DNA Unwinding Assay Kit
This kit is designed to investigate whether a compound intercalates into the DNA double-helix, or binds in the groove, leading to unwinding of the DNA. This is a characteristic of a number of inhibitors of DNA-modifying enzymes such as the topoisomerase inhibitor m-amsacrine.
Intercalators contain planar, normally polycyclic, aromatic structures which can insert between the bases of the double-helical DNA molecule. Compounds which are able to intercalate into DNA or bind in the groove can lead to local unwinding of the DNA leading to a decrease in the twist of the DNA. If a DNA molecule is nicked and rejoined (for example by a topoisomerase) in the presence of such a compound, then the result is relaxed, underwound DNA; on removal of the enzyme and compound this converts to supercoiled DNA. The supercoiled DNA formed in these conditions is indicative of an intercalator.
This is the basis of the DNA unwinding assay. Supercoiled (or relaxed) plasmid DNA is incubated briefly with the test compound prior to relaxation by the wheat germ topo I. The enzyme and drug are then removed by extraction and the plasmid analysed by gel electrophoresis. Supercoiled topoiosmers indicate the compound is an intercalator or groove binder. If the compound is not an intercalator then the product will be relaxed plasmid.
The assay should be checked by performing a control reaction using relaxed plasmid to show that the compound is not simply acting as an inhibitor of the topo I.
The kit (product code DUKSR001) contains all you need to do the assay including:-
Supercoiled pBR322 (50 μg), relaxed pBR322 (25 μg), wheat germ topo I (250 U), Assay Buffer (1 ml) and Dilution Buffer (1 ml).
We also supply kits which contain topo I and buffers but only:-
(i) the relaxed form of pBR322 (product code DUKR002). This will show if a compound is an intercalator but not if it also inhibits the topo I (i.e. false-negatives are possible)
(ii) the supercoiled form of pBR322 (product code DUKS003). This will show if a compound is an intercalator but the same result will be given if it is an inhibitor of topo I (i.e. false-positives are possible)
This is illustrated in the scheme below:
Technical Documents
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不同点：
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP；DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶没有，当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。
4、RNA聚合酶只具有5‘到3’端的聚合酶活性，而DNA聚合酶不仅有5‘到3’端的聚合酶活性，还具有3‘到5’端的外切酶活性。保证DNA复制时候校对，所以复制的忠实性高于转录的。
5、RNA聚合酶通常作用于转录过程；DNA聚合酶通常作用于DNA复制过程。
B、酶大部分是蛋白质、少量是RNA，故某种酶的基本组成单位是氨基酸或核糖核苷酸，B错误；
C、内分泌细胞能产生激素，活的细胞能产生酶，故能产生激素的细胞就能产生酶，C正确；
D、酶通常是蛋白质，蛋白质在低温条件下更加稳定，利于保存，而且低温不会使酶失活，因此在最适温度保存没有意义，D错误．
相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP；DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶没有，当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。
4、RNA聚合酶只具有5‘到3’端的聚合酶活性，而DNA聚合酶不仅有5‘到3’端的聚合酶活性，还具有3‘到5’端的外切酶活性。保证DNA复制时候校对，所以复制的忠实性高于转录的。
5、RNA聚合酶通常作用于转录过程；DNA聚合酶通常作用于DNA复制过程
最近，我看了很多这方面的资料，但是我对这个方面不是很了解，所以现在搞得头昏眼花的，不知道该选什么酶和载体，希望大家多多帮忙
在此十分感谢
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶；(2)依赖RNA的DNA聚合酶；(3)依赖DNA的RNA聚合酶；(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；DNA聚合酶只能在有引物的基础上，即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸，这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外，还需要Mg2+ 、模板DNA和引物，迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。同样，上述(3)和(4)是催化RNA生物合成反应中最主要的RNA合成酶，它们以四种三磷酸核糖核苷(NTP)为底物，并需有DNA模板以及Mn2 及Mg2 的存在下，在前一个核苷酸3′-OH与下一个核苷酸的5′-P聚合形成3′，5′-磷酸二酯键，其新生链的方向也是5′→3′。RNA聚合酶也大量存在于原核和真核生物的细胞中。如大肠杆菌RNA聚合酶分子量4.8×105，由5条多肽链组成，分别命名为α，α，β，β′，和γ，全酶可用α2ββ′λ表示。真核生物RNA聚合酶分子大于5×105，由10～12个大小不等亚基组成。聚合酶除作为自然界生命活动中不可缺少的组分外，在实验室中大多用作生命科学研究的工具酶类之一。
再来说真核生物,真核生物的DNA聚合酶分为α,β,γ,δ,ε,.首先我来说三个和原核生物中的Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ功能相同的酶.ε类似于原核生物DNA聚合酶Ⅰ,β类似于原核生物DNA聚合酶Ⅱ,δ类似于原核生物DNA聚合酶Ⅲ.α具有引物酶活性,而γ则是作为复制真核生物线粒体内的DNA所需要的酶.
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶；(2)依赖RNA的DNA聚合酶；(3)依赖DNA的RNA聚合酶；(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；DNA聚合酶只能在有引物的基础上，即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸，这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外，还需要Mg2+ 、模板DNA和引物，迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。同样，上述(3)和(4)是催化RNA生物合成反应中最主要的RNA合成酶，它们以四种三磷酸核糖核苷(NTP)为底物，并需有DNA模板以及Mn2 及Mg2 的存在下，在前一个核苷酸3′-OH与下一个核苷酸的5′-P聚合形成3′，5′-磷酸二酯键，其新生链的方向也是5′→3′。RNA聚合酶也大量存在于原核和真核生物的细胞中。如大肠杆菌RNA聚合酶分子量4.8×105，由5条多肽链组成，分别命名为α，α，β，β′，和γ，全酶可用α2ββ′λ表示。真核生物RNA聚合酶分子大于5×105，由10～12个大小不等亚基组成。聚合酶除作为自然界生命活动中不可缺少的组分外，在实验室中大多用作生命科学研究的工具酶类之一。向左转|向右转
