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제품특징
[Product Details]
▶Synonyms:Dinaphtho[2,3-b:2",3"-d]thiophene-5,7,12,13(5aH, 12bH)-tetraone
▶Product Type:Chemical
[Properties]
▶Formula:C20H8O4S
▶MW:344.3
▶CAS:22200-69-7
▶ Source/Host Chemicals: Synthetic. Originally isolated from marine bacterium Serinicoccus sp. strain CNJ927.
▶Purity Chemicals:≥99% (HPLC)
▶Appearance: Yellow to orange solid.
▶Solubility:Soluble in DMSO (10mg/ml) or DMF (15mg/ml). Insoluble in water.
▶Identity:Determined by1H-NMRAND 13C-NMR.
▶InChi Key:XYWAAJHFTBPXOA-UHFFFAOYSA-N
▶Smiles:O=C1C(C(C2C3=O)C(C4=C3C=CC=C4)=O)=C(S2)C(C5=CC=CC=C51)=O
[Shipping and Handling]
▶Shipping:AMBIENT
▶Short Term Storage:+4°C
▶Long Term Storage:-20°C
▶Handling Advice:Protect from light.
Protect from light when in solution.
▶Use/Stability:Stable for at least 1 year after receipt when stored at -20°C.
Stock solutions are stable for at least 3 months when stored at -20°C.
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
及时交付： 限时必达 畅选无忧
蚂蚁淘的运营团队都是有着多年经验的成员，他们熟悉海外采购、仓储物流、报关等环节； 同时通过在线的流程监控，蚂蚁淘的进口速度比传统企业提高了50%以上， 部分产品甚至能做到7-10天到货，即蚂蚁淘的“时必达”服务。
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蚂蚁淘提供的产品在使用过程中如因产品质量问题有售后需求时， 您可通过我的订单提交您的“申请售后”， 蚂蚁淘产品顾问会第一时间为您处理， 在售后服务过程中如遇到问题也可致电蚂蚁淘客服热线：4000-520-616。
脑脊液（Cerebrospinal Fluid, CSF）是诊断中枢神经系统感染的重要标本，目前主要依赖常规生化、染色镜检、培养和血清学检测判断病原。然而这些方法有的灵敏度、特异度有限，易受抗菌药物影响，有的周期较长，临床仍有相当一部分感染的病原体（15～60% 脑膜炎和 40～70% 的脑炎）不能确定。近年来，分子检测技术突飞猛进，越来越多地应用到了病原体检测领域。它是指利用标 查看更多
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《小翊实验手账》荧光定量PCR之引物篇 荧光定量PCR是实验室中出镜率非常高的一种技术手段。它通过在PCR体系中添加荧光基团来显示DNA产物的累积情况，从而达到对PCR过程进行实时监控的目的。并且可以通过数据分析计算出起始模板量，这就是“荧光定量”中“定量”一词的来源。荧光定量PCR实验因为灵敏度高所以经常是差之毫厘谬以千里，所以在实验过程中，我们需要注意诸多细节，谨慎操作。小伙伴们看到这... 查看更多
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2021-08-04
广州市锐博生物科技有限公司在发布的高通量测序服务—扩增子测序供应信息，浏览与高通量测序服务—扩增子测序相关的产品或在搜索更多与高通量测序服务—扩增子测序相关的内容。 查看更多
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2018-03-20
北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司在发布的ABI 2720 原装进口基因扩增仪器供应信息，浏览与ABI 2720 原装进口基因扩增仪器相关的产品或在搜索更多与ABI 2720 原装进口基因扩增仪器相关的内容。 查看更多
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2018-01-05
尿液上皮细胞分离扩增试剂盒 无创 高效 简便遇到珍稀、罕见疾病样本，却没有构思好研究思路？遗传疾病家系，想深度研究疾病机理及治疗方案？尿液上皮细胞分离扩增试剂盒 + 无菌实验室 = 解决方案赛贝尿液上皮细胞分离及扩增试剂盒来源细胞无创获取，操作安全样本来源不受限，采集简便免费培训，全程技术支持试剂盒操作，成本可控赛贝生物尿液上皮细胞提取实例涵盖儿童、老人、珍稀遗传病家系。赛贝生物同时为您提供细胞重编程及细胞建系技术服务 ... 查看更多
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2017-07-23
