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Altogen/DU145 Transfection Kit (Prostate Carcinoma Cells)/1.5 ml CRISPR/2140
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Altogen/DU145 Transfection Kit (Prostate Carcinoma Cells)/1.5 ml CRISPR/2140
品牌 / 
Altogen Labs
货号 / 
2140
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Transfection Reagent for DU145 Cells (Prostate Carcinoma Cells, HTB-81)

  • Proprietary cationic lipids formulation
  • High transfection efficiency of small RNA (siRNA, shRNA, miRNA), mRNA, pDNA
  • Effective and robust intracellular delivery
  • Work in the presence of serum
  • A proven reagent for establishing stable DU145 cell lines
  • Optimized transfection protocols are adapted for use with both standard & reverse transfection methods
  • Download DU145 transfection protocol: [PDF]
  • Download DU145 CRISPR/Cas9 transfection protocol: [PDF]
  • Download PowerPoint presentation for DU145 cells transfection kit: [PPT]
  • Developed and manufactured by Altogen Biosystems

Transfection Efficiency:

Reagent exhibits at least 75% transfection efficiency of siRNA delivery. Transfection efficiency was determined by qRT-PCR.

Transfection Protocol and MSDS:

Download Altogen Biosystems Transfection Protocol: [PDF]

Download MSDS: [PDF]

DU145 Cell Line:

According to American Cancer Society, over 161,000 men are estimated to be diagnosed with prostate cancer by the end of 2017. It is the third primary cause of male cancer deaths, in the United States. Prostate cancer is the most prevalent cancer especially in older males and can be successfully cured if diagnosed early. However, when it has spread to other parts of the body, more complicated treatment is required. The DU-145 prostate cancer cell line comprises androgen independent cells with a moderate ability to metastasize. The DU-145 cell line was established from human prostate cancer cells. These cells exhibit an epithelial cell morphology and possess metastatic potential. DU-145 cells are commonly used, along with PC3 cell line, in the study of prostate cancer, which affects many people (mainly men over the age of 50). This cell line is considered one of the “classical” prostate cancer cell lines. These cells are not sensitive to hormones and fail to express prostate-specific antigen (PSA). DU-145 cells are epithelial-like adherent cells growing as monolayers. The DU-145 line is not measurably hormone sensitive. It is only weakly positive for acid phosphatase, and isolated cells form colonies in soft agar. Analyses of the cell line have revealed microvilli, tonofilaments, and desmosomes. DU-145 do not express prostate antigen but do express functional receptor activator of NF-kappaB and androgen receptor. It has been shown glucosamine suppresses proliferation of DU-145. Transfection studies carried out using established cell lines significantly aid cancer research. Altogen Biosystems offers efficient lipid-based transfection reagent kits for the DU-145 prostate cancer cell line.

Data:

DU145 Transfection Reagent

Figure 1. siRNAs targeting Lamin A/C mRNA or non-silencing control siRNA were transfected into DU-145 cells following the recommended protocol. At 48 hours post-transfection the cells were analyzed by qRT-PCR for Lamin A/C gene expression levels. 18S rRNA levels were used to normalize the Lamin A/C data. Values are normalized to untreated sample. Data are means ± SD (n=4).

DU145-cells-transfection-protocol

Figure 2. Protein expression of Lamin A/C in DU145 cells. DNA plasmid expressing Lamin A/C or siRNA targeting Lamin A/C were transfected into DU145 cells following Altogen Biosystems transfection protocol. At 72 hours post-transfection the cells were analyzed by Western Blot for protein expression levels (normalized by total protein, 10 µg of total protein loaded per each well). Untreated cells used as a negative control.

