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separopore/GTP Separopore® 4B-CL/5 mL/20181066-2
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mRNA PurificationI. Prepare oligo-dT celluloseuse 40 mg oligo-dT cellulose / 1 mg total RNA swell oligo dT-cellulose in elution buffer wash oligo dT-cellulose 查看更多
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Northern BlottingAdapted from Molecular Cloning (Maniatis), Current Protocols in Molecular Biology, and J. Yost Lab (UMN) Objective:Northern blotting allows de 查看更多
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2021-09-22
• Isolate total RNA and native protein from the same sample • Enrich for small RNAs (<200 nt) • Ideal for assessing siRNA or miRNA express 查看更多
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2018-12-26
Isolation of RNA from Difficult TissuesThe often exacting process of isolating intact total RNA from tissue becomes even more difficult when processing certain 查看更多
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2021-08-03
同时检测包含成百上千种基因的 RNA 水平，从而构建一个详细的基因表达谱是分子生物学新的一项激动人心的本领。这是通过将 mRNA 定量扩增并用生物素标记再与 DNA 芯片杂交实现的，芯片上预先固定有与目的 mRNA 互补的寡核苷酸序列。 查看更多
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2021-07-28
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。 查看更多
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2021-08-10
本方案介绍用阳离子去污剂——十六烧基溴化吡啶（cetylpyridinium bromide,CPB) 定量差异沉淀分离放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物。此方法最初是用于回收磷酸缓冲液从羟磷灰石柱洗脱的 DNA(Geek and Nasz 1983), 也可用于沉淀放射性标记核酸包括寡核苷酸。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。 查看更多
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2021-09-04
1．电转化感受态细胞的制备 1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照） 2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。 3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每 查看更多
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2021-08-24
在生物大分子纯化分析特别是蛋白质纯化分析中，色谱是非常重要而且常用的一种技术。 一、凝胶过滤 凝胶过滤又叫分子筛色谱，其原因是凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤色谱柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。 查看更多
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2021-07-15
用测定生成还原糖（葡萄糖和果糖）的量来测定蔗糖水解的速度，本实验中，蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应5 min，每产生1毫克葡萄糖所需酶量。本实验旨在测定各级分的蛋白质含量及蔗糖酶活性。 查看更多
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2018-12-26
DROSOPHILA RNA PREP(Goodman Lab) Stock Solutions 3M NaOAc, pH 5.2 with HAc (MW=82) 6M Guanidine Hydrochloride in 0.1M NaOAc, pH 5.2 (MWGuHCl=95.54) 5.7M Cesium 查看更多
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2021-08-11
在提取过程的第一阶段细胞的 RNA 酶应尽快灭活。一旦内源的 RNA 酶被破坏，RNA 受损的可能就大大降低，而纯化的过程就可以按合适的速度进行。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。 查看更多
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血液总rna提取试剂盒_血液总rna提取试剂盒【价格,厂家,图片,批发,采购...123
howtostudent2021-07-30
各位兄弟姐妹，谁知道有质优价廉的血清/血清总RNA提取试剂盒嘛？（血清microRNA逆转录，定量PCR验证试验）
－－本来，看好丹麦Exiqon公司，Qiagen的两个试剂盒，无奈经费有限，这两个盒子很不错，价格也不菲，有米的兄弟姐妹可以买。
－－另外查询到国产上海诺伦公司的血液(血清/血浆)总RNA抽提试剂盒－－广州这边用的人不多，不知道上海那边的兄弟姐妹有什么经验？
产品编号 产品名称 产品包装 价格 说明书 LN-0111A 血液(血清/血浆)总RNA抽提试剂盒 50次 400.00元 LN-0111B 100次 720.00元
－－－还有，北京康为世纪公司的游离RNA（血清血浆尿液）提取试剂，货号：CW2281，也比较便宜，但是俺心中也没有底，请大家给点意见。
