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OptimizedforcloningtoxicorunstableDNA
StABIlizetoxicinsertsincommoncloningandexpressionvectors(pUCandpET-typevectors)- Cloneandmaintainchallengingsequencesatreducedplasmidcopynumber,theninducetohighcopynumberforDNArecovery
- AvoidT1andT5phagecontaminationwithtonAmutation
- Choosechemicallycompetentcellsforgeneralcloningorelectrocompetentcellsfordemandingapplicationssuchaslibrarygeneration
Applications
- CloningofunstableDNAsequencesorthoseexpressingtoxicproteins.
CopyCutter™EPI400™E.coli*cellsweredevelopedtosignificantlylowerthecopynumberofawidevarietyofcommonvectorssothatyoucanmorereADIlycloneunstableDNAsequences.DNAthatisunstableathigh-copynumberoftencodesforaproteinthatinhibitscellgrowthorcontainsAT-andGC-richsequencesorsequenceswithstrongsecondarystructure(Fig.2).1
TheCopyCutterEPI400celllinewasderivedfromEpicentre'shigh-transformationefficiencyphageT1-resistantTransforMAX™EC100™-T1RE.colistrainbymanipulatingagenethatcontrolsthecopynumberofvectorscontainingColE1orpMB1originsofreplication(e.g.,pUC-andpET-typevectors).Thisconstitutivelyexpressedgene,pcnB(plasmidcopynumber),wasdeletedfromtheTransforMAXEC100strainandreplacedwithamodifiedpcnBgenethatislinkedtoaninducIBLepromoter,creatingtheCopyCutterEPI400strain.
ThecopynumberofColE1-typevectorsintheCopyCutterEPI400straincomparedtotheparentalTransforMAXEC100strainisapproximately4-to25-foldlower,dependingonthevector.Moreover,ashortincubationinthepresenceoftheCopyCutterInductionSolutioncanincreasethecopynumberofthevectortoimproveplasmidyields(Fig.3).
Figure1.Copy-numberofColE1-typeplasmidsisloweredupto25-foldinCopyCutter™EPI400™E.colicells.LanesC,TransforMax™EC100™cells;LanesUandI,uninducedorinducedCopyCutterEPI400cells.DNAextractsfromthesamenumberoflysedcells(basedonOD600)wereloadedperlane.
 |  |
| Figure2.DNAinsertsencodingtoxicgeneproductsweresuccessfullyclonedintohigh-copy-numbervectorsusingCopyCutter™EPI400™E.colicells.Aftersequencing,thefull-lengthacpPclonesinTransforMAX™EC100™cellswerefoundtocontainmultiplepointmutations. | Figure3.UninducedCopyCutter™EPI400™E.colicellscontainingaregBclone(laneU)areinducedtohigher-copynumber(laneI)usingtheCopyCutterInductionSolution.CrudeextractsofplasmidDNAwerepreparedfromcellsgrowninselectivemediaandanalyzedbyagarosegelelectrophoresis.Approximatelythesamenumberoflysedcells(basedonA600)wereloadedperlane. |
Benefits
- Maintainclonesatlow-copynumber,theninducetohighercopynumberforimprovedplasmidyield.
- Hightransformationefficiencywithclonesofallsizes.
- tonAforresistancetobacteriophagesT1andT5.
- lacZΔM15forblue/whitescreeningofrecombinants.
- Restrictionminus[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]genotypeenablesefficientcloningofmethylatedDNA.
- Endonucleaseminus(endA1)toensurehighyieldsofDNA.
- Recombinationminus(recA1)forgreaterstabilityoflargeclonedinserts.
Genotype
F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80dlacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu)7697galUgalKλ-rpsL(StrR)nupGtrfAtonApcnB4dhfr
CopyCutterEPI400ElectrocompetentE.coli
- Transformationefficiencyof>1x1010cfu/µgofpUC19.
