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Abnova/NP recombinant monoclonal antibody, clone B1-8/1kit/RAB00064
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Abnova/NP recombinant monoclonal antibody, clone B1-8/1kit/RAB00064
品牌 / 
Abnova
货号 / 
RAB00064
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  • Specification
  • Product Description:
  • Recombinant mouse monoclonal antibody raised against 4-hydroxy-3-nitrophenyl acetyl (NP) hapten.
  • Immunogen:
  • Original antibody is raised against hapten-protein conjugated NP12-chicken gammaglobulin.
  • Form:
  • Liquid
  • Purification:
  • Protein A affinity purification
  • Isotype:
  • IgG2a, lambda
  • Recommend Usage:
  • Flow Cytometry (1 ug/mL)Negative ControlWestern Blot (1 ug/mL)The optimal working dilution should be determined by the end user.
  • Storage Buffer:
  • In PBS, pH 7.2 (0.02% Proclin 300).
  • Storage Instruction:
  • Store at 4°C. For long term storage store at -20°C.Aliquot to avoid repeated freezing and thawing.
  • Antibody Species:
  • Mouse
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真核生物中,从个体的生长、发育、衰老、死亡,到组织的分化、凋亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答,本质上都涉及基因的选择性表达。高等生物大约有30 000个不同的基因,但在生物体内任意细胞中只有10%的基因得以表达,而这些基因的表达是按事件和空间顺序有序地进行着,这种表达的方式即 查看更多>
“2017(第五届)分子诊断产业高峰论坛”将于2017年6月19日-20日在杭州三立开元大酒店召开。2016年,国家精准医疗计划和个体化医学的发展要求持续推动了国内分子诊断技术的进步,进一步开拓新兴技术在临床的应用。液态活检作为精准医疗新技术,既有极高的科研价值,又具备助力推进精准医疗临床实践的巨大潜能,可用于癌症早期筛查、诊断、监控、治疗方案指导和疗效评估及产前诊断、器官移植诊断等领域。伴随诊断应用的发展,液态... 查看更多>
中国分子诊断技术大会旨在为扩大交流,搭建起研究与应用间畅通的桥梁,探讨逐步建立完善的分子诊断技术质量控制体系和标准,为学术界、医务界、产业界搭建起分子诊断技术研究与应用的桥梁,推动我国分子诊断技术紧跟国际前沿,进一步向前发展。... 查看更多>
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科佰生物参加2017第五届分子诊断产业高峰论坛 来源:科佰生物 日期:2017年6月22日 10:45 六月的杭州,碧荷连天,红莲映日,别有一番风味。6月19日,第五届分子诊断产业高峰论坛在这座秀丽古城举办,为西子湖畔增添了一丝别样的色彩。就像六月的红莲一样,如今的分子诊断产业正值火红时期,近几年来,分子诊断市场正以超过20%的增速飞速增长,未来随着医疗改革的持续推进等因素,分子诊断产业... 查看更多>
分子诊断是精准医疗的技术基础,也是IVD增速最快的子行业,且国内外技术差异最小。分子诊断细分技术多,目前PCR最为成熟且应用最广,基因测序相对最新。而随着贝瑞和康和华大基因的先后上市,投资市场对基因领域怀有极大希望和热情。我国分子诊断技术发展现状分子诊断主要是应用分子生物学方法检测生物体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术。由于分子诊断可以从基因层次进行检测,因此检测灵敏度和准确性的优势较为明显,可在感染初期识别病毒或者提早... 查看更多>
ViiA™ 7 实时定量PCR系统(Applied Biosystems) 2010年6月,ABI的实时定量PCR家族再添新成员——ViiA™ 7 实时定量PCR系统。ViiA™ 7实时定量PCR... 查看更多>
  结核杆菌可以导致全身性疾病,特别是在发展中国家,其发病率较高,危害性极大.近几年结核杆菌的变异性较大,对抗痨药物的耐药性增加,从而使结核病的发病大幅度增高.虽然传统的涂片抗酸染色、细菌培养以及胸片检查对大部分结核能作出正确的诊断,但对某些病人亦可造成误诊或漏诊;动物接 查看更多>
数字PCR是PCR领域最激动人心的创新之一,这一技术的诞生让绝对定量的梦想成为现实。与传统PCR不同,数字PCR是一种新的核酸检测和定量方法,直接检测目标序列的拷贝数。它不依赖于标准曲线和参照样本,因此比传统PCR更具灵敏度、特异性和精确性。 查看更多>
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有人知道交叉引物核酸恒温扩增(CPA)的扩增原理吗?希望高手不吝赐教,最好是图文并茂的那种,谢谢了先!
参考体系
酶切体系(参考):
质粒17ul
buffer2ul
酶1ul
----------37度,过夜。

