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GenWay/HBV Quantitative Real Time PCR Kit/GWB-LRB014/25 tests
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GenWay/HBV Quantitative Real Time PCR Kit/GWB-LRB014/25 tests
品牌 / 
GenWay
货号 / 
GWB-LRB014
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Description:

InstrumentLegend

(I)LightCycler1.0(Internalcontrolcan"tbeusedforthissystem)

(II)LightCycler2.0

(III)PE5700,MJ-Opticon&othersinglecolorsystems

(IV)ABI7000,ABI7300,ABI7500,ABI7900,ABIStepOne,StepOneplus,MJ-Opticon2,MJ-chromo4,MX3000P,MX3005P,SmartCyclerII,Rotor-Gene6000,LightCycler480,CFX96,iCycleriQ4,iCycleriQ5&othermulti-colorsystems.

 

InstrumentsCertifiedForUse

III,IV

 

Description

HBVQuantitativeRealTimePCRKitisusedfortheprecisequantitativedetectionofHepatitisBvirusbyusingrealtimePCRsystem,providingreliablediagnosticresultforHepatitisB.HepatitisBVirus,knownasHBVforshort,isaDNAvirus,whichhasastongresistancetotheexternalenvironment.Itsrouteoftransmissionincludesbloodtransmission,iatrogenictransmission,mother-to-childtransmissionandsexualtransmission,amongwhichbloodtransmissionisthemostcommon.HBVhasamalignantnature,whichcouldbetransformedintocirrhosisorevenlivercancer.

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ViiA™ 7 实时定量PCR系统(Applied Biosystems) 2010年6月,ABI的实时定量PCR家族再添新成员——ViiA™ 7 实时定量PCR系统。ViiA™ 7实时定量PCR... 查看更多>
真核生物中,从个体的生长、发育、衰老、死亡,到组织的分化、凋亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答,本质上都涉及基因的选择性表达。高等生物大约有30 000个不同的基因,但在生物体内任意细胞中只有10%的基因得以表达,而这些基因的表达是按事件和空间顺序有序地进行着,这种表达的方式即 查看更多>
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The molecular events that lead to the perception of pain are a key research field in medicine and drug discovery. The opioid receptors modulate pain signaling 查看更多>
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有大神做过人外周血全血miRNA的提取及后续PCR实验的吗?目前课题实验遇到瓶颈,求助大神!!!是否miRNA的PCR验证在全血做不出?必须要用血浆或者血清?目前血浆、血清也有部分样本。。。。有大神指条明路吗?

半定量RT-PCR与定量RT-PCR的区别是半定量RT-PCR操作简便,可快速推测样品中特异mRNA的相对数量;而定量RT-PCB可实时定量,较半定RT-PCB更准确。

半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。
定量RT-PCR(quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,qRT-PCR)是在用一步法或两步法,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

半定量RT-PCR需要跑电泳,根据条带亮度的强弱来判断模板拷贝数的高低或者是表达量的高低,而定量RT-PCR则无需电泳可以实时监测整个PCR的全程并且由给出的Ct值及Standard Curve来判断gene拷贝数的高低。
Taq DNA聚合酶使用说明书123
姆姆EH172017-10-03
1单位(U)Taq DNA 聚合酶力定义74°C、30钟内性化马哈鱼精DNA作模板/引物10nmol脱氧核苷酸掺入酸容物质所需酶量图" class="ikqb_img_alink">

QPCR在实验室中已经非常普及,现在整理一些关于QPCR的相关资料上传,希望对大家有所帮助。

荧光定量PCR技术(FQ-PCR,也称为Real-timePCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。



荧光定量PCR技术原理及利用.pdf(1473.28k)
结果如图。A到E都是一个样本,A123是gapdh,后面共有18种引物。f到h是另一个样本,前三个是gapdh,后面是11种引物。结果是这样的没有起跳。。样本和引物之前做都没有问题。。做这次pcr,我只是在加样完毕到上机器之间有一个多小时在外面,前几十分钟在--20度冰箱。后20分钟在冷库解冻。放冷库的时候,用橡胶手套盖住遮光。不知道是不是这里出了问题。希望能有大神指点。
另外还有几个问题。就是跑出来的结果RFU居然有负值,这是怎么回事呢?几乎在0附近,但是在溶解曲线求导前的那个曲线。RFU又是从2400+开始下降的,这是为什么呢?