Selected in vivo transfection product citations (ALTOGEN® IN VIVO Transfection Kits used in the following publications):

  • Circulation Research. 2010 15;107(8). Kruppel-like factor-4 transcriptionally regulates … Cowan et al [PDF]
  • Hypertension. 2012 59(1):158-66. Role of uncoupled endothelial nitric oxide synthase … Gao et al [PDF]
  • Jounal of Biological Chemistry. 2012 287(4):2907. Chaperoning of mutant p53 protein … Gogna et al [PDF]
  • J Proteome Res. 2012(11) Retinal proteome analysis in a mouse model of oxygen-induced … Kim et al [PDF]
  • Mol Cell Biol. 2013 33(7). SCO2 induces p53-mediated apoptosis by Thr845 phosphorylation … Madan et al [PDF]
  • Hypertension. 2015 65(2):430-9. Neurokinin 3 receptor and phosphocholine transferase… Parchim et al [PDF]

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DU145 Transfection Kit

Altogen Biosystems:
Altogen Biosystems provides pre-optimized transfection kits and electroporation products for life science research. Transfection products are developed for individual cancer cell line and transfection protocols are optimized to enable high transfection  efficiency of biomolecules. Altogen Biosystems developed in vivo delivery products for small animal research, mouse and rat targeted tissue delivery: liver targeted, pancreas targeted, kidney targeted, PEG-Liposome-, Nanoparticle-, Lipid-, and Polymer-based in vivo transfection kits. Advanced formulation of reagents and optimized transfection protocols provide efficient intracellular delivery of biomolecules. Read more about transfection technology at Altogen’s Transfection Resource.

Altogen Labs Research Services:

Altogen Labs provides GLP-compliant contract research studies for pre-clinical research, IND applications, and drug development. Biology CRO services include: Xenograft models (30+), development of stable cell lines, ELISA assay development, cell-based and tissue targeted RNAi studies, safety pharm/tox assays, and other studies (visit AltogenLabs.com).

Volume Options:

  • 0.5 ml (Catalog #1749)
  • 1.5 ml (Catalog #1750)
  • 1.5 ml CRISPR (Catalog #2140)
  • 8.0 ml (Catalog #7038)

AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。 


Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒


120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。

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基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。目前,最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物,它们的特点和病毒类似,容易透过细胞膜。其中,阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率,然而在体内,它迅速被血清清除,在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,这将导致高水平的毒性,因此,在很大程度上限制了其应用。由于阳离子脂质体的局限性,阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。 本试剂采用专利配方的阳离子聚合物为主要成分,可以与DNA形成稳定的复合物,保护DNA免受核酸酶的降解,在增加核酸稳定性的同时, 查看更多>
Origene中国区域代理艾美捷科技——cDNA/蛋白/抗体/转染试剂 发布者:艾美捷科技发布时间:2014-01-13 分享按钮 OriGene成立于1996年,立足于收集世界上最大的人全长cDNA克隆库,将其构建在统一的表达载体内,并使其商品化作为研究工具提供给全世界的科学家。随着人类基因组全测序的完成及以基因组研究为基础的研究工具的开发,使得人们可以通过系统生物学的研究,进行药物相关靶向的鉴定。OriGene的目标是提供大量全面... 查看更多>
转染试剂的比较和特点l 转染细胞广谱:转染几十种哺乳动物细胞和/或难转染细胞以及悬浮细胞l 转染形式多样:转染DNA、mRNA、siRNA、miRNA、shRNA以及共转染DNA/RNAl 转染技术优化提升:生物可降解聚合物的合成、增强型脂质体构建和PDCC优化技术等 转染试剂 ... 查看更多>
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针对广泛的细胞类型被引用最多的通用试剂 针对质粒传递的最有效的试剂 强效和低细胞毒性 针对siRNA/miRNA传送最有效的试剂 高效的gene knock-down 针对所有细胞株的高效电穿孔  Lipofectamine® 2000Learn more >  Lipofectamine® LTXLearn more >  Lipofectamine® RNAiMAXLearn more >  Neon® Trans... 查看更多>
高效、低毒性siRNA转染试剂,成功转染的细胞系包括:HeLa S3, HT-1080, HT-29, CHO K1, J774, A549, BxPC3, DU145, HeLa, H1299, MCF7, MDA-MB453, hMSC, SKBR3, H9C2, NIH/3T3, COS7, 786-0, DLD-1, GM5756T, H2122, HCC193, HCT116, Huh7, IMR-32, Jurkat, MS53, PANC-1, PANC-10, SK-OV-3, SKW6. 查看更多>
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原代细胞核酸转染仪所采用的技术是德国amaxa公司的Nucleofector™ 专利创新技术,其原理是采用独特的电场参数与细胞类型特异的转染溶液相结合的方法,直接将DNA转到细胞核内,即使是原代细胞(包括不分裂的血细胞或神经元),转染后2-4小时就能检测到转染基因的表达。转染效率高,操作简单方便。... 查看更多>
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脂质体的转染毒性是最大的,很明显,那么多的细胞死亡是由于转染的细胞毒性导致的。对于这一点我有两个建议,一个是减少DNA的用量,我一般做转染,对于任何细胞,只要是12孔板,一般都是用1ugDNA,这个量绝对够了。,因为质粒转染进入细胞的本质,和病毒感染没区别,质粒的各种元件会从宿主细胞内抢夺细胞机器大量开始转录翻译你的目的蛋白,在这个过程中会产生大量的没有正确折叠蛋白,这些异常折叠蛋白进一步引起ER stress导致细胞凋亡。因此你用DNA太多,本身就有细胞毒性。另外就是脂质体本身的毒性。事实上,对于293系的细胞系,最好用的是PEI这种东西。毒性小,转染效率高,一般对293系列的细胞系可以轻易达到80%。polyscience有粉末买,买回来后直接在分子纯度的水里配置成1ug/uL的溶液,和你的质粒按照1ug DNA/6ug PEI对293进行转染。
而且直接使用自制的PEI非常便宜,在293上远比商品化的脂质体要好。

