Overview:
PDE9A is a member of the phosphodiesterase (PDE) family that catalyzes the hydrolysis of cGMP to the monophosphate and thus plays an important role in signal transduction by regulating the intracellular concentration of cyclic nucleotides (1). Multiple transcript variants encoding several different isoforms have been found for PDE9A (2). These mRNAs differ in the use of specific combinations of exons located at the 5' end of the gene while the 3' half, encoding the catalytic domain of the protein, always has the same combination of exons. PDE9A has been used in the study of gene- disease association, gene-environment interaction, and pharmacogenomic/toxicogenomic. PDE9A is mainly expressed in spleen, small intestine, and brain.
Gene Aliases:
FLJ90181; HSPDE9A2
Genbank Number:
NM_001001567
References:
1. Fisher, D A. et al: Isolation and characterization of PDE9A, a novel human cGMP-specific phosphodiesterase. J. Biol. Chem. 273: 15559-15564, 1998. 2. Soderling, S H. et al: Identification and characterization of a novel family of cyclic nucleotide phosphodiesterases. J. Biol. Chem. 273: 15553-15558, 1998.
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RNAi技术的原理与应用（一）.ppt(218.5k)
1、RNA提取为什么用异丙醇，而且是等体积的？
2、为什么用氯仿，RNA为什么在上清中，中间和下层分别有什么？
3、RNA提取最后为什么用75%乙醇洗，而且为什么使用的是75%乙醇而不用无水乙醇来洗。还有有人建议用完75%乙醇后用无水乙醇洗，会使水分快速蒸发，可行吗？
谢谢大家啦，帮帮忙。
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动物体内RNA转染试剂，核酸和转染试剂混合后注射，轻松进行RNA干扰，基因敲除、沉默实验，3天可得出结果。下面以50μg的核酸与25μl转染试剂，总注射体积200μl，20g小鼠尾静脉注射为例说明。局部注射不用稀释，直接根据需要把核酸和转染试剂混合即可使用。
1.核酸的稀释。将50μg核酸用适量无内毒素纯水稀释成1μg/μl，加入10%葡萄糖溶液(w/v)50μl，使葡萄糖终浓度为5%，终体积为100μl，充分混匀。
2.转染试剂的稀释。取25μl的Entranster-invivo试剂用50μl的10%葡萄糖溶液稀释，并用纯水25μl补足，得到葡萄糖终浓度为5%，终体积为100μl液体，充分混匀。
3.转染复合物形成。立即将稀释后的转染试剂加入到稀释后的核酸溶液中，立即充分振荡混匀。
4.室温静置15分钟。配制好的转染复合物请即配即用，不宜长期存放。
5.动物注射。
说明：1).尾静脉注射时请掌握注射技巧，一般选用远端1/3处静脉注射，如感觉到阻力和轻微隆起，请停止注射，重新寻找静脉进行操作，不要强力推注，否则容易将药液注射在尾部，导致尾部溃烂。注射完成后移去针头，按压针孔10秒以上，防止药液流出。2).2.5mg/kg的给药剂量是起始给药剂量，如果动物可以耐受，可以按比例增加剂量，这样效果更好。3).局部注射，尽可能多注射药液，有利于提高转染效果。
6.基因表达检测。一般来说，根据注射方法和靶器官的差异，12-48小时后基因表达效果较好。
7.长期给药。一次给药检测的最佳时间是注射后12-48小时。如果需要维持长期效果，可以采用多次注射的方法，注射频度一般为每间隔2-3天一次，也可以根据实验情况适当延长至每7天一次。
总RNA提取试剂盒（TRIzol法）
RIpure试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。
无论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。TRIPURE试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIPURE抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。如果是用于PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。
TRIpure试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。
这里有关于miRNA专题报道，可以看看
RNA提取对于科研人员来说并不陌生，但是要得到好的结果却不是一件很容易的事情。事实上，现在市面上的丰富的RNA提取试剂基本上可以满足科研人员的需要，为什么往往提取的RNA却容易失败呢？
RNA提取失败的主要现象有三个：提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA纯度低。究竟怎样才能确保RNA提取的成功率呢？
首先，要确定材料的可用性。尽管现有的RNA提取试剂都用抑制RNase的成分，但提取的材料仍需谨慎处理。提取的材料的新鲜度是获取完整RNA的关键，但是由于种种原因无法立即从新鲜材料中提取RNA时，使用Takara公司的样品保护剂SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低温冰箱的不便，同时也可以有效解决组织、细胞样品的短时间保存及运输问题。此外，如果将不同时期收集的样品都预先存放于本试剂中，可以做到立即终止并固定RNA表达的时序变化，减少实验组间的误差。
其次，选择合适的提取试剂是最重要的一步。好的提取试剂在确保成功的同时，操作方便且经济实用。对于动物组织、简单的植物材料、各种微生物、培养细胞的totalRNA提取，Takara公司的RNAisoPlus具有诸多的成功案例。随着2013年7月柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市，进一步丰富了TakaraRNA提取的产品线。该产品采用了独特的细胞裂解系统，无需苯酚氯仿抽提等步骤，简单快捷。组织或细胞裂解后，提取操作仅需20分钟便可完成。
对于富含多糖多酚的植物类组织提取是个难点，Takara精心研发的柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以轻松解决这个问题。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地从各种简单的植物组织材料（叶片、茎、幼苗等）、富含多糖多酚的植物组织材料（果实、种子等）、真菌提取高纯度的TotalRNA，适用范围广泛。按照标准流程，本试剂盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA，也可以按照可选步骤提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA。试剂盒中包含了RNA提取所需的全部试剂，无需额外购买其它试剂。
1.破碎和裂解植物细胞壁。
2.抑制rna酶
3.去除植物多糖和多酚。树脂 淀粉和纤维材料。
4.去除许多高等植物组织尤其是成熟组织能产生某些水溶性的次级代谢产物，这些次级代谢产物很容易与RNA结合并与RNA共同被抽提出来而阻碍具有生物活性的RNA分离。
除了干扰RNA分离之外，植物多糖和多酚及次级代谢产物还能明显抑制下游RNA反应如转录和PCR.