分子诊断是指应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术。分子诊断是预测诊断的主要方法，既可以进行个体遗传病的诊断，也可以进行产前诊断。分子诊断主要是指编码与疾病相关的各种结构蛋白、酶、抗原抗体、免疫活性分子基因的检测。... 查看更多
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2018-10-17
近日，明德生物自主研发的EB病毒核酸检测试剂盒（荧光定量PCR法）顺利通过国家食品药品监督管理局审核，获得注册证。注册证号为国械注准20183400411。EB病毒又称人类疱疹病毒4型，主要通过唾液传播，6岁以下多为不典型感染，15-30岁发病，与传染性单核细胞增多症、鼻咽癌以及儿童淋巴瘤等的发生密切相关。目前尚无有效的疫苗可预防其感染。EB病毒感染症状与感冒类似，但抗病毒治疗效果较差，多以对症治疗为主。EB病毒的检测目前分为两种：病... 查看更多
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2018-09-10
多重巢式实时荧光定量PCR呼吸道病毒及甲型流感病毒分型检测试剂是由纽罗西敏生物科技代理或销售的品牌的试剂，产品来源于。纽罗西敏生物科技是中国最权威的多重巢式实时荧光定量PCR呼吸道病毒及甲型流感病毒分型检测试剂试剂销售服务商之一，在杭州等地方销售多重巢式实时荧光定量PCR呼吸道病毒及甲型流感病毒分型检测试剂试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业多重巢式实时荧光定量PCR呼吸道病毒及甲型流感病毒分型检测试剂仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的多重巢式实时荧光定量PCR呼吸道病毒及甲型流感病毒分型检测试 查看更多
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2018-08-03
南京诺唯赞生物科技有限公司在发布的【正品直销，售后保障】(Vazyme染料法荧光定量PCR预混液）AceQ qPCR SYBR® Green Master Mix 供应信息，浏览与【正品直销，售后保障】(Vazyme染料法荧光定量PCR预混液）AceQ qPCR SYBR® Green Master Mix 相关的产品或在搜索更多与【正品直销，售后保障】(Vazyme染料法荧光定量PCR预混液）AceQ qPCR SYBR® Green Master Mix 相关的内容。 查看更多
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2018-11-26
据农业农村部新闻办室消息，从8月初我国首次出现非洲猪瘟疫情开始，全国已经有十多个省份发现过疫情，11月17日最新发布，上海市金山区排查出非洲猪瘟疫情：50头猪发病11头... 查看更多
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2018-12-26
One of responses to increased blood pressure is cardiac hypertrophy through increased size of ventricular myocardial cells leading to increased thickness of th 查看更多
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2018-07-16
【荧光定量PCR】代做实验|技术服务，上海通善生物科技有限公司提供实验技术服务，【荧光定量PCR】代做实验|技术服务，详询业务员。争做一流服务，共建一流产品，同创一流企业。通善生物微信公众号：bioleaf扫一扫直接询价。通善生物提供以下技术服务。具体实验事项请咨询业务员，021-33779006 61806666【荧光定量PCR】代做实验|技术服务，上海通善生物科技有限公司提供实验技术服务，【荧光定量PCR】代做实验|技术服务，详询业 查看更多
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数字PCR介绍_核酸123
猫猫7m_3852021-07-27
在定量PCR时，我们常常纠结一个问题，究竟是相对定量还是绝对定量呢？如今，你无需纠结了，因为数字PCR（digital PCR）来了。尽管这两种技术有些类似，都是估计起始样品中的核酸量，但它们有一个重要的区别。定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量，而数字PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量。因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域：拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究（如等位基因不平衡表达）、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。向左转|向右转
...与大家分享 酶切连接 核酸基因技术讨论版123
yyangyingy2021-07-24
参考体系
酶切体系（参考）：
质粒17ul
buffer2ul
酶1ul
－－－－－－－－－－37度，过夜。
酶切位点
在质粒上，所选的两个酶的酶切位点不可以靠的太近，如6bp
建议载体质粒不要用双酶切,用两次单酶切之后切胶回收.另外建议加多以下两个个步骤:
1.PCR产物的酶切片断做TA克隆,之后再酶切回收,与载体相连.
