
Description | ThermostableATPindependentRNALigase2specificallyligatesthepreadenylated5´endofssDNAorRNAtothe3´OHendofRNAat60–65°C.TheenzymedoesnotrequireATPforligationbutrequirespre-adenylatedlinkers. |
Applications | Ligatea5´pre-adenylated3´-blockedDNAorRNAsequencetagtothe3´-OHofRNAandssDNA. |
Source | PurifiedfromarecombinantE.colistraincarryingathermostablearchaealRNALigase |
Components |
|
Activity | 1µgproteinwillligateatleast16pmolofpre-adenylateddonorsubstrateRNAto10pmolofacceptorsubstrate(e.g.17merssDNA)inatotalreactionvolumeof200μlin1hourat65°C. |
QualityControl | Theabsenceofendo-,exodeoxyribonucleases,phosphataseandribonucleasesconfirmedbyappropriatequalitytests. |
Storage | -20°C. |
ebiomall.com






>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
DNA连接酶:可以连接被限制酶切割开磷酸二酯键
酶对所作用的底物有严格的选择性。一种酶仅能作用于一种物质,或一类分子结构相似的物质,促其进行一定的化学反应,产生一定的反应产物,这种选择性作用称为酶的专一性。
只不过限制性核苷酸酶是将磷酸二酯键切断;而DNA连接酶则是形成磷酸二酯键。
产生这一现象的原因在于 DNA合成酶只能沿5'-3'的方向合成DNA 而DNA本身的两条链又是反向分布的 所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去(以它为模板的子链生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的) 而后随链要盘绕成回环 反扭过来 才能合成
再合成起始的时候 DNA聚合酶是需要一段RNA引物的 在原核生物中这一引物是由dnaQ(一种酶)在已解旋的单链5'端合成,真核生物中也有对应的酶 由于后随链的合成不连续 所以每个片段都要有引物 在DNA合成结束的时候 这些引物要被切除 因而留下缺口 这时又要特定的酶去填补缺口(比如 大肠杆菌中的DNA聚合酶I)可是填补序列和周围序列间会有缺刻 也就是说他们交界处的3'-5'磷酸二脂键是断开的 这时需要DNA连接酶发挥作用 将其连好
所以 后随链上的缺刻多 还真够DNA连接酶忙一阵的 前导链上只有一开始有RNA引物 因此 最后也基本只有这个地方会用到连接酶
DNA连接酶主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键最初从原核生物(大肠杆菌)分离得到的.现在生物基因工程主要是从T4噬菌体中分离得到的,
连接酶通常是包括“连接酶”这个字,就如DNA连接酶是将脱氧核糖核酸(DNA)片段连接。其他普遍的名称包括“合成酶”,因为这些酶是用作合成新的分子,或当它们是将二氧化碳加入一个分子时则称为“羧化酶”。
大家有用过Invitrogen的T4连接酶吗?说明书上是23-26度连接,一般的连接酶不都是16度吗?应该用多少度呢?另外,说明书上还说连接后为了达到更好的转化效率,应将连接反应液至少稀释5倍再转化,是这样吗?谢谢大家帮忙啊


暂无品牌分类