- OnlysourceforrecombinantT4DNAPolymerase,ExonucleaseMinus.
- PotentialapplicationsincludeenhancingDNAsequencingreads.
T4DNAPolymerase,ExonucleaseMinusisaDNA-dependentDNApolymerasewhichcatalyzesthe5’→3’synthesisofDNAandrequirestemplateandprimer. Additionally,theenzymelacks3’→5’exonucleaseactivity.
Source:
PurifiedfromastrainofE.colithatcarriesaT4DNAPolymerase,ExonucleaseMinusexpressionplasmid.
Applications:
- DNASequencingreaction.(1)
Heatinactivation:70°Cfor15minutes.
Storage:
Enzymeandbuffershouldbestoredat-20°C.Enzymeisstablefor12monthsifhandledproperly.
AdditionalInformation:
- MayincreasetheDNAsequencingread-lengths.
References
- NancyG.Nossal(1998)Genetics148:1535-1538.
ORDERINFORMATION
RecombinantT4DNAPolymerase,ExonucleaseMinusissuppliedataconcentrationof3,000U/mlinastoragebufferof50%glycerol,100mMKPO4(pH6.5)and1mMDTT.Alsosuppliedis10XDNAPolymeraseBufferAcomposedof100mMTris-HCl(pH7.9),100mMMgCl2,500mMNaCland10mMDTT.
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特性
高反应效率
粘性末端和平齐末端均可连接
限制性酶切片段的克隆
将 linker 或 adapter 连接到 DNA 片段的平齐末端
室温或 16℃ 均有活性
概述该酶催化契合的双链DNA或RNA的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端 DNA 之间的连接,还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻(1)。
来源纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8(2)。
反应条件1 X
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T4 DNA Ligase(T4 DNA 连接酶) 催化粘性末端或平末端两条DNA 链的相邻核苷酸的5`- 磷酸基和3`-OH 的连接。该酶也可催化RNA 与双链DNA 或RNA 的连接,但不能使单链核酸相连。
特点:提供高浓度产品:Cat.# M1794 包含500 单位10–20u/μl 的T4DNA Ligase。
灵活:可用于5`、3` 或平末端DNA 插入片段。
提供10× 反应缓冲液:300mM Tris-HCl (pH 7.8,25℃ ),100mM MgCl2,100mM DTT
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特性
连接粘性末端接头
连接双链 RNA 中的切刻最佳用酶
可用于 DNA/RNA 杂交链中,RNA 3羟基与 DNA 5 磷酸基的连接
概述T4RNA连接酶 2 ,也被称为 T4Rnl-2 ( gp24.1 ),同时具有 RNA 链分子间和分子内连接活性 (1-3)。与 T4 RNA 连接酶1 (NEB #M0204) 不同的是,T4 RNA连接酶 2对双链 RNA切刻的连接活性要明显高于对单链 RNA的末端连接。该酶连接时需要相邻的 3´ 羟基与 5´磷酸基
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特性
将 5 预腺苷化的 DNA 或 RNA 连接到任何 RNA 3 末端
将单链腺苷化引物连接至小 RNA 上,用于 cDNA 克隆文库构建
将单链腺苷化引物连接至 RNA 上,用于链特异 cDNA 文库构建
概述T4RNA连接酶 2 ,截短型(T4 RNL2截短型 )可特异性地将 DNA 或 RNA 的预腺苷酰化 5´ 末端连接到 RNA 3´末端。该酶连接时不需要 ATP ,但需要预腺苷酰化底物。T4 RNL2截短型的表达来自 E. coli质粒,该质粒编
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所有产品都有正品保障,透析袋现货,为美国spectrumlabs、viskase、cellu.sep三大公司生产。 T4 DNA 连接酶 货号 规格 价格 库存 #M0202L 100,000 unit...
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特性
高反应效率
粘性末端和平齐末端均可连接
限制性酶切片段的克隆
将 linker 或 adapter 连接到 DNA 片段的平齐末端
室温或 16℃ 均有活性
概述该酶催化契合的双链DNA或RNA的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端 DNA 之间的连接,还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻(1)。
来源纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8(2)。
反应条件1 X
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上海宾智生物科技有限公司在发布的512105 AIR™ Ligase 空气™连接酶供应信息,浏览与512105 AIR™ Ligase 空气™连接酶相关的产品或在搜索更多与512105 AIR™ Ligase 空气™连接酶相关的内容。
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北京益奥柏科贸有限公司在发布的T4 DNA Ligase T4 DNA 连接酶(货号M0202S)供应信息,浏览与T4 DNA Ligase T4 DNA 连接酶(货号M0202S)相关的产品或在搜索更多与T4 DNA Ligase T4 DNA 连接酶(货号M0202S)相关的内容。
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T4 DNA Ligase(T4 DNA 连接酶) 催化粘性末端或平末端两条DNA 链的相邻核苷酸的5`- 磷酸基和3`-OH 的连接。该酶也可催化RNA 与双链DNA 或RNA 的连接,但不能使单链核酸相连。
特点:
提供高浓度产品:Cat.# M1794 包含500 单位10–20u/μl 的T4DNA Ligase。
灵活:可用于5`、3` 或平末端DNA 插入片段。
提供10× 反应缓冲液:300mM Tris-HCl (pH 7.8,25℃ ),100mM MgCl2,100mM D
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连接酶链反应(Ligase chain reaction,LCR),是在连接酶扩增反应或连接酶检测反应的基础上,引入热稳定的连接酶而建立的类似PCR 技术的新方法。LCR 既可扩增,又可鉴定D N A 异常,与PCR 技术一样可用于已知病因的遗传病大面积普查。...
