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MCLAB/2x BlueStar™ PCR Master Mix/BSPM-200/1 Ea
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MCLAB/2x BlueStar™ PCR Master Mix/BSPM-200/1 Ea
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MCLab
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BSPM-200
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2xBlueStarTMPCRMasterMixcontainsallthenecessaryreagentsandagelloADIngdye.ThePCRmixcanbedirectlyloadedontoaDNAgel.

 

Description:

The2XBlueStar™PCRMasterMixisapre-mixed2XconcentratedsolutioncontainingHoTaq™DNAPolymerase,reactionbuffer,gelloadingdye,MgCl2anddNTPs.TheHoTaq™DNAPolymeraseoffershotstartPCRforroomtemperaturereactionset-up.The2XBlueStar™PCRMasterMixisidealforapplicationsrequiringhighyieldsandroutinePCRlaboratoryuse,suchasSNPanalysisandhighthroughputend-pointPCR.

Comparison:
bluestar-comparison.png

Features:

  • HighTargetYield:2XBlueStar™PCRMasterMixisdesignedwithabuffersystemoptimizedformaximumrobustnessandexceptionalpolymeraseperformance.
  • GreaterSpecificity:Hot-startPCRpreventsnon-specificamplificationwhileincreasingtargetyield.
  • EnhancedSensitivity: TheHoTaq™DNApolymeraseprovidessuperioramplificationregardlessoftemplateconcentration.
  • ConvenientFormat:TheconvenientmastermixonlyrequirestheadditionofPCRprimersandDNAtemplateforamplication.

RecommendedStorageCondition:Roomtemperature

PCRconditions:
1.Preparethereactionatroomtemperature.
2.Addtemplate,primersandH2Otomakeup½ofthedesiredtotalvolume,andthenaddequalvolumeof2xmastermix.
3.ThemastermixcontainsahighfidelityDNApolymerase.
4.Theelongationspeedofthismastermixisabout2Kbperminute.
5.Thebluedyerunsatabout1Kbpositiononanagarosegel.
 

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8月23日,《核酸研究》(Nucleic Acids Research)在线发表了生化与细胞所王恩多研究组的*新研究成果“利用亮氨酸tRNA基因敲除菌株研究酵母亮氨酸tRNA的体内功能”。氨基酰-tRNA合成酶(aaRS)催化tRNA的氨基酰化反应,为蛋白质合成提供原料。合成正确的氨基酰-tRNA对保证蛋白质合成的质量控制至关重要。aaRS催化反应的专一性不仅涉及到aaRS,也与tRNA有关。目前,通常采用T7 ... 查看更多>
 预实验:Cas9导入细胞方法:尝试各种方法,如脂质体类转染、电转、慢病毒感染、腺病毒感染等,确定高效导入Cas9方法。药物浓度预实验:降低后续 查看更多>
基因敲除 基因敲除(knockout)是指一种遗传工程技术,针对某个序列已知但功能未知的序列,改变生物的遗传基因,令特定的基因功能丧失作用,从而使部分功能被屏障,并可进一步对生物体造成影响,进而推测出该基因的生物学功能。基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点,以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性,是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。这项技术的诞生可以... 查看更多>
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CRISPR/Cas9 技术是近年来发展起来的可以对基因组完成精确修饰的一种技术,可完成基因定点 InDel 突变、敲入、多位点同时突变和小片段的删失等。与传统的 TALEN 和 ZFN 技术相比,CRISPR/Cas9 系统更便捷、高效,应用也更广泛,目前该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌的基因组精确修饰。为让广大从事医学、生命科学事业的人员更多的了解 CRISPR/Cas9 技术方法,更 查看更多>
上海君伯生物科技有限公司在发布的基因敲除斑马鱼供应信息,浏览与基因敲除斑马鱼相关的产品或在搜索更多与基因敲除斑马鱼相关的内容。 查看更多>
2017 年 4 月,维通达自主研发的基因修饰明星小鼠模型 NPG 小鼠,荣登国际著名学术期刊《Cell》,人源化 NPG 荣登《Molecular Therapy》。为此,维通达特推出【大小鼠基因敲除服务 买一赠一活动】。我们用更便捷、更专业、更优质的动物模型,助您成就科研梦想。活动时间:2017 年 6 月 1 日~2017 年 8 月 31 日活动内容:基因敲除小鼠 49800(买一赠一) 立即购买 >> 1.最快... 查看更多>
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话说CRISPR技术的利与弊123
愿萌安好5311262017-10-29
优点:使用方便,构建简单,可以覆盖大多数区域的基因编辑需求,成本低。
缺点:质粒仍然较大,转染难度相对较大。具有碱基识别偏好性,局限了基因编辑的运用范围,而且会导致不同基因位点编辑效率不同。筛选仍然需要较大工作量。

各位同仁大家好,最近在尝试利用CRISPR/cas9技术敲除基因,苦于手里头资源有限,只有lentiCRISPRv2以及相应的包装体系,没有pSpCas9(BB)-2A-Puro(PX459)V2.0,无奈公司货期较久,想立刻开展实验,不知哪位同仁有此质粒并愿意交换,不甚感激。