酶切位点
在质粒上,所选的两个酶的酶切位点不可以靠的太近,如6bp
建议载体质粒不要用双酶切,用两次单酶切之后切胶回收.另外建议加多以下两个个步骤:
1.PCR产物的酶切片断做TA克隆,之后再酶切回收,与载体相连.
2.目的片段与载体连接之后建议先转化DH5α这些容易转化的菌株.然后筛选到的阳性克隆测序之后,提质粒,用质粒转化BL21,转化率很高.质粒不一定要新鲜提取,我的质粒放在-20度冻了大半年,作为载体完全没问题,只要确定不降解.

酶切的量、小提的质粒浓度和纯度
浓度:
根据我的实验,OD值0.5左右吧,不一定很准确。260:280通常是1.8左右。3ml菌过夜,进行小提,并没有对OD限定.小提的效果好不好主要决定于你的溶液I,II,III的质量以及你的操作手法,
特别是加溶液II时最为关键。现在有很多试剂盒既便宜效果又好,条件允许的话可以考虑购买。
琼脂糖电泳目测,不一定测OD,连接比例更重要.
质粒表达载体不用测序的,通常都是跑电泳看一下质量,然后再根据图谱选择适当的酶,看能不能够切开,如果能够切开,基本上就可以采用了。
纯度:
酶切对质粒的纯度要求高,如果蛋白和RNA去的不干净会影响酶切;
我们用于酶切的质粒的ratio值一般在1.8左右。
酶量;
在量上最好不超过酶的酶切能力,一般酶都为10U/ul,就是说酶切体系里加
1ul的酶可以在合适的温度下,1小时内消化10ugDNA,但在实际操作当中
一般酶都是过量的,而且延长了酶的作用时间,比如作用6小时。
因为酶切产物用于连接,所以我们酶切时质粒的用量尽量多,用20ul的体系
时可以如下加样,我们也有用50ul的体系切过。

回收目的片段与阳标一起进行酶切:
PCR后,电泳回收目的片断(比如玻璃奶或者一次性回收柱回收),再进行酶切。除非产物非常特异,直接酶切PCR产物效果有时不是很好,还有一般PCR体系里过量得dNTPs会影响酶切效果。酶切后,可以用标准得乙醇沉淀法沉淀酶切产物,获得高纯度得酶切产物,也即是你的黏性目断片断供后边得试验。而DNA的纯度对酶切效果是有很大的影响的。而酶切时应加个阳标(如含相应酶切位点的质粒载体)来确定酶和酶切体系是不是work的。如果这两步没问题,你的酶切肯定能顺利的。如果有阳标一起来切,容易找出问题的所在。

酶切不下
酶切这一步,本来问题不大,你严格按说明书上的要求进行就行了,包括酶量,酶切体系以及DNA的量也要按要求加入。而DNA的纯度和浓度是有必要测定的,最好OD260/280要接近2.0。DNA的量过大或是纯度太低都会影响酶切效果。万一如果无法充分酶切,但有所需要的片段,就可以根据Markers的位置回收所需片段。
因为基因组大部分是甲基化的,酶切不下来的原因一可能是内切酶活性低,或者是基因组杂质含量较高,或者盐离子浓度太高(不同的酶有不同的盐浓度).还有就是基因组酶切酶的量要求比较多,大概1ugDNA/10u酶,如果不行还可以加大量,酶量不能超过酶切体系的1/10,浓度过高里面的甘油会影响酶的活性。接头5-端是去磷酸化的,这样就可以避免接头自连,pcr结果就会有东西出来。

连接酶反应温度
空掉开低一点,一般16度连接2-3小时;
放进4度冰箱中,连接过夜,16小时

多片段连接:
将三个片断放在一起连的,效果的确不好.还是应该一个一个地连接.