另外,如果你们实验室确实钱多,不怕花钱,建议你取用Promega的FugenHD,那个转染效率比脂质体更好,而且毒性小,至于价格。。。。。。。。。。。也更高。。。。。。。。。

另外,你说漂浮的细胞有表到GFP,那个不一定是真的GFP,很多时候
洗板机的应用范围 123
小靥79532017-10-03
厂家推荐的体积,是维持ip2000 1uL + 培养基 50uL这个比例.这个只是个参考,或者起始比列. 在实际操作当中,你可以同时试一下增高,减小这个比例.看看哪个效果最好,以后就用你试的那个比例.
786-o cell用什么转染试剂
内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁(cellwall)上的特有成分,主要是脂多糖中的类脂A,在细菌被裂解时被释放出来,由于其化学结构和特性,在质粒的纯化过程中很容易混入质粒DNA一同提取出来。内毒素的存在会严重的影响质粒转染细胞的效率,此外会激活造血细胞(如B细胞、巨噬细胞等)的非特异免疫反应,造成实验的假阳性,所以转染级质粒的提取纯化必须去除内毒素。

我先开个头哈:

现今基因导入是生物技术实验的家常便饭,常用的方法无非是转染、病毒感染、电转这几种。

几乎所有做细胞转染的战友们都面临过这样的尴尬。

效率低,

效率低、

效率好低。(烦恼的事也要说三遍)

于是,我们就开始寻找各种各样的转染试剂,遂经蒸煮炸烤,百般试验,

运气好还能拣个宝,点儿背的那就一千个

为了广大细胞转染的战友,为了大家心中不再有那个“物种”,特开此贴,大家贡献一下资源、分享一下心得、或者吐槽一下心中的不忿,忘大家顶起,顶起,再顶起!!!


各位前辈好,小弟刚用罗氏的X-tremeGENEHPDNATransfectionReagent转染试剂转染了siRNA,发现出现了很多会动的小亮点,貌似是布朗运动,请问这是什么?

另外我看网上都说6小时换培养基,请问这个罗氏的也是一样的吗?如果需要换,可以加双抗吗?

谢谢各位帮助我的人了!!!

