
- Convenientformulations.
- Highestquality:>99%purity.
- TestedinPCR.
- Greatvalue!
Highestqualitydeoxynucleotides,2'-deoxynucleoside5'-triphosphates,atagreatvalue,formulatedforyourconvenience.
Thesenucleotidesarealsosuitablefor:
- sequencing
- nicktranslation
- CDNAsynthesis
- TdT-tailingreactions
- fill-inreactions
2.5mMdNTPMix,PCRGrade
Thisready-to-usedNTPMixisamixtureofallfournucleotides(dATP,dCTP,dGTP,dTTP),eachdissolvedinhighlypurifiedwaterataconcentrationof2.5mM,atpH8.3.TwomillilitersoftheMixisenoughfor500standard50µlEconoTaq®andTaqSelect™DNAPolymerasePCRreactions.Freesampleavailable.
10mMdNTPSet,PCRGrade
Thishigh-puritydNTPsetallowsyoutoformulateyourownPCRmix.Eachofallfournucleotides(dATP,dCTP,dGTP,dTTP),isprovidedinaseparatevial(750µleach),dissolvedataconcentrationof10mMinhighlypurifiedwater,pH8.3.
PLEASENOTE
SomeapplicationsinwhichLucigen’sdNTPscanbeusedmaybecoveredbypatentsissuedandapplicableintheUnitedStatesandcertainothercountries.Becausepurchaseofthisproductdoesnotincludealicensetoperformanypatentedapplication,usersofthisproductmayberequiredtoobtainapatentlicensedependingupontheparticularapplicationinwhichtheproductisused.ThePCRprocessisthesubjectofEuropeanPatentNos.201,184and200,262ownedbyHoffman-LaRoche.ThosepatentsexpiredonMarch28,2006.ThecorrespondingPCRprocesspatentsintheUnitedStatesexpiredonMarch29,2005.Itisthesoleresponsibilityofthebuyertoensurethatuseoftheproductdoesnotinfringethepatentrightsofthirdparties.
ORDERINFORMATION
The2.5mMdNTPMixisamixtureofallfournucleotides,eachdissolvedinhighlypurifiedwaterataconcentrationof2.5mM,atpH8.3.The10mMdNTPSetprovideseachnucleotideinaseparatevial(750µleach),dissolvedataconcentrationof10mMinhighlypurifiedwater,pH8.3.ebiomall.com






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PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
恒温PCR和实时荧光定量PCR的不同,是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料(SYBR Green 或Taqman 探针等等)。以SYBR Green为例,这种染料可以结合在双链的DNA上,当PCR不断进行时,每一次退火生成的双链DNA也在增加,荧光染料结合也越多,荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头,可以定量检测荧光的强度,转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况。
荧光PCR更有优势,因为荧光PCR灵敏度高于恒温PCR,同样价格也高一些。
请教园友:
一般做mRNA表达的时候,需要注意提取的RNA中是否有DNA污染,或者通过设计跨内含子的引物来解决。那么,检测MmiRNA的时候,需要注意RNA中DNA污染的问题么?
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物,从而可进行绝对定量或者相对定量。
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物,从而可进行绝对定量或者相对定量。
一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下:
对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。
首先算加样量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍,所以4处以2=2,最后的相对量是2倍。
几点注意:
1。必须确定扩增的特异性
2。 只有相同目标的CT值才能相减(扩增效率有可能不同)
3。 2的某次方只是理论值,实际扩增效率低于2。
4。 最好不用Syber Green
C代表的是cycle,循环数目,T代表的是threshold,阈值。
所以表达量越少的话,需要越多的循环才能扩增出来。也就是CT值越高