2.目的片段与载体连接之后建议先转化DH5α这些容易转化的菌株.然后筛选到的阳性克隆测序之后,提质粒,用质粒转化BL21,转化率很高.质粒不一定要新鲜提取,我的质粒放在-20度冻了大半年,作为载体完全没问题,只要确定不降解.
酶切的量、小提的质粒浓度和纯度
浓度:
根据我的实验，OD值0.5左右吧，不一定很准确。260：280通常是1.8左右。3ml菌过夜，进行小提,并没有对OD限定.小提的效果好不好主要决定于你的溶液I，II,III的质量以及你的操作手法，
特别是加溶液II时最为关键。现在有很多试剂盒既便宜效果又好，条件允许的话可以考虑购买。
琼脂糖电泳目测,不一定测OD,连接比例更重要.
质粒表达载体不用测序的，通常都是跑电泳看一下质量，然后再根据图谱选择适当的酶，看能不能够切开，如果能够切开，基本上就可以采用了。
纯度:
酶切对质粒的纯度要求高，如果蛋白和RNA去的不干净会影响酶切；
我们用于酶切的质粒的ratio值一般在1.8左右。
酶量；
在量上最好不超过酶的酶切能力，一般酶都为10U/ul,就是说酶切体系里加
1ul的酶可以在合适的温度下，1小时内消化10ugDNA，但在实际操作当中
一般酶都是过量的，而且延长了酶的作用时间，比如作用6小时。
因为酶切产物用于连接，所以我们酶切时质粒的用量尽量多，用20ul的体系
时可以如下加样，我们也有用50ul的体系切过。
回收目的片段与阳标一起进行酶切:
PCR后，电泳回收目的片断（比如玻璃奶或者一次性回收柱回收），再进行酶切。除非产物非常特异，直接酶切PCR产物效果有时不是很好，还有一般PCR体系里过量得dNTPs会影响酶切效果。酶切后，可以用标准得乙醇沉淀法沉淀酶切产物，获得高纯度得酶切产物，也即是你的黏性目断片断供后边得试验。而DNA的纯度对酶切效果是有很大的影响的。而酶切时应加个阳标(如含相应酶切位点的质粒载体)来确定酶和酶切体系是不是work的。如果这两步没问题，你的酶切肯定能顺利的。如果有阳标一起来切，容易找出问题的所在。
酶切不下
酶切这一步，本来问题不大，你严格按说明书上的要求进行就行了，包括酶量，酶切体系以及DNA的量也要按要求加入。而DNA的纯度和浓度是有必要测定的，最好OD260/280要接近2.0。DNA的量过大或是纯度太低都会影响酶切效果。万一如果无法充分酶切，但有所需要的片段，就可以根据Markers的位置回收所需片段。
因为基因组大部分是甲基化的，酶切不下来的原因一可能是内切酶活性低，或者是基因组杂质含量较高，或者盐离子浓度太高(不同的酶有不同的盐浓度).还有就是基因组酶切酶的量要求比较多，大概1ugDNA/10u酶，如果不行还可以加大量，酶量不能超过酶切体系的1/10，浓度过高里面的甘油会影响酶的活性。接头5-端是去磷酸化的，这样就可以避免接头自连，pcr结果就会有东西出来。
连接酶反应温度
空掉开低一点,一般16度连接2-3小时;
放进4度冰箱中，连接过夜，16小时
多片段连接:
将三个片断放在一起连的,效果的确不好.还是应该一个一个地连接.