CopyCutterEPI400ChemicallyCompetentE.coli
- Transformationefficiencyof>1x107cfu/µgofpUC19.
Reference
- Haskins,D.(2004)EpicentreForum11(5),6.
*Coveredbyissuedand/orpendingpatents.
ORDERINFORMATION
Tentubeseachcontaining50µLofcells(enoughcellsfor10transformations),CopyCutter™InductionSolutionandpUC19controlDNA.TheCopyCutter™InductionSolutionisprovidedata1,000Xconcentrationandisfiltersterilized.蚂蚁淘电商平台
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
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运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
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2021-09-10
服务名称：TALEN基因敲除大鼠定制 查看更多
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2018-03-20
博雅辑因（北京）生物科技有限公司在发布的CRISPR/Cas9 Validated PLA2G12A sgRNA; 基因敲除sgRNA供应信息，浏览与CRISPR/Cas9 Validated PLA2G12A sgRNA; 基因敲除sgRNA相关的产品或在搜索更多与CRISPR/Cas9 Validated PLA2G12A sgRNA; 基因敲除sgRNA相关的内容。 查看更多
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2018-06-02
细胞、细菌内基因的定点敲除、敲入 Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats（CRISPR）是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制，其中 II型 CRISPR/Cas免疫系统依赖 Cas9内切酶家族靶向和剪切外源 DNA。在这一系统中， crRNA（CRISPR-derived RNA）通过碱基配对与 tracrRNA（trans-ac... 查看更多
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2021-07-23
博雅辑因（北京）生物科技有限公司在发布的MUC1 Knockout HeLa Cell Line; MUC1 基因敲除细胞-CRISPR供应信息，浏览与MUC1 Knockout HeLa Cell Line; MUC1 基因敲除细胞-CRISPR相关的产品或在搜索更多与MUC1 Knockout HeLa Cell Line; MUC1 基因敲除细胞-CRISPR相关的内容。 查看更多
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2018-07-08
上海邦耀生物科技有限公司在发布的TALEN技术制备基因敲除小鼠供应信息，浏览与TALEN技术制备基因敲除小鼠相关的产品或在搜索更多与TALEN技术制备基因敲除小鼠相关的内容。 查看更多
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2021-09-18
动物模型是现代生命科学研究的重要工具，特别是基因工程小鼠和大鼠，在基因功能研究、人类生理病理机制研究及新药研发中起着不可替代的作用。近几年来，制备动物模型的基因敲除技术主要包括传统ES基因打靶、TALEN、CRISPR/Cas9， 近期又有一项新的基因敲除技术——TetraOne... 查看更多
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2017-11-19
上海博舜生物科技有限公司在发布的TALEN基因敲除大鼠定制供应信息，浏览与TALEN基因敲除大鼠定制相关的产品或在搜索更多与TALEN基因敲除大鼠定制相关的内容。 查看更多
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上海君伯生物科技有限公司在发布的基因敲除斑马鱼供应信息，浏览与基因敲除斑马鱼相关的产品或在搜索更多与基因敲除斑马鱼相关的内容。 查看更多
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2021-08-27
原文链接：http://shop.edigene.com/sales.php新的一年，新的开始，博雅辑因也带着满满的诚意归来。特意准备了 100 种基因敲除细胞裂解物试用装，免费提供给广大科研人员。 申请流程： 提交申请：下载试用装申请表，填写完毕后发送到邮箱 marketing@edigene.com，邮件标题：「试用装申请+货号」； 信息审核：信息审核为 2~3 个工作日，审核通过将会通过邮件或电话直接联系您，最终确认寄送地址及... 查看更多
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2021-08-06
赛业（广州）生物科技有限公司是TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）技术服务商之一，从事TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）技术服务，您可以搜索更多相关的TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）实验技术服务，以便挑选到性价比高，合适的TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）产品。而生物在线将会为您在TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）方面提供全方位的解决方案。 查看更多
