- GreatTaqPolymeraseperformanceatalowprice.
- Choiceofreactionbuffers,withorwithoutMgCl2.
- Non-proofreADIngPolymerase
FreeSampleAvailable
At$96for1000unitslistprice(quantitydiscountsavailable),EconoTaq’slowpriceiscoupledwithhighqualityandperformance.
QCspecificationsforEconoTaqarerigorous:
- Greaterthan99%purebySDSgelelectrophoresis(seeFigure1).
- NodetectableDNAcontaminationasdeterminedbyPCRusinggenericprimers.
- Nodetectableendonuclease(nicking)activity.Incubationof10UofEconoTaqDNAPolymerasewith1µgofsupercoiledpBR322DNAfor16hoursat70°Cresultsinnodetectableconversiontorelaxedorlinearformsbyagarosegelelectrophoresis.
- Nodetectableexonucleaseactivity.Incubationof10UofEconoTaqDNAPolymerasewith1µgofHindIII-cutlamBDaDNAfor16hoursat70°Cresultsinnosmearingofbandsonagarosegels.
EconoTaqPerformance
AsshowninFigures2and3Lucigen’sEconoTaqDNAPolymeraseperformsaswellas,orbetterthan,moreexpensiveTaqpreparationsfromseveralothersuppliersinroutinePCR.EconoTaqisaseffectiveinDNAamplificationasanotherstandardPCRenzyme,TflDNApolymerase(Figure4).Inthiscase,thebackgroundofnon-specificamplificationwasmuchlowerwithEconoTaq(compare“+”and“–“lanesforEconoTaqandTflinFigure4).EconoTaqDNAPolymerasealsooffershighlot-to-lotreproducibilityandreliABIlity(Figures2and4)
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Figure1.HighpurityofEconoTaqDNAPolymerase(SDSPAGE).Lane1,broadrangemolecularweightMarkers;Lane2,LucigenEconoTaqDNAPolymerase | Figure2.TaqDNApolymerasefromPromegaandNewEnglandBiolabswerecomparedtoLucigen’sEconoTaqDNAPolymerase(2differentlots)inamplifyingtheampicillingene(0.8kb)inapUC19vector.(–),noDNA.(+),DNAadded(40ng).MW,1kbladder. |
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Figure3.EconoTaqvs.AmpliTaq®(AppliedBiosystems)DNApolymeraseingenotyping.AllPCRreactionswereperformedinaRoboCycler96(Stratagene).Hip1genotypingwasperformedusingthefollowingPCRconditions:94°Cfor1min,35cyclesof94°Cfor30sec,62°Cfor60sec,72°Cfor90sec,and72°Cfor7min.Shh,CdoandGas1genotypingwereperformedusingthefollowingPCRconditions:94°Cfor2min,35cyclesof94°Cfor60sec,65°Cfor60sec,72°Cfor90sec,and72°Cfor7min.AllPCRreactionscontainedfinalconcentrationsof1µMofeachprimer,200µMdNTPs,1Xcresolredloadingdye,and1UoftheindicatedTaqpolymerase.SequencesforallPCRprimershavebeenpreviouslypublished(referencesavailable). |
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Figure4.PCRamplificationwasperformedunderstandardconditionsusingthreedifferentlotsofEconoTaqDNAPolymeraseandbuffer,orduplicatereactionswithTflDNApolymeraseandbuffer(Promega).Reactionscontainedprimersspecificforthe16SribosomalRNAgene,withBacillusgenomicDNA(+)ornoDNA(-)asatemplate(1450bpproductexpected). |
PleaseNote:
SomeapplicationsinwhichLucigen'sEconoTaqDNAPolymerasecanbeusedmaybecoveredbypatentsissuedandapplicableintheUnitedStatesandcertainothercountries.Becausepurchaseofthisproductdoesnotincludealicensetoperformanypatentedapplication,usersofthisproductmayberequiredtoobtainapatentlicensedependingupontheparticularapplicationinwhichtheproductisused.ThePCRprocessisthesubjectofEuropeanPatentNos.201,184and200,262ownedbyHoffman-LaRoche.ThosepatentsexpiredonMarch28,2006.ThecorrespondingPCRprocesspatentsintheUnitedStatesexpiredonMarch29,2005.Itisthesoleresponsibilityofthebuyertoensurethatuseoftheproductdoesnotinfringethepatentrightsofthirdparties.
ORDERINFORMATION
EconoTaqDNAPolymeraseisprovidedwithachoiceof10XReactionBufferwithMg++(“withMg++”);or10XReactionBufferwithoutMg++andaseparatetubeof25mMMgCl2(“separateMg++”).PleaseinquireforBulkpricing!ebiomall.com
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PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
恒温PCR和实时荧光定量PCR的不同，是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料（SYBR Green 或Taqman 探针等等）。以SYBR Green为例，这种染料可以结合在双链的DNA上，当PCR不断进行时，每一次退火生成的双链DNA也在增加，荧光染料结合也越多，荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头，可以定量检测荧光的强度，转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况。
荧光PCR更有优势，因为荧光PCR灵敏度高于恒温PCR，同样价格也高一些。
两步法，是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度，而且定量PCR的产物都很短，需要的时候都短，所以两步法更方便。三步法的话，花的时间长，不利于快速实验。
C代表的是cycle，循环数目，T代表的是threshold,阈值。
所以表达量越少的话，需要越多的循环才能扩增出来。也就是CT值越高
这样设想的前提是因为，普通Taq酶也具有5‘－3’外切酶活性，如果可以的话，与普通PCR相比，反应体系需要做什么样的改动呢？
用的是ABI的机器。
检测指标是：各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳，GoldView染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
原理：
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物，从而可进行绝对定量或者相对定量。
请教园友：
一般做mRNA表达的时候，需要注意提取的RNA中是否有DNA污染，或者通过设计跨内含子的引物来解决。那么，检测MmiRNA的时候，需要注意RNA中DNA污染的问题么？
标准品的荧光强度和已知的浓度作图，可以得到一条标准曲线。而待测样本的荧光强度测出以后，就可以在标准曲线上算出样本浓度了。