连接比例
我用T载体连接PCR产物，请问片段和载体的摩尔比怎么选择连接效率好？根据什么因素来调节？有没有经验值？
一般片段：载体＝3～8：1。根据片段的大小、连接时间、温度、感受态细胞等因素来调节。经验值就是3～8：1。4度连接过夜，用新鲜制备的感受态细胞，一般可以得到很好的克隆效率。
补充一句：如果PCR产物片段比较大(>1kb)的话一般用3：1的比例，如果比较小就几百bp的话用>3：1的比例连接效率能高一些。3-10：1一般没问题.
建议仔细参看Teasy的说明书
接头处理
接头的处理和连接这一步其实是挺头疼的。建议先制备和接头两粘端连接的线性质粒分子。因为这对于你接头是否完成了磷酸化和退火处理提供了一个评价体系。你接头处理完，并通过评价，你就可以放心用了。退火时的处理一般要使用专门的annealingbuffer，否则效果不好。而对于粘端连接来说，应该问题不大，唯一担心的是能进行连接的片段太少了，影响下面的PCR扩增，所以酶切这一步是很关键的。
最后一步是高保真PCR，首先建议用Taq酶进行扩增，然后再用Pfu酶扩增，因为后者效率比较低。其实你用Taq酶如果扩出来，测序经blast/n后，如果有突变，你也完全可以根据正确的序列重新设计引物将之调出来。
注意感受态
如果还是不行，建议检查一下感受态菌的质量。
我的感觉是感受态很重要，你可以转化连接产物的同时用纯质粒转化进行感受态活性的验证，后者取1ul转化，10ul涂板，好的感受态一般要长50个菌落以上。其次是连接体系，目的片断与载体的摩尔比为3-10：1，除此，连接酶也很重要，最好不要使用储存太久的酶，建议你下次做的时候用别人的酶试一下。
转化要用空质粒作对照，保证感受态没问题，细菌一般长12到16小时就形成可见的菌落，转化后的菌落一般比为转化的菌落小一些。
酶切体系（参考）：
质粒17ul
buffer2ul
酶1ul
－－－－－－－－－－37度，过夜。
酶切位点
在质粒上，所选的两个酶的酶切位点不可以靠的太近，如6bp
建议载体质粒不要用双酶切,用两次单酶切之后切胶回收.另外建议加多以下两个个步骤:
1.PCR产物的酶切片断做TA克隆,之后再酶切回收,与载体相连.
2.目的片段与载体连接之后建议先转化DH5α这些容易转化的菌株.然后筛选到的阳性克隆测序之后,提质粒,用质粒转化BL21,转化率很高.质粒不一定要新鲜提取,我的质粒放在-20度冻了大半年,作为载体完全没问题,只要确定不降解.
酶切的量、小提的质粒浓度和纯度
浓度:
根据我的实验，OD值0.5左右吧，不一定很准确。260：280通常是1.8左右。3ml菌过夜，进行小提,并没有对OD限定.小提的效果好不好主要决定于你的溶液I，II,III的质量以及你的操作手法，
特别是加溶液II时最为关键。现在有很多试剂盒既便宜效果又好，条件允许的话可以考虑购买。
琼脂糖电泳目测,不一定测OD,连接比例更重要.
