定量pcr跑出了奇怪的结果，求大神指点
2021-08-08
问题描述：
结果如图。A到E都是一个样本，A123是gapdh，后面共有18种引物。f到h是另一个样本，前三个是gapdh，后面是11种引物。结果是这样的没有起跳。。样本和引物之前做都没有问题。。做这次pcr，我只是在加样完毕到上机器之间有一个多小时在外面，前几十分钟在--20度冰箱。后20分钟在冷库解冻。放冷库的时候，用橡胶手套盖住遮光。不知道是不是这里出了问题。希望能有大神指点。
另外还有几个问题。就是跑出来的结果RFU居然有负值，这是怎么回事呢？几乎在0附近，但是在溶解曲线求导前的那个曲线。RFU又是从2400+开始下降的，这是为什么呢？
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88675106qwe
用户
展开引用gezhigezhi 结果如图。A到E都是一个样本，A123是gapdh，后面共有18种引物。f到h是另一个样本，前三个是gapdh，后面是11种引物。结果是这样的没有起跳。。样本和引物之前做都没有问题。。做这次pcr，我只是在加样完毕到上机器之间有一个多小时在外面，前几十分钟在--20度冰箱。后20分钟在冷库解冻。放冷库的时候，用橡胶手套盖住遮光。不知道是不是这里出了问题。希望能有大神指点。另外还有几个问题。就是跑出来的结果RFU居然有负值，这是怎么回事呢？几乎在0附近，但是在溶解曲线求导前的那个曲线。RFU又是从2400+开始下降的，这是为什么呢？......没一个扩增的。都是二聚体。
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小夏子5
用户88675106qwe没一个扩增的。都是二聚体。请问你找到原因了吗我也遇到类似的问题
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小墨嘉
用户同问同问，我用的探针法，负值到了-2000，到底是什么原因啊，从来没遇见过负值
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gezhigezhi
用户小夏子5请问你找到原因了吗我也遇到类似的问题没有找到原因，不过后来也没有再出现这种情况了。
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