2XDirectFTAPCRMasterMix containsallthereagentsneededforquickamplificationofgenomicDNAfromdryblood/serum/salivaspotonFTAorothercards.Thismastermixcanbealsoappliedtodirectamplificationofexogenoustargetgenes,suchasvirus,bacteriaandparasitesfromthesamples.Themixisoptimizedwithouruniqueinhibitor-resistantDNApolymerasesandbufferforbestperformance. Thereisthe choiceofaninertgreendye inthemix,usedfordirectgelloADIng. ThePCRproductcanbedirectlyloadedontoagarosegelwithoutadditionofloadingdyeforelectrophoresis.
GCversionworksforGC-richandcomplextarget.
Highlight
- Timesaving: UnnecessaryDNAextractionorpre-lysisofsampleasothersimilarcommercialkits
- Convenientandflexibility: Onlyneedaddingprimersandsamplein2Xmix.Thesimilarkitinwhichtheenzymeispackedseparatelyisavailableaswell(Clickhere), soyoucantitrateenzymetofindthebestconcentrationforthetarget
- Highinhibitor-resistance: ResistancetoinhibitorsfrombothFTAcardandspecimen
- Specificity: GCversionworksfor>65%GCcontenttarget,increasesspecificity
- Simplyanalysis: DirectlyloadingproductsforelectrophoresisafterPCR
Applications
- Genotyping
- Mutationdetection
- Sequencing
- Pathogendetection
- Forensicidentification
DataSheet:2XDirectFTAPCRMasterMix
VitaNaviTechnolog是华盛顿大学BarnesWayne教授创办的一家专门从事Taq酶及其相关产品研发与销售的生物公司。BarnesWayne教授是国际上著名的Taq酶专家，也是长片段基因PCR扩增技术的发明人和专利所有人（1993，PNAS；U.S.Patent5,436,149）。20多年来，BarnesWayne教授始终致力于PCR聚合酶，研发了系列TaqDNA聚合酶产品，远销全球40多个国家，是目前国际上生产PCR聚合酶的主要供应商之一。美国VitaNaviTechnology公司研发的新型高耐受性DNA聚合酶为基因检测技术带来了根本性的革新，彻底解决了依赖于纯化的核酸DNA为模板进行PCR扩增这一瓶颈问题。 产品简介 Omni酶是从文库中筛选出来的具有极高耐受性的Taq或者Klentaq突变体，可以直接以全血、血清、土壤、牛奶、巧克力或奶酪等材料为模板一步扩增目的基因，避免了繁琐的核酸DNA提取过程 产品特征：1.对全血、血清、血浆、土壤、植物、巧克力、奶酪和牛奶中的抑制因子具极高的耐受性，可直接对样品进行PCR检测，无需DNA分离。2.可以耐受高达40%的全血，20%的血浆或血清。3.可以从人血液中一步扩增疟疾基因。4.Omni酶节省时间、降低成本.5.直接从微量样品中的扩增，避免样品提取而丢失或污染DNA。
一、Klentaq1/KlentaqLA?实例1：用KelntaqLA扩增大于20kb的大片段基因。??二、高耐受性(Inhibitor-Resistant)聚合酶：OmniTaq/OmniKlentaq产品特征：1.对全血、血清、血浆、土壤、植物、巧克力、奶酪和牛奶中的抑制因子具极高的耐受性，可直接对样品进行PCR检测，无需进行DNA分离纯化。2.可以耐受高达40%的全血，20%的血浆或血清，已应用于多种遗传病的分子诊断和临床检验。3.可用于法医、环境监测、农业、动植物检疫和临床诊断等领域。4.可以从人血液中一步扩增疟疾基因。5.与PCR增强剂结合使用时，其耐受性将进一步提高。6.使用Omni酶不仅节省时间、降低成本，而且实现了从微量样品中的扩增，避免因提取过程所致的DNA丢失或污染。实例2：用OmniTaq（OT）和OmniKlentaq（OKT）从肝素抗凝血液中一步扩增乙肝病毒基因。?实例3：用新突变的Omni酶从富含腐殖酸的人基因组中扩增1.1kb的CCR5基因。?实例4：用新突变的Omni酶从巧克力和黑胡椒中直接扩增基因。?