连接比例
我用T载体连接PCR产物,请问片段和载体的摩尔比怎么选择连接效率好?根据什么因素来调节?有没有经验值?
一般片段:载体=3~8:1。根据片段的大小、连接时间、温度、感受态细胞等因素来调节。经验值就是3~8:1。4度连接过夜,用新鲜制备的感受态细胞,一般可以得到很好的克隆效率。
补充一句:如果PCR产物片段比较大(>1kb)的话一般用3:1的比例,如果比较小就几百bp的话用>3:1的比例连接效率能高一些。3-10:1一般没问题.
建议仔细参看Teasy的说明书

接头处理
接头的处理和连接这一步其实是挺头疼的。建议先制备和接头两粘端连接的线性质粒分子。因为这对于你接头是否完成了磷酸化和退火处理提供了一个评价体系。你接头处理完,并通过评价,你就可以放心用了。退火时的处理一般要使用专门的annealingbuffer,否则效果不好。而对于粘端连接来说,应该问题不大,唯一担心的是能进行连接的片段太少了,影响下面的PCR扩增,所以酶切这一步是很关键的。
最后一步是高保真PCR,首先建议用Taq酶进行扩增,然后再用Pfu酶扩增,因为后者效率比较低。其实你用Taq酶如果扩出来,测序经blast/n后,如果有突变,你也完全可以根据正确的序列重新设计引物将之调出来。

注意感受态

如果还是不行,建议检查一下感受态菌的质量。
我的感觉是感受态很重要,你可以转化连接产物的同时用纯质粒转化进行感受态活性的验证,后者取1ul转化,10ul涂板,好的感受态一般要长50个菌落以上。其次是连接体系,目的片断与载体的摩尔比为3-10:1,除此,连接酶也很重要,最好不要使用储存太久的酶,建议你下次做的时候用别人的酶试一下。
转化要用空质粒作对照,保证感受态没问题,细菌一般长12到16小时就形成可见的菌落,转化后的菌落一般比为转化的菌落小一些。
怎么知道自己要买哪个内参
恒温PCR一种新式恒温核酸扩增方法,其原理是采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶,反应全过程恒定63℃,不到1h的时间里进行核酸的指数级扩增,其扩增效率可达到109个~ 1010个拷贝数量级。在扩增反应中产生茎-环结构,保证引物与其杂交启动新一轮核酸合成。配合恒温荧光检测设备可实时监测扩增情况。该扩增法具有简单、快速、准确、易检测、适用面广等优点。迪澳转基因快速检测箱,配置了高通量恒温荧光检测仪DEAOU-308C、转基因快速检测试剂、植物基因组核酸提取试剂及必备的实验耗材。为客户提供了精确高效、功能全面、经济实用的转基因检测手段。
荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。|||原理不同:荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光。反应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通pcr必须电泳。结果:荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的。|||这个还真不大清楚|||貌似前者是定量,后者属于半定量。|||简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量,而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。前些年有人讲过普通PCR后,通过电泳也可以进行定量,其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。|||引物设计是sybr定量PCR法的最大难点,机会好的话,设计一对引物就能得到很好的结果,机会不好的话7、8对引物也出不来,我就遇到过这样的问题,我在prime5.0上设计了8对引物,符合实验要求的一对也没有,我把退火温度提高到了68度也没能把引物二聚体搞定,后来我想通了,可能我这对引物把其它序列扩增出来了,而且扩增效率很高(我一个同学设计了十几对才找到一对好用的)。记住primer5.0设计出来的100%好的引物,到了定量PCR上不一定好使,这是我最大的经验。定量pCR的引物对匹配度要求不高,我现在使用的引物就有几个碱基不匹配,但实验结果很好。有一个办法可以帮助我们绕过引物设计这道坎,直接到罗氏网站上专区上找引物。罗氏网站在线有一个引物设计软件,你只要找好你目的基因的种属,输入你的片段序列就可以得到你要的引物。这个软件有很大的好处,他会自动地把你的种属序列背景扣除,最大限度地去除引物二聚体产生的可以。
话说LAMP特异性强,LAMP使用4对引物与靶序列上的6个特定区域结合,即使一个碱基的差异,LAMP也能够区分相应的靶序列进行扩增,因此,比普通PCR具有更好的特异性。
这里所说的一个碱基的差异该怎么检测?如何理解?
食品药品监管总局办公厅关于恒温核酸扩增检测仪等22个产品分类界定的通知食药监办械管〔2015〕75号2015年06月11日发布各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局:
  为适应医疗器械监督管理工作的需要,总局组织有关单位和专家对恒温核酸扩增检测仪等22个产品的管理类别进行了界定。现通知如下:
  一、作为Ⅲ类医疗器械管理的产品(1个)
  恒温核酸扩增检测仪:由检测系统、加热模块、温控系统、触摸屏和随机软件组成。基于荧光检测的恒温核酸扩增检测技术,定性检测样本中的目标核酸有无扩增。分类编码:6840。
  
