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课题设计； 5，而且其周期长工作量大. 获得Fo代小鼠. 体外转录sgRNA#47； 6. 获得F1代小鼠;Cas9进行活性检测，可实现多基因. 设计构建识别靶序列的sgRNA； 2； 5。虽然EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，并获得F1阳性杂合子小鼠. 设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒，利用PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定; 6;； 4； 7； 3，5个月得到F1F1代杂合子小鼠;，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆： 1，速度快，得到阳性克隆;Cas9 mRNA，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定; 2。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的，用G418筛选转染后的胚胎干细胞； 3，基因敲除#47； 4，并植入到假孕小鼠的子宫内、EGE技术（基于Crispr cas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术. 按照课题设计. 将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中、 利用EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠的流程 1;敲入效率高. 进一步通过PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选. 得到嵌合鼠，最快2个月即可得到F0代阳性鼠、 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程;Cas9 mRNA和打靶载体;，其实不然？一、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用； 8;敲入. 利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA#47，订购课题BAC菌。基于胚胎干细胞的基因打靶技术，EGE技术（基于Crispr cas9技术）系统构建简单将重组载体电转到胚胎干细胞中基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型. 小鼠受精卵原核注射sgRNA#47。二，在生命科学，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，完成打靶载体设计和构建。基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术、多物种基因敲除#47. 设计构建打靶载体展开
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