近期,上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofecttransfectionreagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(Engreen)进行了一次RNA转染比较。比较情况如下:

实验方法

转染试剂:Turbofecttransfectionreagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(EngreenBiosystemCo,Ltd)

待处理细胞:humanCD8+T细胞

1.针对Turbofect转染的方法

每孔培养体积均为100μL,细胞数目在105左右。

取0.5μLagomir,加入9.5μL无血清RPMI1640,充分混匀;

取0.2μLTurbofecttransfectionreagent和agomir稀释液充分混合。

转染复合物制备完成;混匀后室温下孵育15-20分钟,直接取10μL加入已铺好细胞的孔中,继续培养24h收取细胞,用PBS洗涤3次以上,以备RNA抽提。

转染Mix的配制:100nMago/N.C.:(0.5μLagomir+0.2μLTurbofect+9.3μL无血清的RPMI1640)×2.5=1.25+0.5+23.25

2.EntransterTM-R4000转染

每孔培养体积均为100μL,细胞数目在105左右。

取0.5μLagomir,加入9.5μL无血清RPMI1640,充分混匀,制成10μLagomir稀释液;

取0.25μLEntransterTM-R4000,然后加入9.75μL无血清稀释液体,充分混匀,制成10μLEntransterTM-R4000稀释液;

将EntransterTM-R4000稀释液和agomir稀释液充分混合(可用振荡器或加样器吹吸10次以上),室温静置15分钟。

转染复合物制备完成;

将20μL转染复合物加入孔中的细胞悬液中,前后移动培养皿,混合均匀;

转染后6h观察细胞状态,并更换培养基,继续培养24h后收取细胞,用PBS洗涤3次以上,以备RNA抽提。

转染Mix的配制:100nMago/N.C.:(0.5μLagomir+9.5μL无血清的RPMI1640)×2.5=1.25+23.75;Etranster稀释液:(0.25μLEtranster+9.75μL无血清的RPMI1640)×5=1.25+48.75(室温静置5分钟),取20μL至ago和N.C.管中,室温静置15分钟。

实验结果

结论:从目的miRNA表达水平的检测结果来看,转染24h后,英格恩生物公司(EngreenBiosystem)的EntransterTM-R4000(ago/NC:422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂(ago/NC:285870倍)。

讨论:从实验结果来看,英格恩生物公司(EngreenBiosystem)的EntranstenTM-R4000(ago/NC:422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂(ago/NC:285870倍)。EntransterTM-R4000是英格恩生物(EngreenBiosystem)最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA,而且针对mRNA等长链RNA优化。该试剂可将RNA导入多种细胞系,包括原代细胞和悬浮细胞。无论有无血清、抗生素存在均可获得很高的转染效率。


试剂方面,大致下面三个组分。DNA转染试剂制备复合物需要的基础培养基或者150mM氯化钠溶液。
如何选择siRNA转染试剂 123
天宇熞攀62017-10-03
Dharmacon
推荐做一个小样转染验证试验(设定一下梯度),没有问题就正常使用。
对重复性要求不高的试验,一般没有问题的,只不过可能需要增加一些转染试剂用量了。

为了避免这个问题,推荐收到货之后,进行适当分装,用多少,拿出来多少最好。
转染 123
selena21122021-08-03
最近要购买转染试剂,市场上现在转染试剂的品牌和名字可谓玲琅满目,不知道如何选择,最近有汉恒生物公司的销售向我推荐他们公司的Lipofiter转染试剂免费试用装,不知道有谁用过这个公司的转染试剂呢,效果怎么样?或者大家都是用过哪些转染试剂,觉得哪种比...
相关疾病:肿瘤癌症支气管哮喘EntransterTM-invivo是英格恩生物公司(EngreenBiosystemCo,...
FuGENE® 6,FuGENE® HD,Lipofectamine 2000这几个是用得很广泛的,其他的也有很多,根据用途来选。厚百holdbio:向左转|向右转