这个指的就是样本中原有目标DNA的数量。

在另外的一组管子中,加入已知拷贝数的DNA同时扩增,每个管子中加入的数量是不同的,但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。

PCR反应完成后,把已知拷贝数DNA的量和PCR荧光Ct值制成标准曲线,再把待测样本的CT值和该标准曲线比对,就可以得到样本中的起始拷贝数了
看你的预算了,国产的便宜,进口的贵。
国产的有上海宏石,枫岭,中山达安基因,上海科华生物,大约10-15万。
进口的有ABI公司的大约45万,罗氏诊断的大约40万,Bio-Rad的大约30万。

跑到还有半小时的时候,跳出一个对话框:“analysiscannotproceed:notenoughsamplesdefined”,最后做出来的结果有扩增曲线但是没有熔解曲线,请各位大神帮忙解释一下。

荧光定量pcr123
韦小西西2021-07-23
做了三个基因,一个是p38,第二个是glut,第三个是内参,分为四组,对照组,低中高组,每组四个副孔,这个扩增曲线怎么样?不太懂看曲线
怎么看荧光定量PCR的试剂盒好不好123
OneShine往圣生物2021-08-02

一般说来,应选用口碑较好的经过大量客户实验验证的荧光定量PCR试剂盒,因为只有选对了试剂盒才能够做成漂亮的实验结果来,特别是对于一些珍贵的样品更不能因为节约一些蝇头小利而糟蹋了样品本身。OneShineSybrGreenpreMix试剂盒在研发之初就考虑到了一般科研环境中方方面面的影响,例如我们就光照强度、光照时间对本产品的影响做了严苛的实验论证,得到1ml本产品盛装于1.5ml离心管中放置在2000Lux光照强度下可以保存12h,超过12h产品性能则会下降。

OneShineSybrGreenpreMix这款试剂盒除了价格适中外,还主要有以下优点:

1、适用于RealTimePCR反应,可以快速、准确地对目的基因进行定量检测。

2、在2×OneShineSybrGreenpreMix中,预先混有SybrGreen,PCR体系配制时只需入模板、引物、ddH2O即可,操作方便快捷。

3、含有更耐高温并持续稳定的DNAPolymerase,可以维持更多的循环数,提供了选择循环数更大的空间。更大的Ct值选择范围就意味着可以支持微量目的基因检测,检测范围fM-nM。

4、反应的Buffer更适合,使反应的基线更水平,无荧光污染信号。使线性期更陡峭,避免了Ct值的无效浮动。使平台期更平直。也确保了引物与模板能够更特异地结合。

5、SybrGreen更耐高温更足量,确保只要扩增反应在进行,目的DNA双链在增加,就有线性强度的荧光产生。

6、dNTPs更足量,确保反应有更高的平台期荧光信号。

7、Mg2+浓度更适合,确保线性期有爆发式的目的DNA片段合成,提高了线性期反应体系的扩增系数和线性期的长度。

8、更高的仪器适配性,SybrGreen染料可以被各大主流仪器的激发光所激发,产生明亮的荧光信号,有利于仪器对信号的捕捉和处理。

我们的产品与市面上目前常见的一种产品相比较有如下区别:

A公司的产品没有熔解温度,或者熔解温度太高。但是A公司的产品Ct值出现略早,这是因为A公司使用了一种小分子量的DNA聚合酶,这种酶与模板和引物的结合较快和较松散,但是扩增的效率和扩增的特异性就不能保证了,类似于温水煮青蛙不温不火的;这种酶还有一个弱点就是不耐冻融。我们使用的是Taq酶,是一种分子量较大的DNA聚合酶,这种酶与模板和引物结合比较慢,但是慢工出细活,这种酶的特异性较好,一旦激活便呈现爆发式的扩增,类似于不鸣则已一鸣惊人。我们产品熔解温度是A公司不可比拟的,线性范围和斜率也是A公司不可比拟的。详见下图:


如果有标准曲线,按照标准曲线计算。
一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下:
对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。
首先算加样量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍,所以4处以2=2,最后的相对量是2倍。

几点注意:
1。必须确定扩增的特异性
2。 只有相同目标的CT值才能相减(扩增效率有可能不同)
3。 2的某次方只是理论值,实际扩增效率低于2。
4。 最好不用Syber Green
NameHBVQuantitativeRealTimePCRKit
Storage-20°C
IntendedUseResearchUseOnly