
Description
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Transfection Reagent for DI-TNC1 Cells (Rat Brain Astrocyte Cells)
- A nanoparticle-based liposome formulation
- Transfection protocols provided for transfection of proteins, DNA, mRNA, siRNA, shRNA and miRNA
- Produce higher level of recombinant protein expression with minimal disruption of normal cell function
- Generate physiologically relevant data you can trust
- Effective for plasmid DNA/siRNA co-transfection
- Easy-to-use transfection protocol with reproducible results
- Low cytotoxicity
- Download DI-TNC1 transfection protocol: [PDF]
- Download DI-TNC1 CRISPR/Cas9 transfection protocol: [PDF]
- Download PowerPoint presentation for DI-TNC1 cells transfection kit: [PPT]
- Developed and manufactured by Altogen Biosystems
Transfection Efficiency:
Reagent exhibits at least 77% transfection efficiency of siRNA delivery. Transfection efficiency was determined by qRT-PCR.
Transfection Protocol and MSDS:
Download Altogen Biosystems DI-TNC1 Transfection Protocol: [PDF]
Download MSDS: [PDF]
DI-TNC1 Cell Line:
Astrocytes are the most abundant type of cells in the central nervous system that perform a variety of different functions, including support of brain metabolism, the primary focus of which is on the relationship between astrocytes and neurons. Astrocytes are cells that promote the growth of neurons by providing nourishment and support. DI-TNC1 is derived from cultures of interbrain tissue of one-day-old rats and comprises rat brain astrocytes. Cultured astrocytes have been shown to promote neurite outgrowth by producing adhesion molecules found either on the cell surface or in the extracellular matrix. The cells retain characteristics of type 1 astrocytes including glial fibrillary acidic protein (GFAP) immunoreactivity. The DI-TNC1 cell line produces alpha 2 macroglobulin similar to amounts found in primary astrocytes but produces transferrin in much lesser amounts. Examination by immunostaining indicated SV40 T antigen was detected in the nuclei of over 95 percent of the cells. Research has shown DI-TNC1 cells exhibit many similarities to neonatal astrocytes, and the cell line is utilized in biomedical research for studying the interactions between glia and neurons, as well as astrocyte cell functions related to energy metabolism. The DI-TNC1 cells resemble astrocytes found in human infants. Neurite outgrowth is the development of any projections in young nerve cells. At the early stages of growth, it is hard to discern whether the projections are dendritic or axonic. The cells from the DI-TNC1 cell line have exhibited appreciable neurite outgrowth. Altogen Biosystems manufactures a nanoparticle-based transfection reagent kit for the DI-TNC1 rat astrocyte cell line, an essential tool in finding the cure for various brain-related diseases.
Data:
Figure 1. Cyclophilin B silencing efficiency was determined by qRT-PCR in the DITNC1 cells transfected by Cyclophilin B siRNA or non-silencing siRNA control following the recommended transfection protocol. Cyclophilin mRNA expression levels were measured 48 hours post-transfection. 18S rRNA levels were used to normalize the Cyclophilin B data. Values are normalized to untreated sample. Data are presented as means ± SD (n=6).
Figure 2. Protein expression of Cyclophilin B in DI-TNC1 cells. DNA plasmid expressing Cyclophilin B or siRNA targeting Cyclophilin B were transfected into DI-TNC1 cells following Altogen Biosystems transfection protocol. At 72 hours post-transfection the cells were analyzed by Western Blot for protein expression levels (normalized by total protein, 10 µg of total protein loaded per each well). Untreated cells used as a negative control.