最近几年基因编辑技术异常火爆,CRISPR/Cas9技术面世以后,弥补了传统基因编辑技术的诸多不足,使得基因的“任意编辑”变得越来越容易。也因此,CRISPR/Cas9技术当仁不让的成为基因编辑技术的“王牌”,大有一副取而代之的势头。所以这里就给大家简单介绍一下CRISPR/Cas9的技术原理!
一、CRISPR/Cas9系统的构成
CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中,CRISPR系统共分成3类,其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白(Cas蛋白)共同发挥作用,而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可,这为其能够广泛应用提供了便利条件。目前,来自Streptococcus pyogenes的CRISPR/Cas9系统应用最为广泛。
Cas9蛋白(含有两个核酸酶结构域,可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物,然后通过PAM序列结合并侵入DNA,形成RNA-DNA复合结构,进而对目的DNA双链进行切割,使DNA双链断裂。
研究人员为了将CRISPR/Cas9技术发展为高效的基因打靶工具,又进行了优化和改造。Cong, L.等人[1]在不影响系统效率的情况下,将crRNA和tracrRNA融合为一条RNA。通过这种简化,CRISPR/Cas9系统现仅包括两个元素:Cas9蛋白和sgRNA(single guide RNA)。因此现在人们将CRISPR/Cas9技术也称为Cas9/sgRNA技术。
二、CRISPR/Cas9技术的基因编辑机制
CRISPR/Cas9通过对预设的DNA位点进行切割,造成DNA双链断裂(DSB, double strand break)。这种DNA的损伤可以启动细胞内的修复机制,主要包括两种途径:
一是低保真性的非同源末端连接途径(NHEJ,Non-homologous end joining),此修复机制非常容易发生错误,导致修复后发生碱基的缺失或插入(Indel),从而造成移码突变,最终达到基因敲除的目的。NHEJ是细胞内主要的DNA断裂损伤修复机制。利用靶向核酸酶可以在受精卵水平高效的实现移码突变,从而制备基因敲除模式动物。CRISPR/Cas9技术的出现,使得无需再使用相应物种的ES细胞系就可以制备基因敲除模式生物,且已成功应用于小鼠[5]、大鼠[6]、猪[7]、灵长类[8]、果蝇[9]等等。
第二种DNA断裂修复途径为同源介导的修复(HR, homology-directedrepair),这种基于同源重组的修复机制保真性高,但是发生概率低。在提供外源修复模板的情况下,靶向核酸酶对DNA的切割可以将同源重组发生的概率提高约1000倍[10]。利用这种机制可以实现基因组的精确编辑,如:条件性基因敲除、基因敲进、基因替换、点突变等等。
CRISPR/Cas9技术以自己操作的便捷性,高效的基因编辑能力获得青睐,成为当下科研工作者的新宠儿。各大实验室纷纷加入开发CARISPR/Cas9技术的行列中,媒体也将之评为21世纪最有影响的十大技术之一。让我们跟随CRISPR/Cas9技术的脚步一起加强科研基础的建设,推动生物科研的进步!