三、热启动聚合酶(Hot-start)聚合酶：CesiumTaq/CesiumKlentaq产品特征：1.CesiumTaq和CesiumKlentaq是一种冷敏感的突变体，在室温条件下聚合酶的活性很低，当升高温度进入PCR循环时聚合酶的活性就全部释放出来，因而具有内置式热启动功能。2.与现有化学修饰或抗体封阻的热启动聚合酶相比，CesiumTaq和CesiumKlentaq的聚合酶活性更高，扩增效果更好。3.CesiumKlentaq具有热启动和高耐受性双重效果。实例5：用CesiumKlentaq扩增基因热启动效果比较?四、PCR增强剂（PCRenhancingcocktails,PEC）产品特征：1.联合使用PEC-1或PEC-2与高耐受性Taq酶（OmniTaqandOmniKlentaq）可以更好的克服样品中各种物质对PCR反应的抑制作用，进一步提高PCR扩增效率，简化PCR操作流程提高。2.PEC有助于从基因组中扩增GC含量高达80%的基因。3.PEC也可用于qPCR（SYBR和Taqmanprobe）。4.新研发的PCR增强剂PEC-3andPEC-4有助于从食品中扩增基因。?实例6：联合使用OmniTaqorOmniKlentaq及PCR增强剂（PEC）从不同类型的牛奶中检测沙门氏杆菌Inv基因。??实例7：联合使用OmniTaqorOmniKlentaq及PCR增强剂（PEC）从人的基因组DNA或全血中直接扩增3个高GC含量的基因。?五、各种特异性一步PCR试剂盒VitaNaviTech公司开发了系列一步法PCR和qPCR试剂盒，可以直接从样品中扩增目的基因。1.DirectBloodPCRKit：从血液中直接扩增目的基因实例8：使用DirectBloodPCRKit从全血中一步扩增CCR5基因
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一般说来，应选用口碑较好的经过大量客户实验验证的荧光定量PCR试剂盒，因为只有选对了试剂盒才能够做成漂亮的实验结果来，特别是对于一些珍贵的样品更不能因为节约一些蝇头小利而糟蹋了样品本身。OneShineSybrGreenpreMix试剂盒在研发之初就考虑到了一般科研环境中方方面面的影响，例如我们就光照强度、光照时间对本产品的影响做了严苛的实验论证，得到1ml本产品盛装于1.5ml离心管中放置在2000Lux光照强度下可以保存12h，超过12h产品性能则会下降。
OneShineSybrGreenpreMix这款试剂盒除了价格适中外，还主要有以下优点：
1、适用于RealTimePCR反应，可以快速、准确地对目的基因进行定量检测。
2、在2×OneShineSybrGreenpreMix中，预先混有SybrGreen，PCR体系配制时只需入模板、引物、ddH2O即可，操作方便快捷。
3、含有更耐高温并持续稳定的DNAPolymerase，可以维持更多的循环数，提供了选择循环数更大的空间。更大的Ct值选择范围就意味着可以支持微量目的基因检测，检测范围fM-nM。
4、反应的Buffer更适合，使反应的基线更水平，无荧光污染信号。使线性期更陡峭，避免了Ct值的无效浮动。使平台期更平直。也确保了引物与模板能够更特异地结合。
5、SybrGreen更耐高温更足量，确保只要扩增反应在进行，目的DNA双链在增加，就有线性强度的荧光产生。
6、dNTPs更足量，确保反应有更高的平台期荧光信号。
7、Mg2+浓度更适合，确保线性期有爆发式的目的DNA片段合成，提高了线性期反应体系的扩增系数和线性期的长度。
8、更高的仪器适配性，SybrGreen染料可以被各大主流仪器的激发光所激发，产生明亮的荧光信号，有利于仪器对信号的捕捉和处理。
我们的产品与市面上目前常见的一种产品相比较有如下区别：
A公司的产品没有熔解温度，或者熔解温度太高。但是A公司的产品Ct值出现略早，这是因为A公司使用了一种小分子量的DNA聚合酶，这种酶与模板和引物的结合较快和较松散，但是扩增的效率和扩增的特异性就不能保证了，类似于温水煮青蛙不温不火的；这种酶还有一个弱点就是不耐冻融。我们使用的是Taq酶，是一种分子量较大的DNA聚合酶，这种酶与模板和引物结合比较慢，但是慢工出细活，这种酶的特异性较好，一旦激活便呈现爆发式的扩增，类似于不鸣则已一鸣惊人。我们产品熔解温度是A公司不可比拟的，线性范围和斜率也是A公司不可比拟的。详见下图：
标准品的荧光强度和已知的浓度作图，可以得到一条标准曲线。而待测样本的荧光强度测出以后，就可以在标准曲线上算出样本浓度了。
国产的有上海宏石，枫岭，中山达安基因，上海科华生物，大约10-15万。
进口的有ABI公司的大约45万，罗氏诊断的大约40万，Bio-Rad的大约30万。
还需要反转录用的引物、定量PCR用的一对引物、荧光信号源（荧光染料或荧光标记的探针，看你用什么策略来做定量PCR）
报价要看你需要服务商提供什么服务，如果你只提供实验材料，要求服务商做以上全部工作，只检测一个指标（一个基因的表达水平变化），价格大约每个样品350-500元，多一个指标大约多90元。
一般至少做一组数据两个样品嘛，所以你按1000块一组样品预算吧。
两步法，是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度，而且定量PCR的产物都很短，需要的时候都短，所以两步法更方便。三步法的话，花的时间长，不利于快速实验。