Selected in vivo transfection product citations (ALTOGEN® IN VIVO Transfection Kits used in the following publications):
- Nature. 2008 454(7203):523-7. Innate immunity induced by composition-dependent RIG-I …Saito et al [PDF]
- Am J Pathology. 2010 177(4):1870-80. Role of ocular complement factor H in a murine model … Lyzogubov et al [PDF]
- Nature Biotechnology. 2011 29(4):341-5. Delivery of siRNA to the mouse brain by … Alvarez-Erviti et al [PDF]
- Cancer Research. 2011 71(15):5144-53. Inhibition of miR-193a expression by… Iliopoulos et al [PDF]
- RNA. 2010 16(11):2108-19. RNase L releases a small RNA from HCV RNA that refolds … Malathi et al [PDF]
- Diabetologia. 2012 55(7):2069-79. The p47phox- and NADPH oxidase organiser 1 … Youn et al [PDF]
- British Journal of Cancer. 2012 107(3):516-26. TIGAR induces p53-mediated cell-cycle … Madan et al [PDF]
- Hypertension. 2014 63(2):353-61. Tissue transglutaminase contributes to … Liu et al [PDF]
- Circulation Research. 2010 15;107(8). Kruppel-like factor-4 transcriptionally regulates … Cowan et al [PDF]
- Hypertension. 2012 59(1):158-66. Role of uncoupled endothelial nitric oxide synthase … Gao et al [PDF]
- Jounal of Biological Chemistry. 2012 287(4):2907. Chaperoning of mutant p53 protein … Gogna et al [PDF]
- PLoS Pathogens. 2012 8(8) Uridine composition of the poly-U/UC tract of HCV RNA … Schnell et al [PDF]
- J Proteome Res. 2012(11) Retinal proteome analysis in a mouse model of oxygen-induced … Kim et al [PDF]
- J Transl Med. 2010 15;8:133. Prevention of hyperglycemia-induced myocardial apoptosis … Zhang et al [PDF]
- Mol Cell Biol. 2013 33(7). SCO2 induces p53-mediated apoptosis by Thr845 phosphorylation … Madan et al [PDF]
- Hypertension. 2015 65(2):430-9. Neurokinin 3 receptor and phosphocholine transferase… Parchim et al [PDF]
- Gastroenterology. 2011 141(2) Differential type I interferon-mediated autophagic trafficking … Desai et al [PDF]
- PLoS Pathog. 2014 10(10) Exosomes from hepatitis C infected patients transmit HCV … Bukong et al [PDF]
DI-TNC1 Transfection Kit
Altogen Biosystems:
Altogen Biosystems provides pre-optimized transfection kits and electroporation products for life science research. Transfection products are developed for individual cancer cell line and transfection protocols are optimized to enable high transfection efficiency of biomolecules. Altogen Biosystems developed in vivo delivery products for small animal research, mouse and rat targeted tissue delivery: liver targeted, pancreas targeted, kidney targeted, PEG-Liposome-, Nanoparticle-, Lipid-, and Polymer-based in vivo transfection kits. Advanced formulation of reagents and optimized transfection protocols provide efficient intracellular delivery of biomolecules. Read more about transfection technology at Altogen’s Transfection Resource.
Altogen Labs Research Services:
Altogen Labs provides GLP-compliant contract research studies for pre-clinical research, IND applications, and drug development. Biology CRO services include: Xenograft models (30+), development of stable cell lines, ELISA assay development, cell-based and tissue targeted RNAi studies, safety pharm/tox assays, and other studies (visit AltogenLabs.com).