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泛素蛋白酶体途径是目前己知的所有真核生物体内具有高度选择性的最为重要的蛋白质降解途径。真核细胞中泛素化修饰后的靶蛋白可能被降解、可能被转移到细胞或细胞外的特定部位,也有可能导致靶蛋白的功能发生变化,这主要取决于靶蛋白所加的泛素链的结构,以及泛素链的长短。泛素连接酶E3...
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北京瑞泽康科技有限公司在发布的连接酶供应信息,浏览与连接酶相关的产品或在搜索更多与连接酶相关的内容。
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求有经验的大神指教,我的载体和目的基因连不上,转化不到大肠中,比例为1:3。另外,为啥胶回收后的载体浓度那么低,大约6ng/ul了,影响连接么?
不需要识别特定的碱基序列吗?例如用不同的限制酶切出的平末端用T4DNA
连接酶都能连起来吗?
E.coliDNA连接酶和T4连接酶的区别:E·coliDNA连接酶是从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶 只能连接粘性末端,而平末端则要交给T4DNA连接酶了 它可以连接粘性末端也可以连接平末端。
连接酶通常是包括“连接酶”这个字,就如DNA连接酶是将脱氧核糖核酸(DNA)片段连接。其他普遍的名称包括“合成酶”,因为这些酶是用作合成新的分子,或当它们是将二氧化碳加入一个分子时则称为“羧化酶”。
不要机理就像看下连接前的3'和5'什么样子内切酶切开后两头都要做去磷酸化吗? 谢谢
各位大神好,我刚开始做连接,用的T4
连接酶,takara的,16度连了12h,转了感受态没长菌斑,我的
载体酶切后11000bp,我要连上去的片段在760bp,用的是salI和BglII双酶切后看胶图应该是没有问题,第一张图是当时酶切的图,从左至右是2kplusII
Marker,片段双酶切,片段原质粒,片段salI单酶切,片段BglII单酶切,载体双酶切,载体原质粒,载体salI单酶切,载体BglII单酶切,从图中看酶切应该是切开了,就是片段在750bp的条带有点弱,但还是有条带的。现在不太清楚是什么原因,能帮忙分析一下吗?第二张胶图是胶回收之后定量的,从左侧第一个点样孔是2kplusII的marker,第二个是片段双酶切胶回收3微升点样,第三个是载体双酶切胶回收3微升点样。连接体系是10微升,1.5的酶,1的buffer,6.5的片段,1的载体,但就是连不上,各位帮忙分析一下吗,不胜感激
菌体构建时,目的基因连接在T载体上,测序也正确,但是将目的基因还有载体分别双酶切后总是连接不上,将连接后产物跑核酸胶,什么也没有,不知道是什么原因?我的目的基因浓度为9ng/ul,载体回收后的浓度为6ng/ul,是因为浓度太低的原因吗?还有就是连接有目的基因的T载体双酶切后出现了三条带,这个又是什么原因呢?希望得到解答
DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的,最初是在大肠杆菌细胞中发现的.
DNA连接酶主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键最初从原核生物(大肠杆菌)分离得到的.现在生物基因工程主要是从T4噬菌体中分离得到的,
大家有用过
Invitrogen的T4
连接酶吗?说明书上是23-26度连接,一般的连接酶不都是16度吗?应该用多少度呢?另外,说明书上还说连接后为了达到更好的转化效率,应将连接反应液至少稀释5倍再转化,是这样吗?谢谢大家帮忙啊
限制性内切酶:可以切割磷酸二酯键
DNA连接酶:可以连接被限制酶切割开磷酸二酯键
DNA连接酶用来连接具有互补末端的双链DNA,其最适温度是37℃,但由于其在高温不稳定,所以一般是16℃连接过夜。DNA聚合酶是用来复制DNA的,在体内的最适温度是37℃,我们做PCR常用的酶也是聚合酶,其最适扩增温度是72℃。
DNA的复制事实上是半不连续复制 即只有一条链的合成是连续的 这听起来很神奇 但确实是这样 连续合成的链叫做前导链 另一条链称为后随链 它的合成是不连续的 以它为模板的合成 需要一段一段地进行 所合成的片段叫做冈崎片段
产生这一现象的原因在于 DNA合成酶只能沿5'-3'的方向合成DNA 而DNA本身的两条链又是反向分布的 所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去(以它为模板的子链生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的) 而后随链要盘绕成回环 反扭过来 才能合成
再合成起始的时候 DNA聚合酶是需要一段RNA引物的 在原核生物中这一引物是由dnaQ(一种酶)在已解旋的单链5'端合成,真核生物中也有对应的酶 由于后随链的合成不连续 所以每个片段都要有引物 在DNA合成结束的时候 这些引物要被切除 因而留下缺口 这时又要特定的酶去填补缺口(比如 大肠杆菌中的DNA聚合酶I)可是填补序列和周围序列间会有缺刻 也就是说他们交界处的3'-5'磷酸二脂键是断开的 这时需要DNA连接酶发挥作用 将其连好
所以 后随链上的缺刻多 还真够DNA连接酶忙一阵的 前导链上只有一开始有RNA引物 因此 最后也基本只有这个地方会用到连接酶
我找公司做了iMLDR法,实验报告中链接反应每个位点有三个引物例如rs1492100FA:TCTCT…GGCAATTrs1492100FP:…TTTAGAGAGAAACTCCATGrs1492100FT:…GAGCTCAGCGTGGGTT这里的FA/FP/FT是什么涵义,有的是RC/RP/RT,有的是RA/RG/RPF/R应该是正向/反向,后面的字母什么涵义就不懂了?谢大神