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上海邦耀生物科技有限公司在发布的基因敲除和点突变大小鼠供应信息，浏览与基因敲除和点突变大小鼠相关的产品或在搜索更多与基因敲除和点突变大小鼠相关的内容。 查看更多
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2017-10-27
基因编辑技术指能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势，技术不断改进后，更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。... 查看更多
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crispr/cas9的介绍123
纪念死去q22021-09-08
CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。CRISPR/Cas9 系统通过将入侵噬菌体和质粒 DNA 的片段整合到 CRISPR 中，并利用相应的 CRISPR RNAs（crRNAs）来指导同源序列的降解，从而提供免疫性。向左转|向右转
CRISPCas系统介导的基因编辑技术论文123
ni林T373522021-08-01
近日，中国科学家利用基因编辑技术——CRISPR/Cas9，对抑制狗骨骼肌生长的基因（MSTN）进行了敲除，培育出两只肌肉发达的“大力神”狗，成功构建了世界首个基因敲除狗模型。科研人员所使用的“基因编辑技术”，顾名思义，能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势，技术不断改进后，更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。一、与诺奖“擦肩而过”的CRISPR/Cas9技术这不是CRISPR/Cas9这项明星技术第一次得到人们的关注。在此之前，有着“豪华版”诺奖之称的“2015年度生命科学突破奖”颁发给了发现基因组编辑工具“CRISPR/Cas9”的两位美女科学家——珍妮弗·杜德娜和艾曼纽·夏邦杰。二人更是获得了2015年度化学领域的引文桂冠奖——素有诺奖“风向标”之称，曾被认为是今年诺贝尔化学奖的最有力竞争者。那CRISPR/Cas9到底是一项什么技术，为何能够获得如此这般青睐，又何以在短短两三年时间内，发展成为生物学领域最炙手可热的研究工具之一，并有近700篇相关论文发表？它将来又会如何影响到我们的生活？CRISPR/Cas9是继“锌指核酸内切酶（ZFN）”、“类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）”之后出现的第三代“基因组定点编辑技术”。与前两代技术相比，其成本低、制作简便、快捷高效的优点，让它迅速风靡于世界各地的实验室，成为科研、医疗等领域的有效工具。
酿酒酵母基因敲除实验顺利需多少时间 微生物 学术 科研 互...123
石原忍2021-08-04
做黄单胞，在通过Tn5构建转化子库之后，通过致病力筛选、Tail-PCR获得侧翼序列、比对获得全基因之后，将几个可能与致病力相关的基因做了敲除，现在正在构建互补载体，已经做了敲除转化子的胞外酶活性测定、胞外多糖分泌测定、生长曲线、致病性测定等等，不过不知道将互补做完了之后还有什么可以做的。
通过敲除来研究基因的功能，所谓的敲除不外乎有三种情况：1）单交换插入抗性基因使原基因失活；2）抗性基因双交换替换掉原基因；3）同框缺失即完整的使原基因敲除掉。
第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大，前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子，但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect，所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的，如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系，做了会更好。
通过敲除来研究基因的功能，所谓的敲除不外乎有三种情况：1）单交换插入抗性基因使原基因失活；2）抗性基因双交换替换掉原基因；3）同框缺失即完整的使原基因敲除掉。
第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大，前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子，但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect，所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的，如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系，做了会更好。
有人用CRISPR/Cas9系统做细胞基因敲除吗交流下 分子生物...123
阿瑟58342021-08-20
基因敲除是上个世纪90年代出现的最新外源DNA导入技术。分为完全基因敲除和条件基因敲除。
基因敲除技术的产生和发展建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，自身发展的同时也促进了相关技术的进一步发展。流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。