－－－已经订购了LIFETECHNOLOGY的TrizolLS专门提取体液RNA的试剂（100毫升2000元人民币，也不菲），准备预试验看看提取RNA的质量。(Lifetechnology公司的AM1556也不错，但是也不便宜，每个盒子40次/2590元）
－－－－但是还是希望有试剂盒，比较简单，快捷，最重要的是样本量太大，要分离400份左右的血清。
－－本来，看好丹麦Exiqon公司，Qiagen的两个试剂盒，无奈经费有限，这两个盒子很不错，价格也不菲，有米的兄弟姐妹可以买。
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－－－－但是还是希望有试剂盒，比较简单，快捷，最重要的是样本量太大，要分离400份左右的血清。
Jou讲义rnal123
忠诚的粉丝萌萌2017-10-03
尔梅洛于1998式发表论文,公布关RNA干扰机制发现发现基础,RNA干扰技术近迅速兴起,其前景普遍看RNA能够充信使,传递DNA(脱氧核糖核酸)遗传信息,其用于蛋白质产合研究显示,向物体内注入微RNA片段,干扰物体本身RNA信使功能,导致相应蛋白质合,关闭特定基科家认,采用RNA干扰技术直接源让致病基沉默,许更效治疗某些疾病 种技术初曾用研究植物蠕虫等,科家发现哺乳物细胞效例,美哈佛医院科家已经功利用RNA干扰技术治愈实验鼠肝炎目前,RNA干扰治疗技术快速进入体试验阶段些公司资助用项技术治疗黄斑变性、乙肝等疾病试验 尚几难题首先科家没找种便快捷使RNA干扰能患者体内效部位进行其科家确定种疗否影响目标基外其基引发副作
RNA干扰的成功与困惑123
到处游走的雨2017-10-03
http://www.bioon.com/biology/Special/RNAi/Index.shtml
这里有关于miRNA专题报道，可以看看
这里有关于miRNA专题报道，可以看看
TRIZOL试剂123
李向tao2017-10-03
主要成分：
TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。
TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL 能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。
※0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。
※异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
※β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。
TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。
基本特点
Trizol试剂可以快速提取人、动物、植物、细菌不同组织的总RNA，该方法对少量的组织（50-100 mg）和细胞（5×106）以及大量的组织（≥1 g）和细胞（>107）均有较好的分离效果。TRIZOL试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIZOL抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。并且利用DNA、RNA和蛋白质在不同溶液中的溶解性质，可以通过分层分别将不同层中的RNA（上层）、DNA（中层）、蛋白质（下层）分离纯化出来，效率极好。
Trizol试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带，（mRNA和hnRNA成分）两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb （28S）和~2 kb （18S），低分子量RNA介于0.1 和 0.3 kb之间 (tRNA,5S）。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8
TRIZOL
http://baike.baidu.com/view/533842.htm
TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。
TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL 能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。
※0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。
※异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
※β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。
TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。
基本特点
Trizol试剂可以快速提取人、动物、植物、细菌不同组织的总RNA，该方法对少量的组织（50-100 mg）和细胞（5×106）以及大量的组织（≥1 g）和细胞（>107）均有较好的分离效果。TRIZOL试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIZOL抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。并且利用DNA、RNA和蛋白质在不同溶液中的溶解性质，可以通过分层分别将不同层中的RNA（上层）、DNA（中层）、蛋白质（下层）分离纯化出来，效率极好。
Trizol试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带，（mRNA和hnRNA成分）两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb （28S）和~2 kb （18S），低分子量RNA介于0.1 和 0.3 kb之间 (tRNA,5S）。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8
TRIZOL
http://baike.baidu.com/view/533842.htm
《rna干扰》ppt课件123
zkk4042021-08-02
我自己看了几十篇文献后做的。应用方面主要是病毒学，有用你就顶一下。
RNAi技术的原理与应用（一）.ppt(218.5k)
RNAi技术的原理与应用（一）.ppt(218.5k)
RNA提取中各种试剂的作用 123
guojing郭晶2021-07-25
Trizol法和试剂盒提取组织中的RNA，哪个方法更可靠和精确呢？谢谢！
【求助】求真菌RNA提取试剂盒~那个厂家的性价比高呀~ 核酸基因...123
zhouqixian2021-07-20
想请问各位大神~哪个厂家的真菌RNA提取的试剂盒性价比高点呀~~本人毕业论文，想做基因表达的~~查了一下天根RNAprepPure植物总RNA提取试剂盒，跟生工的酵母总RNA快速抽提试剂盒与真菌总RNA快速抽提试剂盒，就想在这三个里面选~~但天根的比较贵呀~~生工的效果有不知道如何~？想问一下各位有木有用过这几个试剂盒的？那样好一点呀~~求回复~~~~谢谢各位了~
