
Description | T4RNALigase2,alsoknownasT4Rnl2(gp24.1),hasbothintermolecularandintramolecularRNAstrandjoiningactivity.T4RNALigase2ismuchmoreactivejoiningnicksondoublestrandedRNAthanonjoiningtheendsofsinglestrandedRNA.Ligationofsingle-strandedRNAsubstratesgenerateseitherintramolecularorintermolecularproducts.Theenzymerequiresanadjacent5´phosphateand3´OHforligation.Theenzymecanalsoligatethe3´OHofRNAtothe5´phosphateofDNAinadoublestrandedstructure.Thenon-ligatedstrandoftheduplexcanbeeitherRNAorDNA.T4RNAligase2requiresATPforactivityunlessthesubstrateispreadenylatedonthe5′end. |
Applications |
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Source | PurifiedfromarecombinantE.colistraincarryingtheT4phageRNALigase2(gp24.1)gene |
Components |
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UnitDefinition | Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoligate50%of0.4µgofanequimolarmixofasingle-stranded5′FAM-labeled17-merRNAtothe5′phosphorylatedendofa18-merDNAwhenbothstrandsareannealedtoacomplementary35-merDNAstrandin20µLat37°Cfor30minutes. |
QualityControl |
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Storage | -20°C. |
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连接酶通常是包括“连接酶”这个字,就如DNA连接酶是将脱氧核糖核酸(DNA)片段连接。其他普遍的名称包括“合成酶”,因为这些酶是用作合成新的分子,或当它们是将二氧化碳加入一个分子时则称为“羧化酶”。
DNA连接酶主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键最初从原核生物(大肠杆菌)分离得到的.现在生物基因工程主要是从T4噬菌体中分离得到的,
求有经验的大神指教,我的载体和目的基因连不上,转化不到大肠中,比例为1:3。另外,为啥胶回收后的载体浓度那么低,大约6ng/ul了,影响连接么?
DNA连接酶:可以连接被限制酶切割开磷酸二酯键
菌体构建时,目的基因连接在T载体上,测序也正确,但是将目的基因还有载体分别双酶切后总是连接不上,将连接后产物跑核酸胶,什么也没有,不知道是什么原因?我的目的基因浓度为9ng/ul,载体回收后的浓度为6ng/ul,是因为浓度太低的原因吗?还有就是连接有目的基因的T载体双酶切后出现了三条带,这个又是什么原因呢?希望得到解答


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