质粒表达载体不用测序的，通常都是跑电泳看一下质量，然后再根据图谱选择适当的酶，看能不能够切开，如果能够切开，基本上就可以采用了。
纯度:
酶切对质粒的纯度要求高，如果蛋白和RNA去的不干净会影响酶切；
我们用于酶切的质粒的ratio值一般在1.8左右。
酶量；
在量上最好不超过酶的酶切能力，一般酶都为10U/ul,就是说酶切体系里加
1ul的酶可以在合适的温度下，1小时内消化10ugDNA，但在实际操作当中
一般酶都是过量的，而且延长了酶的作用时间，比如作用6小时。
因为酶切产物用于连接，所以我们酶切时质粒的用量尽量多，用20ul的体系
时可以如下加样，我们也有用50ul的体系切过。
回收目的片段与阳标一起进行酶切:
PCR后，电泳回收目的片断（比如玻璃奶或者一次性回收柱回收），再进行酶切。除非产物非常特异，直接酶切PCR产物效果有时不是很好，还有一般PCR体系里过量得dNTPs会影响酶切效果。酶切后，可以用标准得乙醇沉淀法沉淀酶切产物，获得高纯度得酶切产物，也即是你的黏性目断片断供后边得试验。而DNA的纯度对酶切效果是有很大的影响的。而酶切时应加个阳标(如含相应酶切位点的质粒载体)来确定酶和酶切体系是不是work的。如果这两步没问题，你的酶切肯定能顺利的。如果有阳标一起来切，容易找出问题的所在。
酶切不下
酶切这一步，本来问题不大，你严格按说明书上的要求进行就行了，包括酶量，酶切体系以及DNA的量也要按要求加入。而DNA的纯度和浓度是有必要测定的，最好OD260/280要接近2.0。DNA的量过大或是纯度太低都会影响酶切效果。万一如果无法充分酶切，但有所需要的片段，就可以根据Markers的位置回收所需片段。
因为基因组大部分是甲基化的，酶切不下来的原因一可能是内切酶活性低，或者是基因组杂质含量较高，或者盐离子浓度太高(不同的酶有不同的盐浓度).还有就是基因组酶切酶的量要求比较多，大概1ugDNA/10u酶，如果不行还可以加大量，酶量不能超过酶切体系的1/10，浓度过高里面的甘油会影响酶的活性。接头5-端是去磷酸化的，这样就可以避免接头自连，pcr结果就会有东西出来。
连接酶反应温度
空掉开低一点,一般16度连接2-3小时;
放进4度冰箱中，连接过夜，16小时
多片段连接:
将三个片断放在一起连的,效果的确不好.还是应该一个一个地连接.
连接比例
我用T载体连接PCR产物，请问片段和载体的摩尔比怎么选择连接效率好？根据什么因素来调节？有没有经验值？
一般片段：载体＝3～8：1。根据片段的大小、连接时间、温度、感受态细胞等因素来调节。经验值就是3～8：1。4度连接过夜，用新鲜制备的感受态细胞，一般可以得到很好的克隆效率。
补充一句：如果PCR产物片段比较大(>1kb)的话一般用3：1的比例，如果比较小就几百bp的话用>3：1的比例连接效率能高一些。3-10：1一般没问题.
建议仔细参看Teasy的说明书
接头处理
接头的处理和连接这一步其实是挺头疼的。建议先制备和接头两粘端连接的线性质粒分子。因为这对于你接头是否完成了磷酸化和退火处理提供了一个评价体系。你接头处理完，并通过评价，你就可以放心用了。退火时的处理一般要使用专门的annealingbuffer，否则效果不好。而对于粘端连接来说，应该问题不大，唯一担心的是能进行连接的片段太少了，影响下面的PCR扩增，所以酶切这一步是很关键的。
最后一步是高保真PCR，首先建议用Taq酶进行扩增，然后再用Pfu酶扩增，因为后者效率比较低。其实你用Taq酶如果扩出来，测序经blast/n后，如果有突变，你也完全可以根据正确的序列重新设计引物将之调出来。
注意感受态
如果还是不行，建议检查一下感受态菌的质量。
我的感觉是感受态很重要，你可以转化连接产物的同时用纯质粒转化进行感受态活性的验证，后者取1ul转化，10ul涂板，好的感受态一般要长50个菌落以上。其次是连接体系，目的片断与载体的摩尔比为3-10：1，除此，连接酶也很重要，最好不要使用储存太久的酶，建议你下次做的时候用别人的酶试一下。
转化要用空质粒作对照，保证感受态没问题，细菌一般长12到16小时就形成可见的菌落，转化后的菌落一般比为转化的菌落小一些。
PCR和实时荧光定量PCR这两种有什么区别？希望能稍微介绍一下这...123
2021-08-03
实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
恒温PCR和实时荧光定量PCR的不同，是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料（SYBR Green 或Taqman 探针等等）。以SYBR Green为例，这种染料可以结合在双链的DNA上，当PCR不断进行时，每一次退火生成的双链DNA也在增加，荧光染料结合也越多，荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头，可以定量检测荧光的强度，转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况。
