TheCellMAX™ Premium Cell Strainer system is a fast and easy-to-use solution for detaching, isolating and straining cells from clusters and tissues. A polypropylene frame supports a nylon mesh that is available in three color-coded porosities: 40μm (blue), 70μm (white), and 100μm (yellow). The advanced frame/housing design also contributes to superior performance and reduced processing time, by eliminating the “air-lock” effect. Improved aeration allows air to escape while filtrate is entering the tube, preventing messy spillovers.
• Advanced design – faster flow through
• Superior ventilation – prevents clogging/spills
• Interlocking and stackable
• RNase, DNase, pyrogen and cytotoxin free
• Sterile (gamma) and individually packed
• Designed for use with 50mL tubes
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--本来,看好丹麦Exiqon公司,Qiagen的两个试剂盒,无奈经费有限,这两个盒子很不错,价格也不菲,有米的兄弟姐妹可以买。
--另外查询到国产上海诺伦公司的血液(血清/血浆)总RNA抽提试剂盒--广州这边用的人不多,不知道上海那边的兄弟姐妹有什么经验?
---还有,北京康为世纪公司的游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂,货号:CW2281,也比较便宜,但是俺心中也没有底,请大家给点意见。
---已经订购了LIFETECHNOLOGY的TrizolLS专门提取体液RNA的试剂(100毫升2000元人民币,也不菲),准备预试验看看提取RNA的质量。(Lifetechnology公司的AM1556也不错,但是也不便宜,每个盒子40次/2590元)
----但是还是希望有试剂盒,比较简单,快捷,最重要的是样本量太大,要分离400份左右的血清。
不懂得请别粘贴那些有的没的,浪费资源
采用的给全部分
1.破碎和裂解植物细胞壁。
2.抑制rna酶
3.去除植物多糖和多酚。树脂 淀粉和纤维材料。
4.去除许多高等植物组织尤其是成熟组织能产生某些水溶性的次级代谢产物,这些次级代谢产物很容易与RNA结合并与RNA共同被抽提出来而阻碍具有生物活性的RNA分离。
除了干扰RNA分离之外,植物多糖和多酚及次级代谢产物还能明显抑制下游RNA反应如转录和PCR.
动物体内RNA转染试剂,核酸和转染试剂混合后注射,轻松进行RNA干扰,基因敲除、沉默实验,3天可得出结果。下面以50μg的核酸与25μl转染试剂,总注射体积200μl,20g小鼠尾静脉注射为例说明。局部注射不用稀释,直接根据需要把核酸和转染试剂混合即可使用。
1.核酸的稀释。将50μg核酸用适量无内毒素纯水稀释成1μg/μl,加入10%葡萄糖溶液(w/v)50μl,使葡萄糖终浓度为5%,终体积为100μl,充分混匀。
2.转染试剂的稀释。取25μl的Entranster-invivo试剂用50μl的10%葡萄糖溶液稀释,并用纯水25μl补足,得到葡萄糖终浓度为5%,终体积为100μl液体,充分混匀。
3.转染复合物形成。立即将稀释后的转染试剂加入到稀释后的核酸溶液中,立即充分振荡混匀。
4.室温静置15分钟。配制好的转染复合物请即配即用,不宜长期存放。
5.动物注射。
说明:1).尾静脉注射时请掌握注射技巧,一般选用远端1/3处静脉注射,如感觉到阻力和轻微隆起,请停止注射,重新寻找静脉进行操作,不要强力推注,否则容易将药液注射在尾部,导致尾部溃烂。注射完成后移去针头,按压针孔10秒以上,防止药液流出。2).2.5mg/kg的给药剂量是起始给药剂量,如果动物可以耐受,可以按比例增加剂量,这样效果更好。3).局部注射,尽可能多注射药液,有利于提高转染效果。
6.基因表达检测。一般来说,根据注射方法和靶器官的差异,12-48小时后基因表达效果较好。
7.长期给药。一次给药检测的最佳时间是注射后12-48小时。如果需要维持长期效果,可以采用多次注射的方法,注射频度一般为每间隔2-3天一次,也可以根据实验情况适当延长至每7天一次。
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能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并最大限度的降低RNA污染。3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切都后续实验之中。5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。注:对于去除腐植酸的方法在使用以下任何一种方法之前,请预先准备5.5M的异硫氰酸胍(Guanidine Thiocyanate)溶液方法A:1.当操作到土壤DNA提取试剂盒的第九步时,使用14,000 x g (~约5秒)的短时离心替代硅珠的自然沉降,移除上清。2.用1ml事先准备好的异硫氰酸胍溶液洗涤、重悬硅珠。3.14,000 x g (~约5秒)短时离心该离心管,除去上清。4.重复上述的洗涤步骤,直到硅珠恢复到原先的颜色。5.最后一次洗涤之后,用1ml的异硫氰酸胍溶液重悬硅珠,将600μl重悬液转移到SPIN filter里,14,000 x g离心1分钟。6.移除接液管中的废液,将剩余的重悬液转移至SPIN filter里,14,000 x g离心1分钟,弃去废液。7.从提取试剂盒操作说明的第十二步开始继续操作。方法B:1.将下列成分混合于1.5ml的离心管中,组成腐植酸洗涤液:978 μl Sodium Phosphate Buffer122 μl MT Buffer250 μl PPS2.充分混匀后,全速离心1分钟,将上清转移到一个新的离心管中(容量大于或等于2ml)3.加入等体积的5.5M的异硫氰酸胍溶液、混匀。4.完成了土壤试剂盒操作说明中的第九步后,将500μl的腐植酸洗涤液加入SPIN filter5.14,000 x g离心1分钟,弃去废液。6.重复上述的洗涤步骤,直到硅珠恢复到原先的颜色。7.从提取试剂盒操作说明的第十二步开始继续操作。