目前，在ES细胞中进行同源重组已经成为一种研究特定基因甚至基因的特定结构域和对小鼠染色体组上任意位点进行遗传修饰的常规技术。1997年通过基因打靶获得的突变小鼠就已经超过千种，近年来随着基因敲除技术的不断进步，尤其是DNA重组技术和小鼠基因组测序的完成，使得建立基因敲除小鼠的周期大大减少，使基因敲除小鼠数目大大增加。各国也都建立了突变体小鼠及转基因小鼠的数据库。
06年8月七日，美国国立卫生研究院宣布将投巨资启动敲除小鼠基因组计划，目的是建立一个完善、免费的小鼠基因组突变基因数据库，研究人员可以利用基因敲除小鼠研发能为治疗癌症、心脏病、神经退行性疾病、糖尿病等人类遗传疾病提供更为优秀的动物模型。展开
基因敲除技术的产生和发展建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，自身发展的同时也促进了相关技术的进一步发展。流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。
目前，在ES细胞中进行同源重组已经成为一种研究特定基因甚至基因的特定结构域和对小鼠染色体组上任意位点进行遗传修饰的常规技术。1997年通过基因打靶获得的突变小鼠就已经超过千种，近年来随着基因敲除技术的不断进步，尤其是DNA重组技术和小鼠基因组测序的完成，使得建立基因敲除小鼠的周期大大减少，使基因敲除小鼠数目大大增加。各国也都建立了突变体小鼠及转基因小鼠的数据库。
06年8月七日，美国国立卫生研究院宣布将投巨资启动敲除小鼠基因组计划，目的是建立一个完善、免费的小鼠基因组突变基因数据库，研究人员可以利用基因敲除小鼠研发能为治疗癌症、心脏病、神经退行性疾病、糖尿病等人类遗传疾病提供更为优秀的动物模型。展开
手把手教你学会 CRISPR Cas9 基因敲除技术123
寒月的梦2021-08-24
Crispr/cas9是第三代基因敲除技术，上半年频繁发表于Science，Nature等杂志。由于老板有想法做基因敲除，现在在研究这方面的文献。发现其中有很多问题，本人研二，吧里有没有其他人感兴趣。一起交流！QQ415968281
求助请问：有哪位高手作过小鼠基因敲除,此项技术国内是否成熟。123
2021-08-15
我自己尝试做了好几次基因敲除，效果都不好，想着干脆直接送出去算了，不知道行不行？
将目的基因与质粒结合的过程中,是不是必须将目的基因的两端与切开的质粒...123
妖°媚9dS2021-08-22
这是个理解的问题目的基因与质粒结合利用了碱基互补配对但质粒进入受体细胞不需要碱基互补配对即使整合到染色体的dna上你也只能说整合过程利用了碱基互补陪读而不是那个导入过程
动物nrf2基因敲除后为什么还会表达123
宵夜葝蠐692021-08-09
基因敲除动物模型怎么做利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2.诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础，但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。
细胞器的观察实验——电镜切片资讯123
冰雨的冰雪世纪2021-07-31
问下各位大神，用在线设计的软件找PAM后，还需要找functiondomains，从而排除一些PAM吗？有没有一些比较好的在线设计网站。
大肠杆菌CRISPRCas9系统基因敲除简介 123
BMW9272021-09-04
CRISPR(clustered,regularlyinterspaced,shortpalindromicrepeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3
类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统
只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件。
目前，来自Streptococcuspyogenes的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9蛋白（含
有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合
成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的
DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。
由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前最高效的基因组编辑系统。
类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统
只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件。
目前，来自Streptococcuspyogenes的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9蛋白（含
有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合
成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的
DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。
由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前最高效的基因组编辑系统。
《鼠年说鼠》第十四期:CRISPR/Cas9条件性基因敲除鼠如何鉴定?123
no1lbt2021-08-14
请教各位大神，CRISPR/Cas9基因敲除的小鼠（完全性敲除）构建后，鉴定的方法是不是只要PCR扩增进行基因型鉴定就可以了？核型鉴定及southernblot检测需不需要呢？谢谢！
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