如何进行动物体内RNA干扰实验? 实验动物与组织学技术讨论版...123
ding2000yj2021-07-29
动物体内RNA转染试剂，核酸和转染试剂混合后注射，轻松进行RNA干扰，基因敲除、沉默实验，3天可得出结果。下面以50μg的核酸与25μl转染试剂，总注射体积200μl，20g小鼠尾静脉注射为例说明。局部注射不用稀释，直接根据需要把核酸和转染试剂混合即可使用。
1.核酸的稀释。将50μg核酸用适量无内毒素纯水稀释成1μg/μl，加入10%葡萄糖溶液(w/v)50μl，使葡萄糖终浓度为5%，终体积为100μl，充分混匀。
2.转染试剂的稀释。取25μl的Entranster-invivo试剂用50μl的10%葡萄糖溶液稀释，并用纯水25μl补足，得到葡萄糖终浓度为5%，终体积为100μl液体，充分混匀。
3.转染复合物形成。立即将稀释后的转染试剂加入到稀释后的核酸溶液中，立即充分振荡混匀。
4.室温静置15分钟。配制好的转染复合物请即配即用，不宜长期存放。
5.动物注射。
说明：1).尾静脉注射时请掌握注射技巧，一般选用远端1/3处静脉注射，如感觉到阻力和轻微隆起，请停止注射，重新寻找静脉进行操作，不要强力推注，否则容易将药液注射在尾部，导致尾部溃烂。注射完成后移去针头，按压针孔10秒以上，防止药液流出。2).2.5mg/kg的给药剂量是起始给药剂量，如果动物可以耐受，可以按比例增加剂量，这样效果更好。3).局部注射，尽可能多注射药液，有利于提高转染效果。
6.基因表达检测。一般来说，根据注射方法和靶器官的差异，12-48小时后基因表达效果较好。
7.长期给药。一次给药检测的最佳时间是注射后12-48小时。如果需要维持长期效果，可以采用多次注射的方法，注射频度一般为每间隔2-3天一次，也可以根据实验情况适当延长至每7天一次。
哪位高手指点一下植物RNA提取试剂什么样的最好啊? – 手机爱问123
威武DU75Z2021-07-24
可以用TRIZOL或者plant trizol，从植物组织中提取RNA需要克服几个困难：
1.破碎和裂解植物细胞壁。
2.抑制rna酶
3.去除植物多糖和多酚。树脂 淀粉和纤维材料。
4.去除许多高等植物组织尤其是成熟组织能产生某些水溶性的次级代谢产物，这些次级代谢产物很容易与RNA结合并与RNA共同被抽提出来而阻碍具有生物活性的RNA分离。
除了干扰RNA分离之外，植物多糖和多酚及次级代谢产物还能明显抑制下游RNA反应如转录和PCR.
1.破碎和裂解植物细胞壁。
2.抑制rna酶
3.去除植物多糖和多酚。树脂 淀粉和纤维材料。
4.去除许多高等植物组织尤其是成熟组织能产生某些水溶性的次级代谢产物，这些次级代谢产物很容易与RNA结合并与RNA共同被抽提出来而阻碍具有生物活性的RNA分离。
除了干扰RNA分离之外，植物多糖和多酚及次级代谢产物还能明显抑制下游RNA反应如转录和PCR.
OMEGArna提取试剂盒中文说明总RNA提取 123
游客随风43yO2017-10-01
E.Z.N.A. Total RNA Kit I
步骤
A． 真核细胞和组织
自己需要的材料：
β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管。
材料的最佳量
想得到最佳的产量和好的Hibind RNA柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug的RNA。TRK裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg的组织。
细胞的步骤
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。加700ul的TRK到T35细颈瓶或250px的培养皿中，更小的培养器加500ul的TRK。将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g）*5min，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀，转移到1.5ml EP管中，进行步骤2。
2． 匀浆化裂解产物
“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min。不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm直径），至少吹打5次是样品匀浆化。注射器要除RNase。
3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。转到总RNA分离中第4步。
组织的步骤：
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤30mg），使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
500ulTRK裂解液最大裂解能力30mg，难破碎的组织大于20mg就用700ul的TRK裂解液。当组织量超出建议的最大量时，也不要超过40mg。
组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用，除非是使用液氮，
2． 离心，≥1,5000*g, 5min, 室温。
3． 转移上清至，Homogenization Spin Column中，离心，≥1,3000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。
总RNA分离：
4． 在裂解产物中加入50％体积（250ul－350ul）的无水乙醇（96％－100％）混匀，漩涡振荡20s。
5． 样品转移到Hibind RNA Mini column上，离心管的最大容量为750ul，加完乙醇后可能会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。室温离心，10,000*g,0.5-1min。弃去流出液（透过柱子流出到离心管里的液体）。
6． 将柱子放在一个新的2ml收集管中，加上300ul RNA wash buffer I。室温离心，10,000*g, 0.5-1min。同样弃掉流出液。
7． DNase I 消化（选择性）
在我的实验中没有做这一步。
8． 将柱子再放到一个新的2ml收集管中，加入400ul RNA wash buffer I, 室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。
9． 将柱子放到2ml收集管中，加入500ul RNA wash buffer II（乙醇稀释过的），室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。注意：使用前RNA wash buffer II 必须要用无水乙醇稀释(48ml)，按照标签上的说明。
10． 用500ul RNA wash buffer II洗涤一次柱子，同上一步骤一样。室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。然后在空收集管中，以最大转速离心柱子，≥12,000*g, 2min, 室温，使的HiBind 基质完全干燥。