详细信息你可以参考:http://www.bbctg.com.cn/show_2/1733.html
载体里有没有抗性基因啊
这要具体分析,如果这个基因存在可变剪接,那就看这个基因是否有外显子(不为三的整倍数的外显子)是这些转录本里共有的,如果是就可以在这个外显子上设计sgRNA,这样就可以敲除掉这个外显子和其后的外显子(因为移码突变导致的提前翻译终止)。如果没有这样的外显子那就只能在不同的外显子上设计多条sgRNA,然后筛选这几个转录本都敲除成功的细胞系或实验动物就可以了(毕竟应用Cas9技术能够实现多基因敲除)。
基因敲除123
13685953206zha2021-08-31
通过敲除来研究基因的功能、胞外多糖分泌测定,通过致病力筛选,如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系,已经做了敲除转化子的胞外酶活性测定所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的,将几个可能与致病力相关的基因做了敲除,前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子,所谓的敲除不外乎有三种情况;3)同框缺失即完整的使原基因敲除掉。第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大,做了会更好,现在正在构建互补载体,但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect;2)抗性基因双交换替换掉原基因做黄单胞、比对获得全基因之后,不过不知道将互补做完了之后还有什么可以做的、致病性测定等等、Tail-PCR获得侧翼序列,在通过Tn5构建转化子库之后:1)单交换插入抗性基因使原基因失活
这是个理解的问题目的基因与质粒结合利用了碱基互补配对但质粒进入受体细胞不需要碱基互补配对即使整合到染色体的dna上你也只能说整合过程利用了碱基互补陪读而不是那个导入过程
将外源基因引入细胞或动物体中对于生物学及药学研究至关重要。转基因的应用包含但不限 于:
1、过表达目的蛋白,用以检测基因表型;
2、荧光标签标记目的蛋白,用以跟踪其细胞 定位;
3、引入野生型等位基因。
中山大学人类胚胎遗传性致病基因修复实验采取了CRISPR/Cas9基因编辑技术。该技术是近年在锌指核酸酶(ZFN)技术、类转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)技术之后出现的新型基因编辑技术,原理来自细菌的适应性免疫防御机制。相比传统的基因打靶技术和其他基因编辑技术,CRISPR/Cas9更为精确、高效和经济。
  科学家发现,细菌在遭遇噬菌体等病毒侵染之后,可以获得其部分DNA(脱氧核糖核酸)片段并整合进基因组形成记忆,当再次遭到入侵时,转录出相应的RNA(核糖核酸),利用其中的“定位信息”引导Cas蛋白复合物定位和切割、彻底地摧毁入侵病毒的DNA。CRISPR/Cas9技术就是利用这一原理,用一种定制的RNA引导Cas,对预设DNA位点进行切割,造成DNA断裂,启动细胞内基因组修复机制,实现基因敲除、特异突变的修复或引入和定点转基因等。
谁才是CRISPR技术的所有者?123
75█基佬天降█2021-09-06
近年来,CRISPR/Cas9风暴席卷全球。这项基因组编辑技术在短短几年内迅速应用于世界各地的实验室,并催生了上千篇文章的发表。然而,麻省理工学院(MIT)的《Technology Review》杂志提出了一个问题,谁才是CRISPR技术的所有者? 立即索取更多资料 生物通 www.ebiotrade.com
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近年来,CRISPR/Cas9风暴席卷全球。这项基因组编辑技术在短短几年内迅速应用于世界各地的实验室,并催生了上千篇文章的发表。然而,麻省理工学院(MIT)的《Technology Review》杂志提出了一个问题,谁才是CRISPR技术的所有者?生物通 www.ebiotrade.com
一个月前,“科学突破奖”(Breakthrough Prize)揭晓。加州大学伯克利分校的Jennifer Doudna和德国亥姆霍兹传染研究中心的Emmanuelle Charpentier因在CRISPR技术方面的重要贡献而获奖,且每人获得了300万美元的奖金。
这一领域的另一位风云人物,Broad研究院的张锋(Feng Zhang)虽然没有获得科学突破奖,但在今年4月获得了CRISPR/Cas9的首个专利。他的研究中心控制着这一技术的每个重要商业应用。生物通 www.ebiotrade.com
那么问题来了,这个备受瞩目的奖项和专利为何会落入不同人的手中?究竟是谁发明了它?“这一领域的知识产权相当复杂,”CRISPR Therapeutics公司的CEO Rodger Novak谈道。Emmanuelle Charpentier是这家公司的创始人之一。
Tech Review的记者Antonio Regalado指出,张锋与Doudna共同创立了Editas Medicine公司,它获得了Broad的技术授权。不过,在张锋成功申请专利之后,Doudna就与该公司断绝了关系。她将她的知识产权(专利申请中)授予了另一家竞争性的公司Intellia Therapeutics。然而,让事情更加复杂的是,Charpentier又将她在同一专利申请中的权利出售给了CRISPR Therapeutics。生物通 www.ebiotrade.com
此外,围绕这一技术的科学信用,那也是错综复杂。2012年夏天,Doudna、Charpentier及她们的团队发表了一篇文章,证明CRISPR/Cas9系统可以作为一种可编程的DNA编辑工具。半年后,张锋博士以及哈佛大学的George Church发表文章称它可应用于人类细胞,不久后,Doudna也发表了类似的结果。
但是,张锋表示他对Doudna和Charpentier的工作知之甚少。为了支持他的专利申请,他提交了实验室笔记本的照片,表示他在2012年年初就开始了这方面的研究,早于Doudna和Charpentier。生物通 www.ebiotrade.com
Charpentier表示:“我可以说的是,我和Jennifer Doudna是在我的实验室中开展研究。这里的一切都很夸张,因为这是一项人们很容易学会的技术。事情发生得太快了。”
Regalado在文中写道:“目前还没有CRISPR药物。但是如果CRISPR真的如科学家想象得那么重要,对这一基本技术的商业控制将价值数十亿美元。”也许,这场专利之战才刚刚开始。(生物通 薄荷)

我想问一个基础问题啊,用CRISPR/cas系统敲除某个基因后,如果突变株表型没法通过肉眼分辨,怎么把突变株找出来?要用到什么Marker吗?还是需要对细胞逐个测序检测?

如果是逐个检测,那就涉及到效率问题了,当效率比较低的时候,岂不是工作量很大?

还有cas9基因会残留在细胞里吗?

crispr/cas9的介绍123
纪念死去q22021-09-08
CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御,可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。CRISPR/Cas9 系统通过将入侵噬菌体和质粒 DNA 的片段整合到 CRISPR 中,并利用相应的 CRISPR RNAs(crRNAs)来指导同源序列的降解,从而提供免疫性。向左转|向右转