⅲ家族中的一员,主要切割dsRNA或者茎环结构的RNA前体成为小RNAs分子。对应地,我们将这种小RNAs分子命名为siRNAs和miRNA。Dicer有着较多的结构域,最先在果蝇中发现,并且在不同的生物体上表现出很高的保守性。
Holo RISC:是在果蝇中发现的有着RISC活性的最大的RNA-蛋白质复合物(80S)。Holo RISC的生物学活性牵涉到几乎所有的RISC的成员,RLC成员,和一些其他通路上的蛋白质分子。Holo RISC的存在,表明了RISC组装不是孤立的,同时还是一个有序的过程。以RISC为中心的RNAi和miRNA通路与一些其他的通路密切联系,很可能借此调控生物体的生长发育过程。
Microprocessor:一种核内的复合物,主要由Drosha和Pasha两者组成,在miRNA的生物合成中促使原始的miRNA成为miRNA前体。
MicroRNA (miRNA):是含有茎环结构的miRNA前体,经过Dicer加工之后的一类非编码的小RNA分子(~21-23个核苷酸)。MiRNA,以及miRISCs(RNA-蛋白质复合物)在动物和植物中广泛表达。因之具有破坏目标特异性基因的转录产物或者诱导翻译抑制的功能,miRNA被认为在调控发育过程中有重要作用。
RISC loading complex (RLC):是一种促使RISC形成的复合物。RLC有方向性地调节小RNA双螺旋,为以后的RISC组装作好铺垫。siRISC loading complexes (siRLCs)在果蝇中研究最多。有研究者认为在果蝇中的siRLCs包含DCR2-R2D2异型二聚体和siRNA双螺旋;R2D2部分是非对称性的感受器,为RISC组装调整好siRNA的方向。miRISC loading complexes (miRLCs)的研究尚未报导,因为它的过程更为复杂,而且体外研究miRLCs的方法还没有建立。
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing (RITS):是一种组织染色质变型的复合物。RITS复合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白质,通过结合到异染色质的基因池上来促使异染色质上基因的沉默。
RNA-induced silencing complex (RISC):一种RNA-蛋白质复合物,通过与目标mRNA完全或者部分的互补配对来实施切割或者翻译抑制功能。SiRNA组装siRISC,miRNA组装miRISC。RISCs(无论siRISC还是miRISC)包括两种类型:切割型和不切割型。研究表明,RISC当中的AGO蛋白质决定了RISC是切割型的还是不切割型的。
Slicer:在切割型RISC中的内切酶的另外一种表述方法。
Small interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。向左转|向右转
欲研究某基因的功能,只知道现在很多干扰实验是在细胞水平体外进行实验的.不清楚目前能否应用RNA干扰在小鼠或其它动物上进行,这种设计是否可行.
  请有经验的战友指点,若可以最好能提供几篇应用动物进行RNA干扰研究的文章.
  非常感谢!
CRISPR(clustered,regularlyinterspaced,shortpalindromicrepeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。
在细菌及古细菌中,CRISPR系统共分成3 类,其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白(Cas蛋白)共同发挥作用,而Ⅱ类系统 。

将EntransterTM-invivo与AmbioninvivosiRNA(作用于凝血因子VII)和阴性siRNA通过尾静脉注射成年小鼠,2天后,取动物肝脏检测。在mRNA水平和蛋白水平观察干扰效果。见上图,图中最左侧组为对照组注射阴性siRNA为3mg/kg,后边3组为每kg动物注射阳性siRNA量分别为1mg/kg,2mg/kg和3mg/kg情况。

根据推荐用量注射EntransterTM-invivo和siRNA(作用于LaminA/C)和阴性siRNA到成年小鼠。注射后2天收集相应的组织,分离RNA,用qRT-PCR分析LaminA/C基因的表达水平。图4为尾静脉结果,图5为各器官分别局部注射结果。

英格恩生物体内转染试剂,3天可完成动物体内转染实验,让动物干扰,基因敲除实验变得简单、快速有效!


都可以,关键看你的实验操作摸索啦。
当然,如果考虑成本这块的话,义翘sinofection可以考虑哦~
基因敲除小鼠,D小鼠,敲除了FADD基因,转入了neo基因,这两个基因在NCBI有好多个,哪个大神能告诉我是哪个
Overview of CRISPR/Cas9

