里氏木霉磷酸化蛋白质组的非标记定量分析《生物技术通讯》2016...
| 实验方法原理 | 本方案适用于制备噬菌体原种、制备噬菌体颗粒（用来获得DNA进行亚克隆）以及制备λ噬菌体臂。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | λ噬菌体颗粒悬浮液 试剂、试剂盒 | EDTA甘油SM胰DNaseⅠ 仪器、耗材 | BeckmanSW41或SW28转子或相当型号离心管 实验步骤 | 一、材料 1.缓冲液和溶液 EDTA(0.5mol/L，pH8.0) 甘油（5%和40%，V/V)于SM中 SM 2.酶和缓冲液 胰DNaseⅠ(1mg/ml) 胰RNase于TE中（1mg/ml，pH7.6) 3.离心机和转子 BeckmanSW41或SW28转子或相当型号，配有清亮的离心管（如Beckman超亮离心管） 4.载体和菌株 λ噬菌体颗粒悬浮液 二、方法 1.在BeckmanSW41聚碳酸酯离心管（或相应离心管）中制备甘油分级梯度（每管加5ml噬菌体悬浮液）： (1)取3ml含40%甘油的SM，加入至离心管管底。 (2)在40%甘油溶液上小心加入4ml含5%甘油的SM。 (3)在5%甘油的顶层小心加入噬菌体悬浮液，最后用SM补满。 2.分级梯度于4℃151000g(35000r/min于BeckmanSW41或SW28转子中）离心60min。 3.去上清，每升培养物原液加1mlSM重悬噬菌体沉淀。 4.加胰DNaseⅠ和RNase至终浓度分别为5μg/ml和1μg/ml，37℃温育30min。 5.加0.5mol/L的EDTA储液（pH8.0)至终浓度为20mmol/L。 |
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发布于 ： 2021-07-25
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