荧光PCR更有优势，因为荧光PCR灵敏度高于恒温PCR，同样价格也高一些。
PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
恒温PCR和实时荧光定量PCR的不同，是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料（SYBR Green 或Taqman 探针等等）。以SYBR Green为例，这种染料可以结合在双链的DNA上，当PCR不断进行时，每一次退火生成的双链DNA也在增加，荧光染料结合也越多，荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头，可以定量检测荧光的强度，转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况。
荧光PCR更有优势，因为荧光PCR灵敏度高于恒温PCR，同样价格也高一些。
数字PCR的前世今生:特点、优势和局限性 分析行业新闻123
Yachenduan2021-07-29
请教有没有人知道哪里可以做数字PCR(dd-PCR)的公司，急求！
跪谢！
【求助】实时荧光定量PCR CT值偏大的原因是什么? 核酸基因技术...123
kenna2017-08-19
组织用Trizol法提取总RNA浓度、纯度都很好，但逆转录后跑PCR，CT值偏高，内参的在22-27之间，目的基因在30-36之间，不知道是怎么回事，如何来解决，求高手赐教。我用的Takara的试剂盒。
荧光定量PCR方法简介 123
2021-07-29
荧光定量PCR是400什么意思
实时荧光定量PCR仪是什么,它的作用有哪些 今日头条 电子发烧友网123
syj47392017-10-03
实时荧光定量PCR即
Real time PCR(也称实时定量PCR)
定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术，即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。
实时荧光定量PCR 技术的主要应用：
1. DNA 或RNA 的绝对定量分析：包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测，RNAi 基因失活率的检测等
2. 基因表达差异分析：例如比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等 )，特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA 芯片或差显结果的确证
3. 基因分型：例如SNP 检测，甲基化检测等
Realtime PCR 常用的两种方法分别为：Sybr green（荧光染料掺入法） 和Taqman probe （探针法）
SYBR green
在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
此方法适用：
1、灵敏度高：使用SYBR可使荧光效果增强到1000倍以上
2、通用性好,不需要设计探针,方法简便,省时,价格低廉。
3、通用型方法，在国内外科研中普遍使用。
4、高通量大规模的定量PCR检测
5、专一性要求不高的定量PCR检测。
Taqman Probe
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步
此方法适用：
1、具有高适应性和可靠性，实验结果稳定重复性好，特异性更高。
2、适用于扩增序列专一的体系的检测。
3、样品中靶基因含量过低的定量PCR检测。
4、靶基因的特异序列较短，无论怎样优化引物设计条件都不能解决。
5、存在与靶基因同源的序列，在PCR中容易出现非特异性扩增，对特异性要求较高的定量。
6、广泛用于人类传染病的诊断和病原定量,在动物病原体基因的检测,畜禽产品的检验检疫,生物制品的鉴定。
Real time PCR(也称实时定量PCR)
定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术，即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。
实时荧光定量PCR 技术的主要应用：
1. DNA 或RNA 的绝对定量分析：包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测，RNAi 基因失活率的检测等
2. 基因表达差异分析：例如比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等 )，特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA 芯片或差显结果的确证
3. 基因分型：例如SNP 检测，甲基化检测等