http://www.addgene.org/crispr/guide/
RNA干扰的机理及特点123
你大爷FqJi2021-07-26
RNAi抑制转座子活性
两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关
① 发现蠕虫mut-7 基因参与RNAi 并且与转座子的转座抑制有关;
② 在果蝇中, 参与RNAi 的RNA 解螺旋酶Spindle-E 的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失, 同时提高了反转录转座子活性。 RNAi抵御病毒感染
在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现, sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性 。 RNAi参与异染色质的形成和维持
Hall 等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi 组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核;Vople 等在敲除裂殖酵母( S. pombe) 的RNAi 途径基因( 如Argonaute 、Dicer 、RDRP) 时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi 途径的参与下, 加工成si RNA,si RNA 募集异染色质蛋白1( HP1) , 然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。 RNAi参与机体的发育调控及生理代谢
RNAi 只抑制转录后的基因, 所以RNAi 在生物体发育学研究中具有优势。Chuang 等用RNAi 技术进一步证实了AG、CLV3 、AP1 、PAN 等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi 过程中形成的RISC 复合物可根据不同情况分别利用si RNA 或stRNA 行使不同的功能, 但最终均导致特定基因沉默。向左转|向右转
新手上路,请大家多多关照,我是一名研究生,现在正在做RNA干扰方面的实验,可是却不知道RNA干扰的具体步骤,需要什么试剂,在网上查了半天也查不到,所以到这里来求助各位前辈,希望各位以前做过或者现在正在做这方面研究的前辈们能给指点一下迷津,在此谢谢了。

目前大多数的细胞转染实验会用到脂质体类的转染试剂,但是脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。而这些作用就是脂质体造成细胞毒性的根本原因。这会对相关研究数据产生严重的干扰,甚至影响研究的结论。

由于脂质类转染试剂对细胞的毒性是由其脂质特性决定的,目前众多的研究者和生物公司将新一代转染试剂的开发聚焦在非脂质体的聚合物上,并已有一些优秀的试剂产品上市,如Engreen公司的Entranster系列转染试剂,为纳米材料,细胞毒性低,转染效率高,已逐渐取代脂质体试剂,成为各大实验室的新宠。

各位同仁大家好,最近在尝试利用CRISPR/cas9技术敲除基因,苦于手里头资源有限,只有lentiCRISPRv2以及相应的包装体系,没有pSpCas9(BB)-2A-Puro(PX459)V2.0,无奈公司货期较久,想立刻开展实验,不知哪位同仁有此质粒并愿意交换,不甚感激。


谁才是CRISPR技术的所有者?123
75█基佬天降█2021-09-06
近年来,CRISPR/Cas9风暴席卷全球。这项基因组编辑技术在短短几年内迅速应用于世界各地的实验室,并催生了上千篇文章的发表。然而,麻省理工学院(MIT)的《Technology Review》杂志提出了一个问题,谁才是CRISPR技术的所有者? 立即索取更多资料 生物通 www.ebiotrade.com
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近年来,CRISPR/Cas9风暴席卷全球。这项基因组编辑技术在短短几年内迅速应用于世界各地的实验室,并催生了上千篇文章的发表。然而,麻省理工学院(MIT)的《Technology Review》杂志提出了一个问题,谁才是CRISPR技术的所有者?生物通 www.ebiotrade.com
一个月前,“科学突破奖”(Breakthrough Prize)揭晓。加州大学伯克利分校的Jennifer Doudna和德国亥姆霍兹传染研究中心的Emmanuelle Charpentier因在CRISPR技术方面的重要贡献而获奖,且每人获得了300万美元的奖金。
这一领域的另一位风云人物,Broad研究院的张锋(Feng Zhang)虽然没有获得科学突破奖,但在今年4月获得了CRISPR/Cas9的首个专利。他的研究中心控制着这一技术的每个重要商业应用。生物通 www.ebiotrade.com
那么问题来了,这个备受瞩目的奖项和专利为何会落入不同人的手中?究竟是谁发明了它?“这一领域的知识产权相当复杂,”CRISPR Therapeutics公司的CEO Rodger Novak谈道。Emmanuelle Charpentier是这家公司的创始人之一。
Tech Review的记者Antonio Regalado指出,张锋与Doudna共同创立了Editas Medicine公司,它获得了Broad的技术授权。不过,在张锋成功申请专利之后,Doudna就与该公司断绝了关系。她将她的知识产权(专利申请中)授予了另一家竞争性的公司Intellia Therapeutics。然而,让事情更加复杂的是,Charpentier又将她在同一专利申请中的权利出售给了CRISPR Therapeutics。生物通 www.ebiotrade.com
此外,围绕这一技术的科学信用,那也是错综复杂。2012年夏天,Doudna、Charpentier及她们的团队发表了一篇文章,证明CRISPR/Cas9系统可以作为一种可编程的DNA编辑工具。半年后,张锋博士以及哈佛大学的George Church发表文章称它可应用于人类细胞,不久后,Doudna也发表了类似的结果。
但是,张锋表示他对Doudna和Charpentier的工作知之甚少。为了支持他的专利申请,他提交了实验室笔记本的照片,表示他在2012年年初就开始了这方面的研究,早于Doudna和Charpentier。生物通 www.ebiotrade.com
Charpentier表示:“我可以说的是,我和Jennifer Doudna是在我的实验室中开展研究。这里的一切都很夸张,因为这是一项人们很容易学会的技术。事情发生得太快了。”
Regalado在文中写道:“目前还没有CRISPR药物。但是如果CRISPR真的如科学家想象得那么重要,对这一基本技术的商业控制将价值数十亿美元。”也许,这场专利之战才刚刚开始。(生物通 薄荷)