  二、作为Ⅱ类医疗器械管理的产品(7个)
  (一)免疫磁微粒捕获仪:由蠕动泵、管路、永磁铁及其他必要辅助器具组成。用于磁微粒免疫分析中捕获磁微粒复合物,是临床免疫磁微粒检验分析的前处理设备。分类编码:6841。
  (二)精液采集器:由精液收集套、润滑剂、精液采集管、采集漏斗、袖珍剪组成。产品以无菌型式提供。临床上用于收集成年男性精液,为评价男性生育能力提供完整标本。分类编码:6841。
  (三)干式血细胞微量样品测试管:由测试管体、封管器、浮子、肝素钠抗凝剂和荧光吖啶橙染料组成。用于收集末梢血样和静脉血样,临床上与干式血细胞计数仪配合使用,对样本染色、抗凝和分类。分类编码:6841。
  (四)胎盘生长因子检测试剂盒(时间分辨荧光法):由校准品、铕标示踪抗体、分析缓冲液、生物素抗体、链霉亲和素微孔板条、条形码标签等组成。用于定量测定孕妇血清中的胎盘生长因子。临床上用于辅助筛查妊娠妇女孕早期唐氏综合症风险。分类编码:6840。
  (五)脂联素检测试剂盒(免疫比浊法):由试剂1(缓冲液)和试剂2(乳胶抗体试剂)组成。用于体外定量检测人血清或血浆中脂联素浓度。临床上用于评估2型糖尿病和心血管疾病的风险。分类编码:6840。
  (六)小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒(直接清除法):由试剂(含过氧化氢酶、胆固醇氧化酶、胆固醇脂酶、显色剂的缓冲液)和试剂(含过氧化物酶、酶稳定剂、显色剂的缓冲液)组成。用于体外定量检测人血清中小而密低密度脂蛋白胆固醇的含量,临床上用于动脉粥样硬化的辅助诊断。分类编码:6840。
  (七)尿液游离LamBDa-轻链测定试剂盒(免疫比浊法):由定标液、试剂缓冲液和试剂(游离Lambda-轻链抗血清)组成。用于体外定量测定尿液游离Lambda-轻链浓度,临床上用于单克隆丙种球蛋白增多症的辅助诊断。分类编码:6840。
  三、作为第Ⅰ类医疗器械管理的产品(13个)
  (一)制片染色一体机:通常由离心模块、制片模块、染色模块、控制系统等功能模块组成。用于病理分析前对人体细胞或细菌样本进行制片及染色。分类编码:6841。
  (二)细胞分离制片染色一体机:通常由控制系统、过滤器、多路阀注射泵、贮液瓶、废液瓶等组成。适用于病理分析前对人体外周血或组织样本中细胞的分离、过滤、制片和染色。分类编码:6841。
  (三)试剂卡孵育器:由塑料外壳、温控模块、电器元件组成。用于特定试剂卡的孵育。分类编码:6840。
  (四)细胞过滤采集器:由软管、过滤收集病变细胞装置、抽吸装置组成。用于病理分析前对人体内脱落病变细胞的采集。分类编码:6841。
  (五)液基细胞和微生物处理、保存试剂:主要由细胞保存液、细胞裂解液、提取液、稀释液、消化酶、防腐剂等及必要的细胞承载或制片器具组成。用于临床检验分析前细胞或微生物的保存、运输、提取、分离、沉淀、固定、制片等。分类编码:6840。
  (六)病理分析前处理试剂:主要由组织固定液、组织脱水液、透明液、清洗剂等组成。用于病理分析前组织标本的固定、梯度脱水、透明、浸蜡和包埋制片。分类编码:6840。