Realtime PCR 常用的两种方法分别为：Sybr green（荧光染料掺入法） 和Taqman probe （探针法）
SYBR green
在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
此方法适用：
1、灵敏度高：使用SYBR可使荧光效果增强到1000倍以上
2、通用性好,不需要设计探针,方法简便,省时,价格低廉。
3、通用型方法，在国内外科研中普遍使用。
4、高通量大规模的定量PCR检测
5、专一性要求不高的定量PCR检测。
Taqman Probe
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步
此方法适用：
1、具有高适应性和可靠性，实验结果稳定重复性好，特异性更高。
2、适用于扩增序列专一的体系的检测。
3、样品中靶基因含量过低的定量PCR检测。
4、靶基因的特异序列较短，无论怎样优化引物设计条件都不能解决。
5、存在与靶基因同源的序列，在PCR中容易出现非特异性扩增，对特异性要求较高的定量。
6、广泛用于人类传染病的诊断和病原定量,在动物病原体基因的检测,畜禽产品的检验检疫,生物制品的鉴定。
定量PCR方法及数据分析123
有木有3803722021-08-06
你所说的PCR应该就是最常规的PCR，以DNA为模板，通过上下游引物，实现DNA的扩增RT-PCR一般情况下是指反转录PCR（reversetranscription），尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也（realtimefluores-cencequantitativePCR）也简称RT-PCR，但是我觉得这是不对的，不推荐。基本操作过程是将所提取的RNA进行反转录，然后将所获得的cDNA作为模板，设计引物进行扩增，是一种检测基因表达的常用方法。实时荧光定量PCR也就是Real-TimePCR，原理有点多，请自行百度百科，其最大的作用是检测样品中的初始DNA浓度。至于三者的关系，RT-PCR和实时定量PCR应该都属于PCR，在RNA实验中，这二者都会应用到。例如你要比较2个组织中的某基因的表达差异，首先你要提取2个组织的总RNA，然后通过RT-PCR检测该基因是否在2个组织中有表达，然后通过实时定量PCR测定该基因在2个组织中的表达量是否具有显著性差异。
交叉引物恒温扩增技术（CPA）研究进展_爱学术123
qiqishichaoren2021-07-25
解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题123
shiqinghuayi12021-07-25
第一次做这方面的实验，这张图的右半个不会选，希望大家帮帮忙
3D数字PCR为精准医疗带来哪些优势 – 手机爱问123
zxn雫1522021-07-31
PCR（Polymerase Chain Reaction）技术，即聚合酶连反应，是一种扩大和复制目的片段DNA的技术，其发现对于生命科学的发展具有重要的意义。而3D数字PCR到底是什么鬼？它其实是最新出现的一款PCR仪，其具有对目的DNA分子做出绝对定量的优点，进而提供无与伦比的准确性、灵敏度。原理3D数字PCR是基于纳米流体芯片进行检测，通过一次检测，将样品分到数千个单独的PCR，检测结果部分为阳性，部分为阴性，之后进行绝对分子数统计，不需做标曲。目前可检测到2万个0.8nL的液滴（样品），能够精确的进行靶位点进行绝对定量研究。应用前景基因表达的绝对定量应用该技术，实现对DNA进行精确绝对定量，精确度可通过复制次数实现。通过准确性的进行定量检测基因，有助于临床上在治疗癌症、病毒感染等疾病作参考。同时，其具有高通量，检测速度快，成本相对低等优点，为后期精准治疗奠定基础。罕见基因的检测对于临床上的罕见的基因进行检测，不依靠参考标准，节约样本与试剂，并具有一定的精确度。3D数字PCR为液体活检提供技术支持液体活检是一种非侵入性的检测肿瘤基因及临床治疗效果的一种方法，目前可能正在开展有关3D数字PCR在在液体活检中的疗效，为后期临床提供更多可靠的指导作用。最新报道称“无创伤性肺癌检测技术即将登陆中国”。随着基因检测技术，如类似3D数字PCR技术的发展，推动我们将进入了“DNA的应用商城”这样的新时代，如23 and me、华大基因等专业的检测服务机构，提供更加专业的基因检测结果，经基因报告解读师或遗传咨询师进行通俗的解读，让我们每一个人都能够了解自己的基因，拥有自己的“生命之书”，让我们更加健康的生活。精准医疗其实本质是应用生物学信息与大数据科学的交叉发展的新型医学概念与医疗模式。对于精准医疗，重点在于“精准”，不仅仅是简单的基因测序如此简单，更需要精准的诊断与精准的治疗。
环介导等温扩增技术的临床应用进展123
火烈鸟20172021-07-28
请问一下，目前环介导等温扩增技术在临床上的应用怎么样？
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