Volume Options:
- 0.5 ml (Catalog #1747)
- 1.5 ml (Catalog #1748)
- 1.5 ml CRISPR (Catalog #2138)
- 8.0 ml (Catalog #7036)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
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转染技术的要点及转染试剂正确选择
转染技术是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控,突变分析等的常规工具。随着功能研究的兴起,其应用越来越广泛。以下就向大家介绍一些转染的技术要点及市面上主要的转染试剂类型的选择。
常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24-96小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染,外源DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。
转染效率收多种因素影响,主要因素有下面几个:
1.细胞培养物
健康的细胞培养物是成功转染的基础。不同细胞有不同的培养基,血清和添加物。低的细胞代数(<50)能确保基因型不变。高的转染效率需要一定的细胞密度,一般的转染试剂都会有专门的说明。推荐在转染前24小时分细胞,这将提供正常细胞代谢,增加对外源DNA摄入的可能。一定要避免细菌,支原体或真菌的污染。
2.血清
大多数培养基在使用前需要加血清。胎牛血清(FCS)经常用到,便宜一点的有马或牛血清。通常的,血清是一种包含生长因子及其它辅助因子的不确切成分的添加物,对不同细胞的生长作用有很大的差别。血清质量的变化直接影响转染效率。因此在转染前建议先测(转右)试出对细胞生长良好的血清批号,转染时用同一批号的血清,并同时做负对照(不加转染试剂及外源DNA)以测试细胞生长是否正常。有些转染技术如脂质体转染在有血清存在情况下效率很低,因此在转染前要除血清。但有些对此敏感的细胞如原代细胞会受到损伤,甚至死亡导致转染效率极低。
3.载体构建
转染载体的构建(病毒载体,质粒DNA,RNA,PCR产物,寡核苷酸等)也影响转染结果。病毒载体对特定宿主细胞感染效率较高,但不同病毒载体有其特定的宿主,有的还要求特定的细胞周期,如逆转录病毒需侵染分裂期的宿主细胞,此外还需考虑一些安全问题(如基因污染)。除载体构建外,载体的形态及大小对转染效率也有不同的影响,如前面提到的超螺旋及线性DNA对瞬时和稳定转染的影响。如果基因产物对细胞有毒性作用,转染也很难进行,因此选择组成或可调控,强度合适的启动子也很重要,同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。
4.DNA质量
DNA质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术(如脂质体等)基于电荷吸引原理,如果DNA不纯,如带少量的盐离子,蛋白,代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成及转染的进行。核酸纯化世界第一品牌德国Qiagen公司提供的超纯质粒抽提试剂盒,能达到两倍2xCsCl梯度离心以上的纯度效果,使您不必为DNA质量操心。此外,对一些内毒素敏感的细胞(如原代细胞,悬浮细胞和造血细胞),QIAGEN还提供可去除内毒素污染的质粒抽提试剂盒,在质粒抽提过程中有效去除脂多糖分子,保证理想的转染效果。
5.转染技术
转染技术的选择对转染结果影响也很大,许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例,细胞数量,培养及检测时间等。一些传统的转染技术,如DEAE右旋糖苷法,磷酸钙法,电穿孔法,脂质体法各有利弊,其主要原理及应用特点见下:
转染方法原理应用特点
DEAE-右旋糖苷法
带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞瞬时性转染相对简便、结果可重复但对细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清
磷酸钙法
磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞稳定转染,瞬时性转染不适用于原代细胞,操作简便但重复性差,有些细胞不适用。
电穿孔法
高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA通过膜上形成的小孔导入稳定转染,瞬时性转染,所有细胞适用性广但细胞致死率高,DNA和细胞用量大,需根据不同细胞类型优化电穿孔实验条件
阳离子性的脂质体法
带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞稳定转染
瞬时性转染,所有细胞适用性广,转染效率高,重复性好但转染时需除血清
转染效果随细胞类型变化大
病毒介导法
逆转录病毒通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中稳定转染,特定宿主细胞可用于难转染的细胞、原代细胞,体内细胞等,但携带基因不能太大
细胞需处分裂期,需考虑安全因素,腺病毒瞬时转染,特定宿主细胞可用于难转染的细胞,需考虑安全因素。
Biolistic颗粒传递法
将DNA用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的颗粒用弹道装置投射入细胞,DNA在胞内逐步释放,表达瞬时性转染可用于:人的表皮细胞,纤维原细胞,淋巴细胞系以及原代细胞
显微注射法
用显微操作将DNA直接注入靶细胞核稳定转染,瞬时性转染转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞。
EntransterTM-R4000是英格恩生物(EngreenBiosystem)最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA,而且针对mRNA等长链RNA优化。由于纳米技术的应用,EntransterTM-R4000能做到高达90%的转染效率和60-90%的沉默效率,对难转染细胞和原代细胞也非常适用。
先附上一篇英格恩生物RNA转染试剂转染mir-346至Jurkat细胞研究甲状腺的文献,以供参考。
RNA转染试剂转染Mir-346至Jurkat细胞研究甲状腺.pdf(5947.72k)
对重复性要求不高的试验,一般没有问题的,只不过可能需要增加一些转染试剂用量了。
为了避免这个问题,推荐收到货之后,进行适当分装,用多少,拿出来多少最好。
当然,如果考虑成本这块的话,义翘sinofection可以考虑哦~
如题,PolyplusTransfection转染试剂在中国区的代理商有哪些?求推荐1-2个靠谱的,谢谢!

