| Keywords: | PGE2 Express EIA Kit |
| Supplier: | Cayman Chemical |
| Supplier-Nr: | 500141-96S |
Properties
| Application: | ELISA |
| Format: | Solid Phase |
Database Information
Handling & Safety
| Storage: | -20°C |
| Shipping: | -20°C (International: -20°C) |
| Signal Word: | Danger |
| GHS Hazard Pictograms: | |
| H Phrases: | H225, H301, H302, H311, H315, H317, H318, H319, H335, H336, H351, H361, H372 |
| P Phrases: | P201, P202, P210, P240, P241, P242, P243, P260, P261, P264, P270, P271, P272, P280, P312, P314, P321, P330, P301+P310, P302+P352, P303+P361+P353, P304+P340, P305+P351+P338, P308+P313, P332+P313, P333+P313, P337+P313, P361+P364, P362+P364, P370+P378, P405, P403+P233, P403+P235, P501 |
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产生这一现象的原因在于 DNA合成酶只能沿5'-3'的方向合成DNA 而DNA本身的两条链又是反向分布的 所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去(以它为模板的子链生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的) 而后随链要盘绕成回环 反扭过来 才能合成
再合成起始的时候 DNA聚合酶是需要一段RNA引物的 在原核生物中这一引物是由dnaQ(一种酶)在已解旋的单链5'端合成,真核生物中也有对应的酶 由于后随链的合成不连续 所以每个片段都要有引物 在DNA合成结束的时候 这些引物要被切除 因而留下缺口 这时又要特定的酶去填补缺口(比如 大肠杆菌中的DNA聚合酶I)可是填补序列和周围序列间会有缺刻 也就是说他们交界处的3'-5'磷酸二脂键是断开的 这时需要DNA连接酶发挥作用 将其连好
所以 后随链上的缺刻多 还真够DNA连接酶忙一阵的 前导链上只有一开始有RNA引物 因此 最后也基本只有这个地方会用到连接酶
DNA连接酶主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键最初从原核生物(大肠杆菌)分离得到的.现在生物基因工程主要是从T4噬菌体中分离得到的,
大家有用过Invitrogen的T4连接酶吗?说明书上是23-26度连接,一般的连接酶不都是16度吗?应该用多少度呢?另外,说明书上还说连接后为了达到更好的转化效率,应将连接反应液至少稀释5倍再转化,是这样吗?谢谢大家帮忙啊
求有经验的大神指教,我的载体和目的基因连不上,转化不到大肠中,比例为1:3。另外,为啥胶回收后的载体浓度那么低,大约6ng/ul了,影响连接么?
有没有人用过NEB的Blunt/TALigaseMasterMix和InstantSticky-endLigaseMasterMix?
有没有人用过NEB的Blunt/TALigaseMasterMix和InstantSticky-endLigaseMasterMix?
有没有人用过NEB的Blunt/TALigaseMasterMix和InstantSticky-endLigaseMasterMix?
.....它说连得又快又好,想问问有木有小白鼠试过它家的这两个产品呢。。如果用过能不能请教下效果咋样呢。。我之前用Thermo的T4,属于又便宜又慢效果还可以的那类型的。。(虽然说thermo也说室温30min就ok,但是还是4度过夜了,室温30min不靠谱)
只不过限制性核苷酸酶是将磷酸二酯键切断;而DNA连接酶则是形成磷酸二酯键。