  (七)脱蜡液:由脱蜡液、防腐液、专用水等组成。用于对样本进行染色前预处理,去除石蜡包埋组织样本上的石蜡。分类编码:6840。
  (八)触发缓冲液:由0.9%的氯化钠等渗溶液组成。与血小板功能分析仪及配套检测试剂盒配套使用,用于在检测前润湿生化活性膜。分类编码:6840。
  (九)流式细胞分析用鞘液:由含盐缓冲液和防腐剂组成。用于与流式技术相关的分析中对样本进行检测时形成鞘流,以利于仪器进行计数分析。分类编码:6840。
  (十)流式细胞分析用溶血剂:由浓度小于2%的甲醛和浓度小于15%的甘油组成。用于快速裂解人类外周血中红细胞,维持白细胞基本形态,临床上用于流式细胞仪检测前样本处理。分类编码:6840。
  (十一)抗体稀释液:由缓冲液和防腐剂组成。用于临床检验时抗血清的稀释。分类编码:6840。
  (十二)溶痰剂:由次氯酸钠、表面活性剂组成。用于抗酸染色前痰标本的均质化处理,以提高阳性检出率。分类编码:6840。
  (十三)精液液化剂:由菠萝蛋白酶和蔗糖组成。用于精液检查前促进液化迟缓的精液标本的液化、降低精液的粘稠度。分类编码:6840。
  四、不按照医疗器械管理的产品(1个)
  瓷珠菌种保存管:由表面多孔的小瓷珠、胰蛋白脉大豆肉汤、甘油和蔗糖按一定比例混合组成。用于微生物检验中菌种的保存。
  自本文件发布之日起,对于不作为医疗器械管理的,如已受理尚未完成注册审批的,食品药品监管部门应按规定不予注册,相关注册申请资料予以存档。尚在有效期内的医疗器械注册证书不得继续使用。
                            食品药品监管总局办公厅
                             2015年6月11日
定量检测包括总RNA提取和纯化、(可能还需要做mRNA提取和纯化)、RT、定量PCR
还需要反转录用的引物、定量PCR用的一对引物、荧光信号源(荧光染料或荧光标记的探针,看你用什么策略来做定量PCR)
报价要看你需要服务商提供什么服务,如果你只提供实验材料,要求服务商做以上全部工作,只检测一个指标(一个基因的表达水平变化),价格大约每个样品350-500元,多一个指标大约多90元。
一般至少做一组数据两个样品嘛,所以你按1000块一组样品预算吧。
PCR技术在食品检测中的应用123
绿萝2015的春天2018-01-24
应用很广泛,因为比荧光定量PCR的操作简单方便,无需专业人员操作,仪器的性价比也比较高,挺受食品企业的追捧,食药系统也用的不少,现在技术越来越成熟,以后的应用会越来越广
ABI7500与伯乐CFX96的对比123
刘鹏KRrj52017-10-03
伯乐的不错,实验目前用的就是这块,产品质量可以
荧光定量PCR是400什么意思
数字PCR可以绝对定量,理论上可以检测单个拷贝的突变,但是实际上如果突变分子比例太低,你可能取不到。20ng人基因组大致拷贝数是5.8E6,目前看文献报道,可以检出万分之一的突变比例,至于十万分之一,估计有点难度
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