11． 转移柱子到一个新的1.5ml的Ep管中，（试剂盒中没有提供），加入50－100ul的DEPC水洗脱柱子（试剂盒中提供）。确保水直接加到了柱子的基质上。10,000*, 1min, 室温。如果RNA的总量大于30ug，可以进行二次洗脱。
注意：可以选择性地，用大一点的体积洗脱RNA。如果进行二次洗脱，总RNA的量会增加，但是浓度会降低，因为80％以上的RNA会在第一次时被回收。在加柱子前将水加热到65℃并室温孵育柱子5min会增加产量。
步骤
A． 真核细胞和组织
自己需要的材料：
β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管。
材料的最佳量
想得到最佳的产量和好的Hibind RNA柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug的RNA。TRK裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg的组织。
细胞的步骤
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。加700ul的TRK到T35细颈瓶或250px的培养皿中，更小的培养器加500ul的TRK。将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g）*5min，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀，转移到1.5ml EP管中，进行步骤2。
2． 匀浆化裂解产物
“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min。不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm直径），至少吹打5次是样品匀浆化。注射器要除RNase。
3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。转到总RNA分离中第4步。
组织的步骤：
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤30mg），使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
500ulTRK裂解液最大裂解能力30mg，难破碎的组织大于20mg就用700ul的TRK裂解液。当组织量超出建议的最大量时，也不要超过40mg。
组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用，除非是使用液氮，
2． 离心，≥1,5000*g, 5min, 室温。
3． 转移上清至，Homogenization Spin Column中，离心，≥1,3000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。
总RNA分离：
4． 在裂解产物中加入50％体积（250ul－350ul）的无水乙醇（96％－100％）混匀，漩涡振荡20s。
5． 样品转移到Hibind RNA Mini column上，离心管的最大容量为750ul，加完乙醇后可能会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。室温离心，10,000*g,0.5-1min。弃去流出液（透过柱子流出到离心管里的液体）。
6． 将柱子放在一个新的2ml收集管中，加上300ul RNA wash buffer I。室温离心，10,000*g, 0.5-1min。同样弃掉流出液。
7． DNase I 消化（选择性）
在我的实验中没有做这一步。
8． 将柱子再放到一个新的2ml收集管中，加入400ul RNA wash buffer I, 室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。
9． 将柱子放到2ml收集管中，加入500ul RNA wash buffer II（乙醇稀释过的），室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。注意：使用前RNA wash buffer II 必须要用无水乙醇稀释(48ml)，按照标签上的说明。
10． 用500ul RNA wash buffer II洗涤一次柱子，同上一步骤一样。室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。然后在空收集管中，以最大转速离心柱子，≥12,000*g, 2min, 室温，使的HiBind 基质完全干燥。
11． 转移柱子到一个新的1.5ml的Ep管中，（试剂盒中没有提供），加入50－100ul的DEPC水洗脱柱子（试剂盒中提供）。确保水直接加到了柱子的基质上。10,000*, 1min, 室温。如果RNA的总量大于30ug，可以进行二次洗脱。
注意：可以选择性地，用大一点的体积洗脱RNA。如果进行二次洗脱，总RNA的量会增加，但是浓度会降低，因为80％以上的RNA会在第一次时被回收。在加柱子前将水加热到65℃并室温孵育柱子5min会增加产量。
[求助]大鼠颗粒细胞的提取和细胞中RNA的抽提 核酸基因技术 丁香 ...123
米兰加油2692017-10-03
大鼠颗粒细胞的提取和细胞中RNA的抽提
总RNA提取试剂盒（TRIzol法）
RIpure试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。
无论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。TRIPURE试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIPURE抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。如果是用于PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。
TRIpure试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。
总RNA提取试剂盒（TRIzol法）
RIpure试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。
无论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。TRIPURE试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIPURE抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。如果是用于PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。
TRIpure试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。
OMEGA Total RNA 提取试剂盒中文步骤123
proteing2007-04-27
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